Procedimento para avaliar a eficiência de floculantes para a Remoção de partículas dispersas de extractos de plantas

Resumo

O procedimento de planejamento de experimentos apresentado aqui permite a avaliação de diferentes floculantes em termos de sua capacidade de agregar partículas dispersas em extratos vegetais, reduzindo assim a turbidez e os custos de processamento a jusante.

Resumo

As plantas são importantes para os seres humanos não apenas porque fornecem commodities como alimentos, rações e matérias-primas, mas cada vez mais porque podem ser usadas como plataformas de fabricação para produtos de valor agregado, como biofarmacêuticos. Em ambos os casos, os extratos líquidos de plantas podem precisar ser clarificados para remover partículas. A clarificação ideal reduz os custos de filtração e centrifugação, aumentando a capacidade e a longevidade. Isso pode ser alcançado com a introdução de polímeros carregados conhecidos como floculantes, que reticulam partículas dispersas para facilitar a separação sólido-líquido. Não existem modelos de floculação mecanicistas para misturas complexas, como extratos de plantas, portanto, modelos empíricos são usados. Aqui é descrito um procedimento de planejamento de experimentos que permite a triagem rápida de diferentes floculantes, otimizando a clarificação de extratos vegetais e reduzindo significativamente a turbidez. Os modelos preditivos resultantes permitem a identificação de condições de processo robustas e conjuntos de polímeros com propriedades complementares, por exemplo, floculação eficaz em extratos com condutividades específicas. Os resultados apresentados para extratos de folhas de tabaco podem ser facilmente adaptados a outras espécies ou tecidos vegetais e, assim, facilitarão o desenvolvimento de processos a jusante mais econômicos para commodities e produtos farmacêuticos derivados de plantas.

Introdução

As plantas são amplamente utilizados para produzir produtos alimentares, tais como sucos de frutas, mas eles também podem ser desenvolvidos como plataformas para a fabricação de maior valor produtos biofarmacêuticos ^1-3. Em ambos os casos, o processamento a jusante (DSP) geralmente começa com a extracção de líquidos a partir de tecidos, tais como folhas ou frutos, seguida pela clarificação dos extractos de partículas carregadas de ^4,5. Para a fabricação de produtos biofarmacêuticos, os custos de DSP podem ser responsáveis ​​por até 80% dos custos globais de produção ^6,7 e isso em parte reflete a alta de partículas carga presente em extratos preparados por métodos perturbadores, como a homogeneização baseada em lâmina ^8,9 . Embora a selecção racional de camadas de filtro para igualar a distribuição de tamanho de partícula no extracto pode aumentar a capacidade do filtro e reduzir os custos de ^10,11, a melhoria nunca poderá exceder o limite máximo da capacidade absoluta definida pelo número de partículas que deve ser retida porunidade de área de filtro para obter esclarecimentos.

O limite pode ser levantada, se menos partículas alcançam a superfície dos filtros mais finos no trem de filtração, e isto pode ser conseguido se partículas dispersas são misturados com polímeros conhecidos como floculantes que promovem agregação para formar flocos grandes ^12. Tais flocos pode ser retido mais a montante pelos filtros grossos e menos caros saco, reduzindo a carga de partículas de alcançar o mais finos e filtros de profundidade mais caros. Os polímeros devem ter perfis de segurança adequadas para as suas aplicações, por exemplo, para biofármacos eles devem estar em conformidade com as boas práticas de fabricação (BPF), e, normalmente, eles devem ter uma massa molar> 100 kDa e pode ser neutro ou carregado ^13. Considerando floculantes neutros actuam geralmente através de ligação cruzada partículas dispersas causando a sua agregação e a formação de flocos com diâmetros> 1mm ^11, polímeros carregados neutralizar a carga de dispersed partículas, reduzindo a sua solubilidade e assim causando a precipitação ^14.

