Prevenção de estresse térmico efeitos adversos em ratos pela<em&gt; Bacillus subtilis</em&gt; Strain

Resumo

Descrevemos um protocolo para prevenção dos efeitos do estresse térmico em ratos por pré-tratamento oral com bactérias benéficas. Este protocolo pode ser modificado e usado para várias vias de administração e para análise de diferentes compostos.

Resumo

Este estudo foi desenhado para avaliar o efeito protetor da estirpe Bacillus subtilis contra as complicações relacionadas ao estresse térmico. Trinta e dois ratos Sprague-Dawley foram usadas neste estudo. Os animais foram tratados por via oral duas vezes por dia durante dois dias com B. subtilis estirpe BSB3 ou PBS. No dia seguinte, após o último tratamento, cada grupo foi dividido e dois grupos experimentais (tratados com um PBS e tratadas com um B. subtilis) foram colocados a 45 ^° C durante 25 min. Dois grupos de controlo permaneceu por 25 min à temperatura ambiente. Todos os ratos foram sacrificados e diferentes parâmetros foram analisados ​​em todos os grupos. Os efeitos adversos do estresse por calor são registrados pela diminuição da altura das vilosidades e espessura total da mucosa do epitélio intestinal; translocação de bactérias a partir do lúmen; vesiculação aumento de eritrócitos e elevação dos lipopolissacáridos (LPS) de nível no sangue. A eficácia protectora do tratamento é avaliada por prévenção destes efeitos secundários. O protocolo foi definido acima para o tratamento oral de ratos com bactérias para a prevenção de complicações de stress de calor, mas este protocolo pode ser modificado e utilizado para outras vias de administração e para a análise de compostos diferentes.

Introdução

Diferentes estressores afetam a saúde humana e animal. A temperatura é um dos fatores mais estressantes, causando doenças crônicas, agudas e até letais¹. Alterações na morfologia intestinal e perda da integridade da barreira intestinal após estresse térmico foram documentadas em muitos casos^2,3. Essa barreira protetora é responsável pela defesa contra a translocação de bactérias intestinais e suas toxinas, em particular os lipopolissacarídeos (LPS), do lúmen para a circulação interna^4,5. A estabilidade da microbiota intestinal influencia significativamente a função da barreira intestinal, a resposta imune do hospedeiro e a tolerância à....

Protocolo

Todos os procedimentos experimentais foram aprovados pelo IACUC da Universidade de Auburn, Auburn, Alabama.

1. Preparação de Meios de Cultura, pratos e Cultura bacteriana

1. Inocular 10 ml de caldo nutriente num frasco com uma única colónia de cultura BSB3 Bacillus subtilis, cultivadas durante a noite numa placa de agar nutriente.
2. Adicione 500 ml de meio de esporulação ¹⁹ (por litro: Bacto Caldo Nutriente, 8 g; 10% (w / v) de KCl, 10 mL; 1,2% (w / v), MgSO ₄ x 7H ₂ O, 10 mL; agar, 15 g) e autoclave a 121 ^° C durante 20 min. Deixar arrefecer até 50 ^° C e adicione as seguintes sol....

Resultados

A temperatura corporal médio dos animais antes e imediatamente após o estresse térmico foi de 36,7 ± 0,07 ^o C e 40,3 ± 0,17 ^o C, respectivamente (P <0,05). A exposição de ratos a calor (grupo 3), resultou na inibição significativa da altura das vilosidades da mucosa e espessura total (Figuras 2, 3). A administração oral de tensão BSB3 antes protegidos estresse intestino do efeito nocivo do calor.

Discussão

A exposição a resultados de alta temperatura em condições graves de saúde ^29. Prevenção e detecção precoce de complicações relacionadas ao estresse por calor são de importância vital ^30. O protocolo apresentado pode ser usado para avaliar a eficácia de várias abordagens para a prevenção do stress térmico efeitos adversos.

Passos críticos dentro deste protocolo incluem: o processo de tratamento de calor (45 ^° C, 25 min); a utilização de mate.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Solução salina tamponada com fosfato (PBS)	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO	P4417
Álcool Etílico	Pharmco products Inc. Brookfield, CT, EUA	64-17-5
Placas de ágar	VWR	97064-334
Placas de ágar MacConkey	VWR	470180-742
Placas de ágar sangue 5%	VWR	89405-024
Placa de ágar sangue Brucella com hemin e vitamina K	VWR	89405-032
Bouin' s Fixative	Electron Microscopy Sciences, Hatfield, PA, USA	15990
IL-10 Rat ELISA kit	Invitrogen, Camarillo, CA, USA	KRC0101
IL-1beta Rat ELISA Kit	Invitrogen, Camarillo, CA, USA	KRC0011
IL-6 Rat ELISA Kit	Invitrogen, Camarillo, CA, USA	KRC0061
INF-gamma Rat ELISA Kit	Invitrogen, Camarillo, CA, USA
Kit ELISA de rato TNF-alfa	Invitrogen, Camarillo, CA, EUA	Kit ELISA LPS de
	NeoBioLab, MA, EUA	Câmara Ambiental RL0275
6020-1	Caron, Marietta, OH, EUA	Centrífuga 6020-1
	Beckman Coulter, Indianápolis, IN, EUA	Optima L-90K
Ultra Centrifuge
Light	CitoViva Technology Inc., Auburn, AL
Contador de colônias	Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, EUA	RE-3325
Freezer	Haier, Brooklyn, NY, EUA	HCMO50LA
Ultra microplaca leitor	Bio-Tek Instrument, Winooski, VT, USA	ELx 808
Auto Strip Washer	Bio-Tek Instrument, Winooski, VT, USA	ELx50
Pipetas	Gilson, Pipetman, França	P100, P200, P1000
C24 Incubadora	Shaker New Brunswick Scientific, Enfield, CT, USA	C24
Rocking Shaker	Reliable Scientific, Inc., Nesbit, MS, USA	55
placas de Petri	Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, USA	875713	100 mm x 15 mm
SterilGard III Advance	The Baker Company, Sanford, ME, USA	SG403
Frascos de cultivo de cultura	Corning Incorporated, Corning, NY, USA	4995	Frascos Erlenmeyer PYREX 250 ml
Espectrômetro óptico Genesys 20	Thermo Scientific, Waltham, MA, EUA.	4001
Sony DXC-33 Câmera de vídeo	Sony
Richardson lâmina de teste	Electron Microscopy Science, Hatfield, PA, USA	80303
Sistema de purificação de água Millipore		Direct-Q
Image-Pro Plus software	Media Cybernetics, MD, USA
Triple Beam Balance	OHAUS Corporation, Parsippany, NJ, EUA
Homogeneizador de tecidos, Dounce	VWR	71000-518

KRC4021 rato KRC3011 Sistema óptico de microscópio óptico Classic