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Heterotópico Renal autotransplante em um modelo suíno: Um Protocolo Passo-a-Passo

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DOI:

10.3791/53765

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21 de fevereiro de 2016

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1Multi Organ Transplant Program, Department of Surgery, Toronto General Hospital, 2Division of Nephrology, The Hospital for Sick Children, 3Programa de Doctorat en Medicina, La Universitat Autónoma de Barcelona, 4Laboratory Medicine and Pathobiology, Toronto General Hospital, 5Department of Medicine, Toronto General Hospital, 6Departments of Surgery (Urology) & Physiology, Developmental & Stem Cell Biology, The Hospital for Sick Children

Neste artigo

Resumo

Modelos suínos de transplante de órgãos fornecem uma plataforma importante para estudar mecanismos de preservação de órgãos. Este artigo descreve um modelo heterotópico de autotransplante renal suíno, que permite investigar novas abordagens para melhorar o resultado do transplante usando enxertos renais marginais.

Resumo

O transplante renal é o tratamento de escolha para pacientes que sofrem de doença renal terminal. Oferece melhor expectativa de vida e maior qualidade de vida quando comparada à diálise. Embora as últimas décadas tenham visto grandes melhorias nos resultados dos pacientes após o transplante renal, a crescente escassez de órgãos disponíveis representa um problema grave em todo o mundo. Para expandir o pool de doadores, enxertos renais marginais recuperados de doadores de critérios estendidos (ECD) ou doados após morte circulatória (DCD) agora são aceitos para transplante. Para melhorar ainda mais o resultado pós-operatório desses enxertos marginais, a pesquisa deve se concentrar em novas abordagens terapêuticas, como técnicas alternativas de preservação, imunomodulação, transferência de genes e administração de células-tronco.

Estudos experimentais em modelos animais são a etapa final antes que as técnicas recém-desenvolvidas possam ser traduzidas para a prática clínica. O transplante renal suíno é um excelente modelo de transplante humano e permite a investigação de novas abordagens. A principal vantagem do modelo suíno é sua semelhança anatômica e fisiológica com o corpo humano, o que facilita a rápida tradução de novos achados para ensaios clínicos. Este artigo oferece um protocolo cirúrgico passo a passo para um modelo de autotransplante e destaca os principais fatores para garantir o sucesso experimental. Alojamento adequado pré e pós-operatório, anestesia atenciosa e técnicas cirúrgicas consistentes resultam em resultados pós-operatórios favoráveis. A ressecção do rim nativo contralateral oferece a oportunidade de avaliar a função do enxerto pós-transplante. A colocação de cateteres venosos e urinários e o uso de gaiolas metabólicas permitem uma avaliação mais detalhada. Para estudos de acompanhamento de longo prazo e investigação de técnicas alternativas de preservação do enxerto, os modelos de autotransplante são superiores aos modelos de alotransplante, pois evitam o viés de confusão representado pela rejeição e medicação imunossupressora.

Introdução

O transplante renal é o tratamento de escolha para pacientes com doença renal terminal, devido às menores taxas de morbidade e mortalidade associadas quando comparado à diálise 1-3. Apesar das grandes melhorias nos resultados dos pacientes após o transplante renal, a escassez de enxertos ainda representa um grande desafio em todo o mundo. O número de pacientes que aguardam um transplante renal excede em muito o número de órgãos disponíveis 4-6. Para aumentar o número de rins disponíveis para transplante e reduzir o tempo de espera do paciente, são necessárias mais fontes de enxertos renais.

Comumente, são utilizados enxertos renais de doadores de critérios padrão (SCD) e doadores de critérios estendidos (ECD) de doação após morte encefálica (DBD), bem como rins recuperados de doadores vivos (LDKT). Desde a década de 1990, um número crescente de enxertos renais tem sido recuperado em um cenário de doação após morte circulatória (DCD), para ampliar ainda mais o pool de doadores 7,8. No entanto, os enxertos renais DCD e ECD demonstram resultados aceitáveis, mas diminuídos após o transplante, dependendo de diferentes fatores, como idade do doador, tempos de isquemia quente e fria e a técnica de preservação utilizada 9-11. Assim, pesquisas adicionais são necessárias para melhorar o resultado dos pacientes que recebem enxertos renais marginais e aumentar ainda mais o pool de doadores.