A f loculação pode ser melhorado ajustando os parâmetros tais como pH ou a condutividade, e o tipo de polímero ou concentração, para combinar as propriedades do extracto ^15,16. Para extractos de tabaco pré-tratados com 0,5-5,0 g ^L-1 de polietilenimina (PEI), um aumento superior a duas vezes na capacidade do filtro de profundidade foi relatado num processo à escala piloto 100-G. O custo deste polímero é inferior a € 10 kg ^-1 pelo que a sua introdução no processo resultou em economia de custos de cerca de € 6.000 para filtros e consumíveis por lote ^{de 16} ou ainda mais quando combinado com ajudas filtração de base celulósica ^17. Mesmo assim, modelos preditivos são necessários para avaliar os benefícios económicos a priori de floculantes porque a sua inclusão pode exigir etapas de espera de 15-30 min ^16,18, resultando em mais custos de investimento para o armazenamentotanques. No entanto, não existem actualmente modelos mecanicistas disponíveis que podem prever o resultado de tais experiências, devido à natureza complexa de floculação. Portanto, uma abordagem de concepção de experiências-mais adequadas (DOE) ¹⁹ foi desenvolvido como descrito neste artigo. Um protocolo para o procedimento geral DoE foi recentemente publicada ^20.

Dispositivos de pequena escala estão agora disponíveis para o rastreio de alto rendimento de condições de floculação ^21. No entanto, estes dispositivos podem não realista simular as condições durante a floculação de extractos de plantas, porque as dimensões do vaso de reacção (~ 7 mm para os poços de uma placa de 96 poços) e as partículas ou flocos pode ser menor do que uma ordem de magnitude de intervalo. Isso pode afetar misturar padrões e, portanto, o poder preditivo do modelo. Além disso, pode ser difícil de reduzir os processos que envolvem precipitação devido às mudanças não lineares no comportamento de mistura e STA precipitadodade ^22. Portanto, este artigo descreve um sistema de triagem-top-escala de bancada com um rendimento de 50-75 amostras por dia, produzindo resultados que são escaláveis ​​do volume de reacção de 20 ml inicial para um processo em escala piloto 100 L ^16. Quando combinado com uma abordagem DoE, isso permite que os modelos de previsão a ser usado para otimização de processos e documentação como parte de um conceito de qualidade-by-design.

O método descrito abaixo também pode ser adaptado para biofármacos produzidos em processos baseados em cultura de células, onde floculantes também estão sendo considerados como uma ferramenta de redução de custos ^23. Ele também pode ser usado para modelar a precipitação de proteínas-alvo a partir de um extracto bruto, como parte de uma estratégia de purificação, como foi demonstrado para β-glucuronidase produzidas em canola, milho e soja ^24,25. Uma descrição detalhada das propriedades floculantes podem ser encontrados em outros lugares ^16,26 e é importante para assegurar que o polímero concentrções são ou não-tóxico ou abaixo dos níveis prejudiciais no produto final ^11.

Protocolo

1. Desenvolver uma estratégia experimental adequado

1. Identificar os parâmetros ambientais e de processo que são relevantes para o processo de floculação a ser estabelecida ou otimizado, ou seja, quais os factores que têm o efeito mais forte sobre floculação. Tipicamente, existem várias de tais parâmetros para uma abordagem recentemente descrita como corça ^{de 20} é necessária devido à falta de modelos mecanísticos.
   1. Selecione os parâmetros (fatores) com base em dados da literatura ^12, prévio conhecimento e experiência com o sistema. Factores típicos incluem pH, condutividade tampão, tempo de incubação e temperatura, bem como o tipo de polímero e a concentração ^15,16,27.
   2. Use as mesmas referências (ver 1.1) para definir intervalos significativos para cada fator numérico e os níveis de fatores categóricos.
   3. Definir os resultados experimentais (respostas) a ser monitorizado e utilizado para avaliar a eficiência de floculação. Dependendo do sistema, estepode ser turvação do filtrado ou sobrenadante, velocidade de sedimentação, o tamanho global ou a capacidade de um filtro posterior ^16,23,28-30.
   4. Assegurar os ensaios utilizados para medir as respostas são quantitativas, robusta e repetível / reproduzível para que os dados de alta qualidade resultante pode ser aumentada com experiências realizadas depois ou por outro operador.
2. Escolha um tipo DoE adequando o número de fatores a serem investigados e o grau de conhecimento já acumulado sobre o sistema. Use literatura disponível para identificar um tipo DoE adequado ^20.
   1. Escolha um design de triagem, se há pouca informação sobre o sistema de floculação a ser investigado, um grande número de parâmetros devem ser rastreados ou pouco se sabe sobre faixas significativas para os parâmetros. projetos de triagem típicos são projetos completos e fracionário. Incluir pontos centrais na concepção, se espera-se que os parâmetros a ter um impacto não-linear, por exemplo, Saturação acima de um certo limiar ^19.
   2. Selecione uma metodologia de superfície de resposta (RSM), por exemplo, centro de design composto (CCD) ³¹ ou óptima ^32,33, se apenas alguns fatores com faixas bem conhecidas precisam ser caracterizados com precisão.
3. Configure o DoE com software apropriado, garantindo um critério de qualidade a priori, como a fração de espaço de projeto são atendidas ^20.

