Glaucoma de indução de Procedimento em um<em&gt; In Vivo</em&gt; Modelo de Rato e Whole mount-Retina Preparação

Resumo

O glaucoma é caracterizado por danos às células ganglionares da retina. A indução de glaucoma em modelos animais pode fornecer informações sobre o estudo desta doença. Aqui, descrevemos um procedimento que induz a perda de RGCs em um modelo de rato in vivo e demonstra a preparação de retinas de montagem inteira para análise.

Resumo

O glaucoma é uma doença do sistema nervoso central que actua nas células ganglionares da retina (RGCs). axônios RGC que compõem o nervo óptico carregam informação visual ao cérebro para a percepção visual. Danos para CGR e seus axónios leva a perda de visão e / ou cegueira. Embora a causa específica do glaucoma é desconhecida, o factor de risco principal para a doença é uma pressão intra-ocular elevada. procedimentos de indução de glaucoma em modelos animais são uma ferramenta valiosa para os investigadores que estudam o mecanismo da morte das CGR. Tal informação pode levar ao desenvolvimento de tratamentos neuroprotectores eficazes que podem auxiliar na prevenção da perda de visão. O protocolo no presente documento descreve um método de indução de glaucoma - como condições em um modelo de rato in vivo, onde 50 ul de 2 M solução salina hipertônica é injetado na plexo venoso episcleral. Descascamento dos vasos indica injecção bem sucedida. Este procedimento causa a perda de CGR para simular o glaucoma. Um mês seguinteinjecção, os animais são sacrificados e os olhos são removidos. Em seguida, a córnea, lente, e são removidos do vítreo para fazer uma ocular. A retina é então desenrolada a partir da parte posterior do olho e fixado em placas de Sylgard utilizando agulhas cacto. Nesta altura, os neurónios da retina pode ser corada para análise. Os resultados deste laboratório mostram que aproximadamente 25% dos RGCs são perdidos dentro de um mês do procedimento em relação aos controles internos. Este procedimento permite a análise quantitativa da morte das células ganglionares retinais num modelo de glaucoma em ratos in vivo.

Introdução

O glaucoma é um grupo de doenças dos olhos que afectam os neurónios da retina, em particular, as células ganglionares da retina ^1-2. Os axónios dessas células convergem para tornar-se o nervo óptico que transporta a informação visual para o cérebro onde a visão é percebida. Danos para CGR e seus axónios, por conseguinte, provoca defeitos visuais.

As principais características associadas a distúrbios de glaucoma são degeneração RGC e da morte, aumento da pressão intra-ocular (PIO) e escavação do disco óptico e atrofia. Estas características levam a perda de campo visual ou completa, cegueira irreversível. Atualmente, o glaucoma ....

Protocolo

Todos os procedimentos que utilizam indivíduos animais têm sido de acordo com as normas do Institute of Animal Care e Use Committee (IACUC) na Western Michigan University.

1. Os animais

1. Utilizar ratos do sexo masculino e feminino de 3 meses de idade no presente estudo.
2. Manter os animais em um 12 hr ciclo de luz / escuro, com livre acesso a comida e água.

2. Preparação de KAX Cocktail para anestesia animal

1. Dissolve-se 50 mg de xilazina (20 mg / ml) em 5 ml de cetamina (100 mg / ml) com 1 ml de acepromazina (10 mg / ml) e 3 ml de água destilada. Homogeneizar.
2. Ester....

Resultados

Esta seção ilustra os componentes do aparelho e procedimento utilizados para induzir condições de glaucoma-like em um modelo de glaucoma in vivo de ratos. Mostramos as ferramentas individuais e o equipamento usado para realizar uma injecção de solução salina hipertónica, que provoca um aumento na pressão intra-ocular. Mostramos a injecção no plexo venoso episcleral com o seu efeito de branqueamento característica e o aspecto turvo do que resulta da câmara anterior. Descrevemos t.......

Discussão

Este protocolo descreve um método de induzir condições de glaucoma semelhante em um modelo de rato in vivo em. Este procedimento utiliza uma injecção de solução salina hipertónica para induzir a formação de cicatrizes na malha trabecular ^{29, 32.} O desenvolvimento de tecido de cicatriz oclui o escoamento do humor aquoso, que aumenta a pressão na câmara anterior. Com a diminuição da vazão e pressão construir, a lente suspensa por ligamentos elásticos empurra de volta para a câmara vítrea. humor vítreo,.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Cloridrato de xilazina, mínimo 99%	Sigma, Life Science	X1251-1G
Injeção de cloridrato de cetamina, USP, 100mg/ml	Putney, Inc	NDC 26637-411-01	Frasco de 10 ml
Maleato de Acepromazina, 10mg/ml	Phoenix Pharmaceutical, Inc	NDC 57319-447-04, 670008L-03-0408 Frasco de	50 ml
Frasco de soro, 10 ml	VWR	16171319	Vidro de borosilicato
Seringa de insulina de 1 ml	Agulha VWR	BD329410	28 G
Cloreto de sódio	Sigma	S7653	Solução 2 M
Extrator de Microeletrodo	Polida Pesada Narishige	Group PP-830
	Sutter Instruments	B150-86-10HP	sem filamento,
agulha de seringa Microfil de 0,86 mm para enchimento de micropipetas	World Precision Instruments, Inc	Agulha Luer-Lock de calibre MF28G
18 gauge	seringa	1130421	Fisher Scientific
Tubo flexível de polietileno	Fisher Scientific	22046941	0,034 polegadas de diâmetro, aproximadamente 10 polegadas
Solução Optálmica de Cloridrato de Proparacaína, USP, 0.5%	Akorn, Inc	NDC 17478-263-12	15 ml  frasco estéril
Tesoura Curva	Ferramentas de Ciência Fina	14061-11
Microscópio	Leica	StereoZoom 4
Pomada Antibiótica Tripla	de		Fisher Scientific
	ciência fina	10004-13
Lâmina de bisturi #11	Ferramentas de Ciência Fina	10011-00
Placa de Petri Descartável de 60 mm x 15 mm	VWR	351007
Phosphate Buffered Saline 10x Concentrate	Sigma, Life Science	P7059-1L	1x diluição
Tesoura de Mola	Ferramentas de Ciência Fina	15009-08
Fórceps (2), Dumont # 5	Fine Science Tools	11251-30
Pipetas de transferência de 3 ml, polietileno, não estéreis	BD Biosciences	357524 ou 52947-948	Graduações de 1 e 2 ml 35
mm x 10 mm Placa de Petri de Fácil Pega	BD Biosciences	351008
Sylgard 184	VWR	102092-312
Agulhas de Cacto
Paraformaldeído	EMD Millipore	PX0055-3 ou 818715.0100	Feito em uma solução a 4%
Triton X-100	Sigma	T9284-100 ml	Feito em uma solução a 1% e 0,1%
Soro Fetal Bovino	Atlanta Biological	S11150	500 ml
Purificado Mouse Anti-Rato CD90/camundongo CD90.1	BD Pharmingen	Cat 554892	1:300 diluição
Alexa Fluor 594 anti-rato de cabra	Tecnologias de Vida	A11005	Diluição 1:300
Lâminas de Microscópio	Corning	2948-75x25
Glicerol	Sigma	G5516-100 ml	50% de glicerol para 50% de PBS, por peso
Tampa de Vidro	Corning	2975-225	Espessura 1 22 x 50 mm
Microscópio Confocal	Nikon	C2 Eclipse Ti

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