O modelo suíno de transplante renal está bem estabelecido e fornece um cenário clínico importante para investigar abordagens inovadoras para a melhoria dos resultados do enxerto renal marginal. Em contraste com os rins de roedores e caninos, que são unilobulares, os rins suínos e humanos são multilobulares e anatomicamente semelhantes, principalmente no que diz respeito aos sistemas coletores arterial, venoso e urinário 12,13. Além disso, os rins suínos e humanos demonstram semelhanças na fisiopatologia da lesão de isquemia reperfusão (IRI), bioquímica e parâmetros imunológicos 14. Assim, o transplante renal suíno é adequado para investigar novos métodos de preservação de órgãos para enxertos renais marginais 15-17, modelar IRI humano 18, estudar vias imunológicas e tolerância ao aloenxerto 19, fornecer treinamento cirúrgico 20-22, testar novas terapias farmacológicas 23, implementar novos dispositivos médicos e estudar novos mecanismos imunológicos em xenotransplante 24-26.

As configurações de transplante renal suíno e humano não são completamente análogas. Este artigo enfoca detalhes técnicos importantes que facilitarão o estabelecimento bem-sucedido de um modelo de autotransplante renal. Alojamento pré e pós-operatório adaptado à espécie, administração de anestesia com monitoramento rigoroso e técnicas cirúrgicas combinadas são descritas no protocolo e demonstradas no vídeo. A ressecção do rim nativo contralateral oferece a oportunidade de avaliar a função do rim transplantado. A colocação de cateteres venosos e urinários e o uso de gaiolas metabólicas permitem uma avaliação mais aprofundada. Para estudos que visam investigar métodos alternativos de preservação do enxerto e mecanismos de IRI, os modelos de autotransplante são superiores aos modelos de alotransplante, pois evitam as complicações e o viés de confusão associados à rejeição e ao uso de medicamentos imunossupressores.

Protocolo

Todos os animais receberam cuidados humanos e todos os estudos que efectuados em conformidade com as políticas e diretrizes do Canadian Council on Animal Care. Todos os procedimentos foram realizados sob o uso de animais protocolos que foram aprovadas pelo Comité de Cuidados University Health Network Institucional Animal.

Nota: Uma vista geral esquemática do protocolo de estudo é apresentado na Figura 1.

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Figura 1. Protocolo do estudo. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