2. Prepare as experiências de floculação

Figura 1: Extrato vegetal floculação fluxo de trabalho: escala de processo (esquerda) e escala de bancada (direita). Após a extracção de proteína com tampões aquosos, partículas dispersas de detritos celulares são agregados por adição de floculantes. Os agregados são então removidos por uma cascata de saco e a profundidade de filtragem e a capacidade de estesfiltros, juntamente com os turbidez do filtrado pode ser utilizado directamente para medir a eficiência de floculação.

1. Desenvolver um Experimental fluxo geral de trabalho (Figura 1).
   1. Usar um dispositivo de extracção que resulte na mesma distribuição de tamanho de partícula que o esperado (ou já observada) na escala de aplicação final, por exemplo, um homogeneizador especializado. Se possível, conceber um modelo em escala reduzida do extractor, como descrito para a homogeneização de folhas de tabaco ^10.
   2. Definir os volumes de extracto utilizado durante as experiências de floculação (aqui 20 mL). Seleccionar um volume que permite que um número representativo de partículas estar presente no vaso de reacção, por exemplo, experiências de floculação em alíquotas de 20 ml produziram resultados reprodutíveis e escalável para extractos de tabaco contendo ~ 7% [W / V] sólidos ³⁴ e os tamanhos de partículas de ~ 0,5 um a três milímetros ~ ^16.
   3. Projetar todas as operações de controlo e de pós-floculação para que they são representativas da escala de aplicação final, por exemplo, selecionar filtros com o mesmo comportamento de retenção de partículas como os usados ​​na produção em escala.
2. Cultivar as plantas de que os extratos serão derivadas.
   1. Usar a mesma linha planta, aqui Nicotiana tabacum cv. Petit Havana SR1, e condições de cultura que serão utilizadas durante a produção, conforme anteriormente descrito ^33.
   2. Se outras unidades populacionais de alimentação serão processados, preparar estes stocks de alimentação de modo que sejam representativas da escala de aplicação final, por exemplo, usar tampões autênticos, ter em conta quaisquer passos de diluição durante o processo e manter o pH antecipada e condutividade, aqui pH 7,5 e condutividade 30 ms cm ^-1.
3. Prepare filtração Utilities, dispositivos de controlo da turvação e Vasos de amostragem.
   1. Corte os materiais de filtro para, os tamanhos necessários aqui 15 x 15 cm ^2, se eles não estão prontos para nóse módulos. Certifique-se de todos os dispositivos de monitoramento e análise são funcionais e rotular todos os tubos de amostra.
   2. Mesmo que estes são tarefas simples, preparar esses itens em tempo para garantir que eles não vão causar interrupções durante os experimentos de floculação reais. Evitar atrasos porque pode interferir com os resultados dados que floculação é um processo dependente do tempo.
4. Preparar soluções floculante de Stock. CUIDADO: Use equipamentos de proteção individual adequados ao manusear floculantes, por exemplo luvas. Os materiais podem ser perigosas (etiquetas de perigo de acordo com a Europa UE 67/548 / CEE, 1999/45 / CE incluem N, Xi ou Xn). Evitar a poeira e consulte as folhas de dados de segurança. Trabalhar sob uma coifa.
   1. Escolha uma concentração de ações para cada floculante, aqui 80,0 g L ^-1 para os dois floculantes PEI que foram usados. Seleccione concentrações tão altas quanto possível para evitar a diluição da amostra ao adicionar o floculante, o que reduziria a Concentra partículação e, portanto, afetam a eficiência da floculação.
   2. Conta para qualquer pré-diluição que reflete formulação do fabricante do polímero, por exemplo, se o polímero já é fornecido como um aquoso a 50% [w / v] solução. soluções de floculante de 4-8% [W / v] foram encontrados para ser o mais adequado, até agora.
   3. Tendo em mente os pontos discutidos acima, certifique-se a concentração de floculante não gera uma solução altamente viscosa que inibe pipetagem, potencialmente causando erros porque a concentração de floculante final não está ajustado corretamente.
