Descrevemos um protocolo para prevenção dos efeitos do estresse térmico em ratos por pré-tratamento oral com bactérias benéficas. Este protocolo pode ser modificado e usado para várias vias de administração e para análise de diferentes compostos.
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Artigo de método
Descrevemos um protocolo para prevenção dos efeitos do estresse térmico em ratos por pré-tratamento oral com bactérias benéficas. Este protocolo pode ser modificado e usado para várias vias de administração e para análise de diferentes compostos.
Este estudo foi desenhado para avaliar o efeito protetor da estirpe Bacillus subtilis contra as complicações relacionadas ao estresse térmico. Trinta e dois ratos Sprague-Dawley foram usadas neste estudo. Os animais foram tratados por via oral duas vezes por dia durante dois dias com B. subtilis estirpe BSB3 ou PBS. No dia seguinte, após o último tratamento, cada grupo foi dividido e dois grupos experimentais (tratados com um PBS e tratadas com um B. subtilis) foram colocados a 45 ° C durante 25 min. Dois grupos de controlo permaneceu por 25 min à temperatura ambiente. Todos os ratos foram sacrificados e diferentes parâmetros foram analisados em todos os grupos. Os efeitos adversos do estresse por calor são registrados pela diminuição da altura das vilosidades e espessura total da mucosa do epitélio intestinal; translocação de bactérias a partir do lúmen; vesiculação aumento de eritrócitos e elevação dos lipopolissacáridos (LPS) de nível no sangue. A eficácia protectora do tratamento é avaliada por prévenção destes efeitos secundários. O protocolo foi definido acima para o tratamento oral de ratos com bactérias para a prevenção de complicações de stress de calor, mas este protocolo pode ser modificado e utilizado para outras vias de administração e para a análise de compostos diferentes.
Diferentes estressores afetam a saúde humana e animal. A temperatura é um dos fatores mais estressantes, causando doenças crônicas, agudas e até letais1. Alterações na morfologia intestinal e perda da integridade da barreira intestinal após estresse térmico foram documentadas em muitos casos2,3. Essa barreira protetora é responsável pela defesa contra a translocação de bactérias intestinais e suas toxinas, em particular os lipopolissacarídeos (LPS), do lúmen para a circulação interna4,5. A estabilidade da microbiota intestinal influencia significativamente a função da barreira intestinal, a resposta imune do hospedeiro e a tolerância à....
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Todos os procedimentos experimentais foram aprovados pelo IACUC da Universidade de Auburn, Auburn, Alabama.
1. Preparação de Meios de Cultura, pratos e Cultura bacteriana
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A temperatura corporal médio dos animais antes e imediatamente após o estresse térmico foi de 36,7 ± 0,07 o C e 40,3 ± 0,17 o C, respectivamente (P <0,05). A exposição de ratos a calor (grupo 3), resultou na inibição significativa da altura das vilosidades da mucosa e espessura total (Figuras 2, 3). A administração oral de tensão BSB3 antes protegidos estresse intestino do efeito nocivo do calor.
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A exposição a resultados de alta temperatura em condições graves de saúde 29. Prevenção e detecção precoce de complicações relacionadas ao estresse por calor são de importância vital 30. O protocolo apresentado pode ser usado para avaliar a eficácia de várias abordagens para a prevenção do stress térmico efeitos adversos.
Passos críticos dentro deste protocolo incluem: o processo de tratamento de calor (45 ° C, 25 min); a utilização de mate.......
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Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.
Este trabalho foi apoiado pelo fundo FOP 101002-139294-2050 da Universidade de Auburn.
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| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Solução salina tamponada com fosfato (PBS) | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO | P4417 | |
| Álcool Etílico | Pharmco products Inc. Brookfield, CT, EUA | 64-17-5 | |
| Placas de ágar | VWR | 97064-334 | |
| Placas de ágar MacConkey | VWR | 470180-742 | |
| Placas de ágar sangue 5% | VWR | 89405-024 | |
| Placa de ágar sangue Brucella com hemin e vitamina K | VWR | 89405-032 | |
| Bouin' s Fixative | Electron Microscopy Sciences, Hatfield, PA, USA | 15990 | |
| IL-10 Rat ELISA kit | Invitrogen, Camarillo, CA, USA | KRC0101 | |
| IL-1beta Rat ELISA Kit | Invitrogen, Camarillo, CA, USA | KRC0011 | |
| IL-6 Rat ELISA Kit | Invitrogen, Camarillo, CA, USA | KRC0061 | |
| INF-gamma Rat ELISA Kit | Invitrogen, Camarillo, CA, USA | ||
| Kit ELISA de rato TNF-alfa | Invitrogen, Camarillo, CA, EUA | Kit ELISA LPS de | |
| NeoBioLab, MA, EUA | Câmara Ambiental RL0275 | ||
| 6020-1 | Caron, Marietta, OH, EUA | Centrífuga 6020-1 | |
| Beckman Coulter, Indianápolis, IN, EUA | Optima L-90K | ||
| Ultra Centrifuge | |||
| Light | CitoViva Technology Inc., Auburn, AL | ||
| Contador de colônias | Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, EUA | RE-3325 | |
| Freezer | Haier, Brooklyn, NY, EUA | HCMO50LA | |
| Ultra microplaca leitor | Bio-Tek Instrument, Winooski, VT, USA | ELx 808 | |
| Auto Strip Washer | Bio-Tek Instrument, Winooski, VT, USA | ELx50 | |
| Pipetas | Gilson, Pipetman, França | P100, P200, P1000 | |
| C24 Incubadora | Shaker New Brunswick Scientific, Enfield, CT, USA | C24 | |
| Rocking Shaker | Reliable Scientific, Inc., Nesbit, MS, USA | 55 | |
| placas de Petri | Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, USA | 875713 | 100 mm x 15 mm |
| SterilGard III Advance | The Baker Company, Sanford, ME, USA | SG403 | |
| Frascos de cultivo de cultura | Corning Incorporated, Corning, NY, USA | 4995 | Frascos Erlenmeyer PYREX 250 ml |
| Espectrômetro óptico Genesys 20 | Thermo Scientific, Waltham, MA, EUA. | 4001 | |
| Sony DXC-33 Câmera de vídeo | Sony | ||
| Richardson lâmina de teste | Electron Microscopy Science, Hatfield, PA, USA | 80303 | |
| Sistema de purificação de água Millipore | Direct-Q | ||
| Image-Pro Plus software | Media Cybernetics, MD, USA | ||
| Triple Beam Balance | OHAUS Corporation, Parsippany, NJ, EUA | ||
| Homogeneizador de tecidos, Dounce | VWR | 71000-518 |
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