1. Os animais

  1. Use masculinos porcos Yorkshire (30 kg) neste protocolo.

2. Kidney Graft Retrieval

  1. Procedimento pré-operatório
    1. Casa do Yorkshir masculinoe porcos em uma instalação de pesquisa para pelo menos uma semana para aclimatar-los. Use injecção intramuscular de uma cefalosporina de terceira geração, tais como ceftiofur, durante 3 dias para reduzir o risco de infecções com Streptococcus suis e Salmonella. Jejuar os porcos para um mínimo de 6 horas antes da indução anestésica para prevenir a aspiração.
    2. Iniciar a anestesia do porco por uma injecção intramuscular de cetamina (20 mg / kg), atropina (0,04 mg / kg) e midazolam (0,3 mg / kg). Posteriormente, o transporte do animal a partir da instalação de alojamento para a sala de cirurgia (OR).
    3. Coloque o porco em decúbito dorsal sobre a mesa da OR. Permitir que o porco para respirar 2 L de oxigênio com 5% de isoflurano espontaneamente. Expor as cordas vocais com um laringoscópio e pulverizá-los com solução tópica de lidocaína a 2% para evitar laringoespasmo induzida por intubação. Depois de intubação com um tubo de 6,5 milímetros, bloquear a braçadeira com 3-5 ml de ar.
      Nota: capnometria confirma a positio corretan do tubo traqueal.
    4. Diminuir o gás isoflurano a 2,5%. Definir o ventilador para 14-16 respirações / min e o volume corrente de 10-15 ml / kg de peso corporal. Monitorar o porco perto. A frequência cardíaca e saturação de oxigênio são registradas por oximetria de pulso. Confirmar anesthetization adequada, frequência cardíaca reduzida (abaixo de 150 batimentos / min) e pressão arterial (sistólica abaixo dos valores de 100 mmHg), bem como ausência de movimentos de suíno (sem o uso de relaxantes musculares).
    5. Sob condições estéreis, introduzir um 9.5 Fr. lúmen único cateter permanente na veia jugular interna utilizando a técnica de Seldinger 27. Resumidamente, utilizam uma agulha para perfurar a veia. Após a introdução do fio-guia, substituir a agulha com o introdutor peel-away, seguido por substituição do fio com o cateter vascular. Fixar o cateter à pele utilizando uma sutura de seda 3-0 ou monofilamento não absorvível.
      1. Administrar 500 mg de metronidazole, 1 g de cefazolina, e 20 mg de pantoprazole. de Anúnciosministra 200 ml de solução de Ringer com lactato com dextrose a 5% (D5W) e 1 mL de citrato de fentanil por via intravenosa por hora durante toda a cirurgia. Aplicar pomada oftálmica veterinária nos olhos para evitar a secura e sob anestesia.
  2. Procedimento cirúrgico
    1. Seguindo a desinfecção e cobertura do campo cirúrgico estéril, faça uma incisão na linha média de 25 cm de comprimento. Insira um afastador. Cubra intestinos pequenos e grandes com uma toalha e colocá-los para o lado esquerdo para acesso ideal ao rim direito.
    2. Livre o ureter e do próprio rim direito a partir de qualquer tecido aderente utilizando o cautério.
    3. Dissecar a veia renal direita e artéria utilizando o cautério até a sua origem a partir da veia cava inferior e aorta, respectivamente, são livres. Para evitar o espasmo vascular arterial, administração de 30-65 mg de papaverina deve ser considerada.
    4. Após a dissecção completa renal, laço (seda, 3-0) e cortar o ureter distalmente. preparea bacia de gelo e um saco órgão estéril.
    5. Em primeiro lugar, fixar a artéria renal perto da aorta e, segundo, fixar a veia renal perto da veia cava usando braçadeiras dos vasos. Em seguida, ressecção do enxerto renal e imediatamente canular a artéria renal com uma cânula na artéria renal. Use 500 ml de solução gelada histidina-triptofano-cetoglutarato (HTK) para lavar o sangue. Armazenar o rim no gelo até o transplante.
    6. In situ, fechar a artéria renal restante com uma ligadura (seda, 2-0) ea veia renal com uma sutura em execução (prolene, 6-0).
    7. Depois de verificar a área dissecados para sangramento, fechar a parede abdominal com uma sutura de correr (monofios, 1) e a pele com seda 3-0 ou um fio de sutura de monofilamento não absorvível ..
  3. Procedimento pós-operatória
    1. Fixar a via subcutânea cateter venoso com uma sutura (seda, 3-0) e do túnel para as costas do porco para evitar a manipulação indesejada. Depois de colocar o porco propenso, suture (seda, 3-0) o cateter firmemente à pele.
    2. Desmamar o porco do ventilador e deixá-lo recuperar em sua área de habitação após a extubação. Administrar Ringer lactato por via intravenosa para a expansão do volume e administrar 0,3 mg de buprenorfina para analgesia. Não deixe um animal sem supervisão até que tenha recuperado a consciência suficiente para manter decúbito esternal.