   4. Utilizar a mesma concentração de estoque para todos os floculantes se possível, porque isto irá facilitar a instalação de um esquema de pipetagem (2,5), reduzindo assim a probabilidade de erros.
   5. Ajustar o pH e a condutividade de cada solução de estoque floculante para coincidir com as condições de os extractos, aqui pH 4-10 e 15-55 condutividade mS cm ^{@ 1.} Prepare ações individuais para um único floculante se mais de um conjunto de condições de pH e / ou a condutividade é testado para esse polímero.
   6. Preparar soluções de floculantes recentemente, não mais do que 48 horas antes do uso. Embora a floculação pode ser induzida com estoques de polímero armazenados durante mais de 4 semanas, a eficiência pode diminuir devido à hidrólise do polímero de a valores de pH alto ou baixo. Consulte a documentação do fabricante para obter mais detalhes.
   7. Certifique-se de que os parâmetros seleccionados para o Departamento de Energia pode ser ajustada com precisão para cada amostra durante a experiência, por exemplo, assegurar que não banhos de aquecimento / arrefecimento disponíveis para ajustar as temperaturas de incubação, aqui 4 ° C, 20 ° C e 37 ° C. Se a mistura durante a floculação faz parte do experimento, garantir que o dispositivo de mistura é representativa da escala de aplicação final, em termos de parâmetros críticos, tais como entrada de energia.
5. Converter o Horário DoE em um esquema de pipetagem.
   1. Convertem-se as diferentes concentrações de floculação ser TESted em volumes da solução de reserva que serão adicionados às amostras de extracto: dividir as concentrações finais floculante pela concentração de ações e multiplicar pelo volume de amostra utilizada nos experimentos de floculação. Identificar o maior volume final resultante, por exemplo, se 20 ml da amostra é misturada com um máximo de 2 ml de solução floculante esta será de 22 ml.
   2. Calcular volumes de tampão necessário para manter o mesmo volume final em todas as alíquotas de floculação com base no maior volume de estoque floculante ser adicionado, por exemplo, se 0,75 ml de estoque floculante deve ser adicionada a uma amostra, em seguida, 1,25 ml de tampão é necessário para manter o volume final de amostra de 22 ml (2.5.1).
   3. Soma-se os volumes da solução de floculante para cada condição de polímero e floculação para calcular os volumes absolutos de solução estoque que são necessários para o Departamento de Energia.
6. Folhas da colheita de tabaco e preparar o extracto.
   1. Remova os seis top leaves (ou como muitos como indicado por nas instruções de processo) a partir de plantas de tabaco de uma idade apropriada, por exemplo, 6 semanas de idade, e transferir para um dispositivo de extracção adequado, tal como um homogeneizador ou parafuso de imprensa.
   2. Adicionar três volumes de tampão de extracção por grama de biomassa, por exemplo, 300 ml por 100 g, e misturar durante 8 minutos.
   3. Prepare extratos individuais com os amortecedores adequados se o pH e / ou condutividade diferentes estão sendo testados. Aqui, trata-se homogeneizar o material vegetal para 3 x 30 segundos em um liquidificador ou um espremedor ^34.
   4. Em alternativa, preparar o extracto de um modo que é representativa do processo sob investigação.
7. Alíquota da Extract e adicionar o buffer.
   1. Manualmente e agitar completamente o extracto durante todo o processo para assegurar que as amostras são homogénea com uma distribuição uniforme de partículas.
   2. Precisamente distribuir o extracto de entre os tubos de reacção pré-marcadas por decantação,aqui 20 ml em cada navio. Autónomo tubos de 50 ml simplificar a manipulação e são ideais para amostras de 20 ml.
   3. Adicionar o volume de cada tampão de extracção necessária para manter o volume final fixo para cada tubo de reacção individuais, usando uma pipeta apropriada.

3. flocular a extratos de plantas com diferentes Polymers

1. Pipetar o volume necessário de solução de floculante, aqui 0,1-2,0 ml, para as amostras sequencialmente, como indicado pela ordem de execução aleatória do DoE. Misturar bem cada amostra imediatamente depois da adição do floculante por intensa agitação manual, precisamente por 20 seg.
   1. Se necessário, ajustar o tempo de agitação para outras unidades populacionais de alimentação para assegurar uma mistura completa, mas estritamente garantir tempos de mistura consistentes para todas as amostras. Tenha em mente que prolongada de mistura pode causar o rompimento irreversível de flocos e de forma inconsistente força aplicada durante a agitação pode distorcer os resultados de floculação.
2. Opcional: Modificar o procedimento descrito acima para a aplicação simultânea de dois ou mais floculantes.
   1. Opção 1: Em vez de um único polímero adicionar uma mistura de dois ou mais floculantes, aqui PEI e quitosano. Use as combinações de floculante definidos no DoE. Incorporar a proporção e as concentrações absolutas dos polímeros como parâmetros individuais durante a configuração Doe (1.1).
   2. Opção 2: Adicionar dois ou mais polímeros sequencialmente ao extracto.
      1. Use as concentrações individuais de polímeros, o seu tipo, e o tempo de incubação entre cada adição ao extrato, como factores adicionais durante a instalação do DoE.
      2. Também usar esta abordagem para testar se a adição repetida de um único polímero pode melhorar a floculação. Utilize uma adição por passos para simular a adição lenta de um floculante, por exemplo, quatro passos, cada adição de 0,25 ml de 80 g da L ^-1 floculante para um volume de 20 ml durante 4 min pode imitar a adição de floculante comuma taxa de fluxo de 0,25 ml min ^-1.
      3. Em todos os casos, identificar um novo volume máximo da amostra final para esta configuração, adicionando o volume máximo de todos os floculantes para o volume da amostra, aqui ainda 22 ml, e recalcular as quantidades necessárias de soluções-mãe de floculação e tampões para o ajuste de volume, se necessário.
3. Incubar as amostras durante os tempos definidos na gama, tipicamente 3-30 min, para permitir a formação de flocos. Certifique-se de todas as outras condições de incubação, temperatura, por exemplo, são definidas de acordo com o DoE.
4. Observe e formação de flocos documento. Registar a evolução da formação de flocos, conforme necessário, por exemplo, como mm de flocos sedimentação por min medindo a altura dos sólidos sedimentados. Se necessário, prolongar a floculação por um período de tempo prolongado tal como durante a noite.
5. Filtrar o extracto floculada.
   1. Use os materiais de filtro preparado anteriormente (2,3) para esclarecer o extrato floculada após a adequadatempo de incubação por decantação as amostras floculadas através do material de filtro e para dentro de um tubo ou recipiente de reacção limpo.
      1. Não re-suspender os flocos resolvida antes de filtração e aplicar o extracto com a uma taxa de ~ 300 ml min ^-1 para o filtro, correspondente a 4/3 seg para uma amostra de 20 ml.
      2. Confirmar o desempenho do passo de filtração, se um material diferente é utilizado nas experiências de bancada em comparação com o processo final em termos de retenção de partículas, por exemplo por medição da distribuição do tamanho de partícula em ambos os tipos de amostras ^11.
   2. Analise-se o filtrado em termos de turbidez e / ou distribuição do tamanho de partículas usando dispositivos apropriados como necessários, por exemplo, um turbidímetro.
   3. Opcional: repetir a análise depois de tempos de incubação prolongados, por exemplo, 12-24 horas, para investigar a formação ou reforma dos flocos instáveis.
6. Analisar as amostras em termos do PrRespostas definida-e (1.1.3).
   1. Retirar amostras a partir dos filtrados e analisá-los para os parâmetros adicionais de resposta, por exemplo, as concentrações de diferentes proteínas alvo ou produtos valiosos.
   2. Opcional: Analisar o retido (principalmente de sólidos) para os mesmos parâmetros para fechar o balanço de massa do processo. Em particular, quantificar o efeito de floculantes sobre a recuperação do líquido, comparando os sólidos remanescentes depois de massa amostras são tratadas ou não tratadas com floculante.
7. Confirmar a qualidade dos dados e transferir os resultados para o software DoE.
   1. Procure por valores extremos nos dados de resposta coletados, por exemplo, valores inesperadamente elevados.
   2. Assegurar que todos os dados de resposta estão corretamente alinhados com as suas condições experimentais correspondentes.
   3. Transferir os resultados para o software DoE e certifique-se as ordens de execução padrão e randomizados não são misturados.