3. Kidney Graft Transplantation

  1. Procedimento pré-operatório
    1. Anestesiar o porco usando injecção intravenosa de propofol (1-2 mg / kg de peso corporal) seguida de uma infusão contínua de propofol a uma taxa de 50-100 mg / h. Re-entubar o porco como descrito no passo 2.1.3 e 2.1.4 e definir o gás isofluorano a 3-4%.
    2. Administrar 1 g de cefazolina e 20 mg de pantoprazol iv Durante a cirurgia, usar o mesmo protocolo anestésico, conforme descrito no 2.1.4.
    3. Seguindo a desinfecção esterilizado, fazer um corte de 4 cm ao lado da traquéia. Dissecar a tissue para expor a artéria carótida. Passe uma pinça over-Holt e uma gravata de seda (2-0) em torno da artéria. Usar a técnica de Seldinger para introduzir um cateter de plástico para medir continuamente a pressão arterial durante toda a cirurgia. Alternativamente, técnicas de medição de pressão arterial não invasivos podem ser utilizados.
  2. Procedimento cirúrgico
    1. Após desinfecção estéril, reabrir a cavidade abdominal através do corte dos pontos de malha da pele e fáscia suturas, reintroduzir o afastador cirúrgico para expor a cavidade abdominal, e reposicionar o intestino para o lado esquerdo para permitir um melhor acesso aos vasos infra.
    2. Transplante de ponta para o lado do enxerto renal preservada para a veia cava infra-renal e aorta. Portanto, dissecar veia cava e aorta ao longo 5-8 cm acima da bifurcação ilíaca utilizando captadores e cauterização. Se possível, não perturbe os vasos linfáticos; se não for possível, feche-os com 5-0 prolene.
    3. Depois de completar a dissecção, verifique for sangramento e remover o tecido restante dos vasos. Certifique-se de que completa de aperto da veia cava e na aorta com uma braçadeira Satinsky é viável.
    4. Em seguida, ressecar o rim contralateral (esquerda). Para isso, posicionar o intestino para a direita; dissecar o ureter, a própria renal, veia renal, artéria renal e a partir de tecido aderente. Amarrar as embarcações ureter e sangue e ressecção do rim. Verifique se há sangramento.
    5. Reposicionar o intestino para a esquerda para expor a aorta infra-renal e veia cava. Injectar heparina (100 IU / kg de peso corporal) e aguardar durante pelo menos 2 min.
    6. Anastomose venosa:
      1. Utilize uma braçadeira para fixar Satinsky completamente a veia cava e fazer uma incisão fenda que corresponde ao tamanho da abertura da veia renal, utilizando uma lâmina 11. tesouras Pott pode ser usado para ampliar ainda mais a fenda.
      2. Após envolvendo o rim em um pano contendo gelo estéril, retire-a do gelo e posicioná-lo para o campo cirúrgico. Use dois double-armado 6-0prolene suturas para realizar um cranial e um ponto de canto caudal.
      3. Aproximar o rim, amarrar o canto superior e realizar uma sutura running usando 6-0 prolene, começando com a parede traseira. Depois de ter terminado 03/02, utilizar a outra extremidade do laço para completar o fio de sutura no lado da frente. Depois de amarrar os pontos cranianos, amarre os pontos no canto caudal.
      4. Posicionar uma braçadeira bulldog na veia renal e abra a braçadeira Satinsky. Verifique a anastomose para o sangramento.
    7. Anastomose arterial:
      1. Use o Satinsky apertar novamente para fixar completamente a aorta. Usar uma lâmina 11 para fazer uma incisão de fenda, correspondentes a abertura da artéria renal. Use um soco rodada 4,0 mm, para fixar uma abertura limpa.
      2. Use um 6-0 prolene para realizar a anastomose arterial, começando no lado do destinatário. Certifique-se de que o endotélio arterial é incluído em cada sutura para evitar uma dissecção. Enquanto isso, iniciar um gotejamento contínuo de 10 ml norepinephrINE (16 mg / 250 ml) diluída em 500 ml de lactato de Ringer e titulação para manter a pressão acima de 100 mmHg sistólica.
      3. Injectar verapamil intra-arterial antes da conclusão da anastomose arterial e administrar topicamente papaverina para o exterior do vaso para impedir que o vasoespasmo.
      4. Posicionar uma braçadeira bulldog na artéria renal e abra o grampo Satinksy. Verifique as anastomoses para o sangramento.
      5. Desmontar o rim a partir do pano e remover o gelo. Abrir o grampo buldogue venosa em primeiro lugar, seguido pela braçadeira buldogue arterial. Após a reperfusão, a produção de urina deve começar imediatamente.
      6. Use um pano para garantir uma posição favorável para o enxerto transplantado e manter um reperfusão homogênea.
    8. Ureteral Anastomose:
      1. Utilize uma tesoura para abrir a Pott ureter do enxerto e do receptor ao longo de um comprimento longitudinal de 0,5 cm.
      2. Use duas 6.0 poliéster, poli (p-dioxanona) fios de sutura para a ure lado-a-ladoanastomose teral. Executar uma Stich canto em cada um dos lados, em seguida, executar a parede traseira de uma maneira contínua em primeiro lugar, seguido pela parede frontal.
      3. Após a verificação de sangramento, remova o pano e enrole alguns do intestino delgado ao redor do rim para segurá-la na posição. Fechar a parede abdominal com dois monofios 1 suturas. Feche a pele com seda 3-0 ou sutura de monofilamento não absorvível.
      4. Manter a pressão sistólica acima de 100 mmHg continuamente titulando cuidadosamente a infusão de norepinefrina até o porco foi colocado em decúbito ventral.
  3. Procedimento pós-operatória
    1. Após o fechamento abdominal como mencionado acima, mantenha o porco aquecer usando uma almofada de aquecimento e cobertor de circulação de calor. Remova a linha arterial, fechar o buraco punção na artéria com um prolene stich 6-0 e fechar o local da incisão.
    2. Vire o porco na posição prona, parar o gotejamento norepinefrina e desmamar o porco do ventilador. albaixo o porco para recuperar em sua área de habitação e monitorá-lo de perto para garantir sua recuperação suave do procedimento. Recolher amostras de gases de sangue a cada hora através do cateter jugular implantado. Fornecer Ringer lactato ao volume substituto e administrar 0,3 mg de buprenorfina para analgesia.
    3. Após extubação, monitorar o porco de perto até que ele é capaz de beber espontaneamente. Não deixe um animal sem supervisão até que tenha recuperado a consciência suficiente para manter decúbito esternal. Não devolva um animal que foi submetido a uma cirurgia para a companhia de outros animais até que esteja totalmente recuperado.