4. Avaliaro DoE

1. Use as ferramentas de análise de dados built-in do software DoE para desenvolver um modelo preditivo, como descrito anteriormente ^20.
   1. Selecione um modo de transformação de dados adequada, se necessário para facilitar a construção de modelos, aqui log _10. Uma proporção maior do que 10 para maior vs menor valor de resposta indica que uma transformação de dados pode ser necessária. Identificar a transformação mais adequado utilizando as ferramentas estatísticas adequadas, por exemplo, uma trama Box-Cox ^35.
   2. Escolheu um modelo básico que (i) se encaixa com o DoE seleccionado (1,2) e (ii) concorda com conhecimento prévio sobre o sistema sob investigação com base na análise de variância (ANOVA) ferramentas do software DoE, por exemplo, um polinômio de segunda ordem muitas vezes se encaixa melhor para o efeito observado do tempo de incubação do que um polinômio de primeira ordem.
   3. Retirar fatores insignificantes modelo, por exemplo p> 0,05, ou interações de fator de forma iterativa, desmarcando-los, oreby reduzindo a complexidade do modelo e aumentando seu poder preditivo.
   4. Confirmar a qualidade do modelo, comparando R ^2, R ² ajustado e previu R ² juntamente com o gráfico de probabilidade normal dos resíduos studentized, os resíduos-vs-run, previu-vs-real e Box-Cox parcelas ^36. Todos os valores de R ² deve estar dentro de uma gama de 0,2.
   5. Certifique-se de que o modelo final está de acordo com os pressupostos básicos da física e da termodinâmica, por exemplo, não há concentrações negativas estão previstas.
2. Use o modelo para prever as condições mais favoráveis ​​para o sistema sob investigação, aqui uma baixa turbidez.
   1. Selecione as respostas mais importantes e seus estados preferenciais, por exemplo, turbidez mínima. Combine estas selecções, maximizando a função de preferência ou ferramentas similares, que são built-in características de vários pacotes de software DoE ^36.
   2. Consoante a aplicação a que se destina of o modelo, selecione confirmação é executado para verificar as condições óptimas e / ou o poder preditivo do modelo, em geral, por exemplo, se as condições prevista para ser mais favorável não faziam parte do DoE inicial selecioná-los como experimentos de acompanhamento.