4. pós-cirúrgica Follow Up

  1. Administrar 0,3 mg de buprenorfina iv todas as 8 horas durante pelo menos 2 dias após a cirurgia ou mais longo, se necessário. Rotineiramente administrar uma única dose profiláctica de antibióticos durante a cirurgia. No caso de sinais de infecção, administrar cefazolina 1 g duas vezes por dia IV e metronidazol iv uma vez por dia atémelhoria clínica ocorre. Administrar Ringer lactato até o porco bebe água suficiente. 1000 UI de heparina pode ser utilizada para bloquear o cateter para prevenir a coagulação.
  2. Recolher amostras de sangue venoso através do cateter jugular e amostras de urina para avaliar a condição clínica do porco e da função renal.
  3. Para a eutanásia, induzir a anestesia do porco com iv propofol (5-10 ml) e mantê-lo com isoflurano 5%. Entubar o porco como descrito acima. Após relaparatomy e coleta de amostra de tecido renal, induzir a parada cardíaca por injecção intravenosa de 40 Mval KCl.

Resultados

No que se segue, os resultados de experiências de autotransplante renal (n = 4) são demonstradas. Após a recuperação do enxerto inicial, os suínos se recuperaram em sua área de habitação. Enquanto isso, os enxertos de rim foram armazenadas em gelo durante um tempo médio de 7 h 35 min (± 18 minutos). Depois de reindução da anestesia e laparotomia repetição, os rins contralaterais foram ressecados e os enxertos armazenado frio transplantado heterotopicamente como descrito. Após o desmame do ventilador, os porcos foram recuperados da cirurgia e seguidos por 10 dias (ver Figura 1). Diariamente (1-4 dia de pós-operatório; vagem) ou a cada dois dias (6-10) pod amostras de sangue foram coletadas para realizar gás análises de sangue; para avaliar o azoto da função renal, creatinina sérica e ureia no sangue valores (BUN) foram estimados. Para efeitos de comparação, os resultados de um enxerto de rim allotransplanted são apresentados. Para imunossupressão, este porco recebeu ciclosporina 100 mg po e cortisone 250 mg ivbid A técnica utilizada foi a mesma que no protocolo de autotransplante; não foi aplicado tempo de isquemia quente.

Todos os porcos estavam em boas condições clínicas durante o período de acompanhamento. Os valores de creatinina e BUN no soro revelou o maior aumento no primeiro dia após a cirurgia (Crea 2,8 ± 0,7 mg / dL, BUN 25,3 ± 7 mg / dL) e diminuiu até vagem 10 (Crea 1,7 ± 0,4 mg / dL, BUN 10,7 ± 4 mg / dl) próximo aos valores basais iniciais. O enxerto renal allotransplanted demonstraram valores de creatinina e BUN mais elevados após boa função do enxerto inicial, quando comparado com os auto-enxertos, muito provavelmente devido à rejeição (Figura 2 e 3). Hemostasia ácido-base (Figura 4) e níveis de electrólitos (Figura 5) eram estáveis ​​sem intervenção. O exame histológico mostrou túbulo-intersticial preservado no rim autotransplantado (Figure 6), e inflamação intersticial difusa, tubulite, e glomerulite no rim allotransplanted (Figura 7).

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Figura 2. Valores de creatinina sérica. Valores de creatinina sérica (média e desvio padrão) para linha de base e 10 após a cirurgia. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

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Figura 3. Valores Serum pão. Os valores séricos de uréia (média e desvio padrão) para linha de base e 10 dias após a cirurgia. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

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Figura 4. hemostasia ácido-base. Hemostasia ácido-base (média e desvio padrão) para linha de base e 10 dias após a cirurgia. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

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Figura 5. níveis de eletrólitos. Níveis de eletrólitos (média e desvio padrão) para linha de base e 10 dias após a cirurgia. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

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Figura 6. A histologia (H &# 38;.. E), 100X túbulo-intersticial normal no rim autotransplantado 10 dias após a cirurgia Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

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Figura 7. Histologia (H & E), ampliação de 100X. Extensive intersticial inflamação, tubulite e glomerulite, consistente com a rejeição, no rim allotransplanted 10 dias após a cirurgia. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Discussão

O modelo de transplante de rim de porco proporciona uma oportunidade única para promover a área de transplante humano devido a semelhanças em aspectos cirúrgicos, fisiologia, bioquímica e imunologia 14.

Dependendo do objectivo do estudo experimental, o modelo de auto-transplante renal tem várias vantagens em comparação com o modelo de alotransplante. Embora vários grupos apresentam boa função do enxerto renal após o alotransplante 28, imunossupressão em suínos é um desafio, especialmente no transplante renal. Amostra de sangue pré-operatório análises para garantir a compatibilidade para antígeno leucocitário suína (SLA) são viáveis, mas caro e pouco prático 14. No pós-operatório, agentes imunossupressores propostas tais como tacrolimus e ciclosporina (inibidores da calcineurina, CNI) são administrados por via oral ou iv 28. A administração oral é impraticável, como porcos normalmente se recusam a engolir medica por via oralção. Além disso, obstruções intestinais pode evitar a absorção suficiente de medicamentos e manutenção dos níveis de drogas terapêuticas imunossupressoras. A infusão contínua de iv do CNI em animais ativos é tecnicamente exigente. bolus iv leva a altos valores de pico, que causam toxicidade. Assim, para a investigação de novas técnicas de preservação, o modelo de auto-transplante renal tem várias vantagens. Nos resultados representativos do enxerto renal allotransplantated demonstrado acima, um pico atrasada e aumento da creatinina e uréia indicam rejeição, o que foi demonstrado pela avaliação histológica.

O modelo porcino de autotransplante foi previamente usada para investigar novas técnicas de preservação 14,18,29. No entanto, os valores de creatinina e uréia no soro pós-operatória relatados de porcos autotransplantadas em um cenário de coração batendo variam consideravelmente, dependendo do sistema experimental 22,30 . O protocolo doador-coração batendo apresentamos aqui resulta em um baixo pico de creatinina sérica pós-operatória de 2,8 mg / dl (± 0,7) e BUN pico de 25,3 mg / dl (± 7,4). Estes resultados são comparáveis ​​com os baixos valores de pico apresentados por Hanto e colegas 28 e Snoeijs e colegas 31.

Para garantir um bom resultado após o transplante renal em um modelo de autotransplante suína, nós identificamos vários fatores técnicos importantes que minimizam a taxa de certas complicações. A utilização de uma solução de histidina-triptofano-cetoglutarato (HTK) reduz o risco de vasoespasmo devido ao seu menor teor de potássio, quando em comparação com Universidade de Wisconsin solução (UW). Para diminuir ainda mais o risco de vasoespasmo no ponto de reperfusão, o verapamil pode ser injectada na artéria renal, e papaverina pode ser administrado topicamente e durante a recuperação após a reperfusão. Além disso, um gotejamento contínuo de norepinefrina titulada para mantera pressão arterial sistólica acima de 100 mmHg garante uma reperfusão homogênea. É útil para manter esta pressão sanguínea, pelo menos, até que a porca está posicionado propenso. Além disso, o posicionamento do enxerto transplantado é importante para evitar dobras dos vasos sanguíneos recentemente anastomosados. Portanto, é útil para a ressecção do rim contralateral esquerda antes de costurar as anastomoses do enxerto para evitar extensa manipulação mecânica. Depois de terminar a anastomose do ureter, envolvendo intestino delgado em torno do enxerto transplantado assegura a sua posição após o fecho da parede abdominal. Complicações como obstrução intestinal devido a dobras do intestino raramente são observados, mas pode levar a complicações graves, incluindo íleo, perfuração intestinal e morte. No geral, técnica cirúrgica apurada, a anestesia atenta e cuidadosa monitorização durante o acompanhamento garantir uma boa função de resultado e enxerto clínica.