5. melhorar o modelo e verificar o poder preditivo

1. Limitar o espaço de design inicial para as condições de operação mais desejáveis, por exemplo, baixa turbidez na faixa de 0-1,000 unidades de turbidez nefelom�tricas (NTU), com base nas previsões do modelo (4.2).
2. Configurar uma nova DoE dentro destas gamas, incluindo apenas os fatores que foram identificados como significativo ou relevante (4.1.2)).
   NOTA: Um factor pode ser significativa em termos de análise de modelo, mas irrelevante para um processo, isto é o seu efeito sobre uma resposta é <1% comparado com o de outros factores.
3. Repita os passos 1-5,2 até que a qualidade das previsões do modelo coincide com os requiremenTS, por exemplo, o desvio padrão do modelo, tal como indicado pelo software é suficiente para a aplicação pretendida. Modificar a estratégia experimental, se necessário para estas iterações, por exemplo, usar apenas um floculante no refinamento.
4. Transferir e confirmar os resultados do modelo de escala até a escala piloto ou escala de produção final.

Resultados

A floculação do extracto de tabaco com diferentes polímeros

O método descrito acima foi utilizado com sucesso para desenvolver um processo para a floculação de extractos de tabaco durante o fabrico de um anticorpo monoclonal (o anticorpo de HIV-neutralizante 2G12) e uma proteína fluorescente (DsRed) (Figura 1) ^16, e uma vez que tenha sido transferida a outras proteínas incluindo lectinas, candidatos...

Discussão

O aspecto mais importante a considerar ao configurar um DoE para caracterizar a floculação de partículas é que o projeto deve, em princípio, ser capaz de detectar e descrever os efeitos esperados ou possíveis ^36,38, por exemplo, a influência do pH, tipo de polímero e concentração de polímero ^16. Portanto, é importante para avaliar a fracção do espaço de concepção (FDS) antes de iniciar as experiências reais. O FDS é a fracção do espaço experimental multidimensional (coberto pelos factores ...

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
2100P Turbidimeter	portátil Hach	4650000	Turbidímetro
2G12 anticorpo	Polymun	AB002	Anticorpo de referência
Biacore T200	GE Healthcare	28-9750-01	Dispositivo SPR
BP-410	Furh	2632410001	Filtro de saco
Catiofast VSH	BASF 79002360		Agente
floculanteCentrífuga 5415D	Eppendorf	5424 000.410	Centrífuga
Tubo de centrífuga 15 ml	Labomedic	2017106	Tubo de reação
Tubo de centrífuga 50 ml autônomo	Labomedic	1110504	Tubo de reação
Chitosan	Carl Roth GmbH	5375.1	Agente floculante
Design-Expert(R) 8	Stat-Ease, Inc.	n.a.DoE	software
Fosfato dissódico	Carl Roth GmbH	4984.3	Componente de mídia
Ferty 2 Mega	Kammlott	5.220072	Fertilizante
Forma -86C ULT freezer	ThermoFisher	88400	Freezer
Greenhouse	n.a.n.a.Para		cultivo de plantas
Grodan Rockwool Cubes 10 x 10 cm	Grodan	102446	Rockwool block
HEPES	Carl Roth GmbH	9105.3	Componente de mídia
K700P 60D	Pall	5302305	Camada de filtro de profundidade
KS50P 60D	Pall	B12486	Camada de filtro de profundidade
Miracloth	Labomedic	475855-1R	Pano de filtro
MultiLine Multi 3410 IDS	WTW	WTW_2020	medidor de pH / medidor de condutividade
Osram cool white 36 W	Osram	4930440	Fonte de luz
Phytotron	Ilka Zell	n.a.Para	cultivo de plantas
Polymin P	BASF	79002360	Agente floculante
POLYTRON PT 6100 D	Kinematica	11010110	Dispositivo de homogeneização com ferramenta de lâmina personalizada
Proteína A	Life technologies	10-1006	Proteína de ligação ao anticorpo
Cloreto de sódio	Carl Roth GmbH	P029.2	Componente de mídia
Sinergia HT	BioTek	SIAFRT	Leitor de placas de fluorescência
TRIS	Carl Roth GmbH	4855.3	Componente de mídia
Tween-20	Carl Roth GmbH	9127.3	Componente de mídia
VelaPad 60	Pall	VP60G03KNH4	Caixa de filtro
Zetasizer Nano ZS	Malvern	ZEN3600	Medição de distribuição de tamanho de partícula DLS