Arterial e venosa anastomoses pode ser performou usando diferentes técnicas. ortotópico colocação do enxerto permite anastomose extremidade-a-extremidade da artéria e veia renal. No caso de transplante heterotópico, o enxerto pode ser posicionado na fossa rim contralateral para anastomose extremidade-a-extremidade, para os vasos ilíacos, ou a aorta distai directamente. Transplante heterotópico com anastomoses a aorta e a veia directamente na técnica ponta-a-lado são preferidos neste modelo, uma vez que pode reduzir o risco de trombose e vasoespasmo 32. As variações anatômicas com bifurcações venosos muito cedo pode levar à necessidade de costurar duas anastomoses venosas separadas. Se a artéria ou veia é relativamente curto, o enxerto pode ser virado 180 ° para obter o comprimento dos vasos. Ureteral anastomose lado-a-lado pode conseguir bons resultados experimentais sem complicar estenoses ou perda urinária.

Em geral, o modelo suíno de transplante renal oferece vantagens em comparação com outros modelos animais. como described acima, existem certas semelhanças entre a suína e a configuração humano, o que permite a tradução relativamente rápido de novas técnicas para a prática clínica. A técnica do transplante é tecnicamente mais fácil em comparação com modelos de roedores. Além disso, através da colocação de cateteres venosos, amostras de sangue periférico podem ser facilmente recolhidos e processados ​​para uma investigação mais aprofundada. A coleta de urina permite uma avaliação mais aprofundada de lesão renal e função. Para recolher as amostras de urina, de um cateter percutâneo pode ser inserido na bexiga urinária. Para evitar a manipulação por parte do porco, a extremidade distai deve ser encapsulado por via subcutânea na parte de trás do animal. Uma outra opção para a recolha de urina é a utilização de gaiolas metabólicas, o que permite períodos de recolha prolongados para estimar a depuração da creatinina e concentração de biomarcadores adicionais na urina. Ultra-sonografia, tomografia computadorizada, ressonância magnética e imagens são possíveis. Doação após morte protocolos circulatórios pode ser imitada pela aplicação quenteisquemia antes da recuperação. Além disso, os porcos são relativamente fáceis de manusear se castrados para limitar o seu comportamento agressivo.

As desvantagens incluem os altos custos de compra animal, habitação, equipamento médico cirúrgico e outro, e mão de obra. Esses factores significam que não é possível incluir um grande número de animais em cada grupo de estudo. Além disso, em comparação com modelos de roedores, de um número limitado de referências estão disponíveis na literatura para suínos dados biológicos normativos. Como uma alternativa para a avaliação de novas técnicas desenvolvidas, tais como a novos métodos de preservação, outros grupos descreveram a reperfusão normotérmica ex vivo, como uma alternativa ao transplante renal 33,34. Esta técnica é mais fácil de executar e menos caro. No entanto, o transplante de enxerto renal padronizado fornece um modelo mais parecido com a prática clínica e permite longos períodos de seguimento. Portanto, ele serve para avaliar um enxerto mais realistamento.

Em conclusão, o modelo suíno de autotransplante renal heterotópico proporciona um cenário clínico importante investigar novas abordagens inovadoras para a melhoria dos resultados de enxerto renal. Em particular, este protocolo apresenta detalhes técnicos importantes que irão facilitar a criação bem-sucedida de um modelo de autotransplante renal e permite a rápida tradução de novas descobertas para ensaios clínicos.

Divulgações

Os autores não têm nada a divulgar.

Agradecimentos

Agradecemos ao Grupo Sorin (Milão, Itália), XVIVO Perfusion Inc. (Gotemburgo, Suécia) e Braun AG (Melsungen, Alemanha) por seu apoio. Agradecemos muito o apoio da Fundação John David e Signy Eaton.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
< equipamento > anestesia forte< / máquina > anestesia forte
OptimaxModuflexSN5180
Bomba de infusão 3.000SIMS Graseby LTD.Linha de bomba de
infusãoSmith Medical ASD Inc.21-0442-25
Cateter permanente intravenoso (9,5 Fr)Cook Medical CompanyG01865
Vapor de isoflurano 19,1Draeger Medical Canada Inc.N/A
Mallinckrodt, Tubo Traqueal, 6,5 mmCovidien Canada86449
Ventilador Gaymar Industries IncTP26E
, AV 800DRE Equipamento Médico40800AVV
Toque Quente, Sistema de Aquecimento do PacienteNellcor/ Covidien Canada5015300A
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Equipamento cirúrgico
Afastador abdominalMedite GmbH07-0001-00
Punção de aorta/veia 4,0 mm, redondoScanlan International Inc.1001-602
De Bakey, Periférico Atraumático, BraçadeiraAesculap Inc.FB463R
De Bakey-Beck, Veia Cava Atraumática, BraçadeiraAesculap Inc.FB519R
De Bakey, Mini-Bulldog Atraumático, StraightAesculap Inc.FB422R
De Bakey, Mini-Bulldog Atraumático, Aesculap CurvoInc.FB423R
De Bakey, braçadeira de coarctação atraumática, angularAesculap Inc.FB453R
#11Feather Safety Razor Co.089165B
Conector (1/4") com trava luer machoSorin Group Inc.AB1452
Conjunto de administração de fígado (linha de descarga)CardioMed Supplies Inc17175
Maxon, 1Covidien Canadá606173
Tubo de conexão de sucção Med-RxBenlan Inc.70-8120
Bolsa de ÓrgãosCardioMed Supplies Inc2990
Potts – De Martel, TesouraAesculap Inc.Cânula da artéria renal BC648R
, 1,6 "Sorin Group Inc.VC-11000
Sofsilk, 2-0Covidien CanadáS405
Sofsilk, 3-0Covidien CanadáS404
Satinsky, Braçadeira de Cava Supra-hepáticaAesculap Inc.FB605R
Tyco Healthcare Group LP8888501023
Surgipro II, 6-0Covidien CanadaVP733X
Valleylab, lápis de cauterizaçãoCovidien CanadaE2515H
Valleylab, Force TxValleylab Inc.
Valleylab, Eletrodo de Retorno do PacienteCovidien CanadaE7507
NomeEmpresaNúmero de CatálogoComentários
Medicação
Sulfato de Atropina 15 mg/30 mlRafter 8 Produtos238481
Buprenorfina 0,3 mg/mlRB Pharmaceuticals LDTN/A
Ceftiofur 3 mg/mlPfizer Canada Inc.11103
Cefazolina 1 gParceiros Farmacêuticos do Canadá Inc.
Citrato de fentanil 0,25 mg/5 mlSandoz Canada Inc.
Heparina 10.000 iU/10 mlSandoz Canada Inc.10750
Solução de histidina-triptofano-cetoglutarato (HTK)MethapharmCU001LBG
Isoflurano 99,9%, 250 mlPharmaceutical Partners of Canada Inc.
Cloridrato de Cetamina 5.000 mg/50 mlBimeda-MTC Animal Health Inc.
Ringer com lactato' s + 5% de dextrose 1 LBaxter CorporationJB1064
Lactato Ringer' s 1 LBaxter CorporationJB2324
Metronidazol 500 mg/100 mlBaxter Corporation870420
Midazolam 50 mg/10 mlPharmaceutical Partners of Canada Inc.
Norepinefrina 16 mg/250 ml Dextrose 5%Baxter CorporationN/A
Pantoprazol 40 mgSandoz Canada Inc.
Papaverina 65 mg/2 mlSandoz Canada Inc.9881
Propofol 1.000 mg / 100 mlPharmascience Inc.
Solução salina 0,9%, 1 LBaxter Corporation60208
Solu-Medrol 500 mgPfizer Canada Inc.
VerapamilSandoz Canada Inc.
Xilocaína Endotraqueal 10 mg/50 mlAstraZeneca2003767
, equipamento de anestesia SN300050447 Almofada de Terapia de Temperatura Lâmina de Dissecção Ponta de sucção 21615148022371382240434223192961231622429052306727224437923679632166739

Referências

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