Mostramos procedimentos de implantação e de gravação cirúrgicos para medir sinais eletrofisiológicos visuais do olho (eletrorretinograma) eo cérebro (potencial evocado visual) em ratos conscientes, que é mais análogo à condição humana, onde as gravações são realizadas sem confunde anestesia.
É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.
Artigo de método
Implantação e Gravação do Wireless Eletrorretinograma e Visual Potencial Evocado em ratos conscientes
Neste artigo
Resumo
Resumo
O eletrorretinograma de campo total (ERG) e potencial evocado visual (VEP) são ferramentas úteis para avaliar retina e integridade via visual, tanto em laboratórios e ambientes clínicos. Atualmente, pré-clínicos medições ERG e VEP são realizados com anestesia para assegurar a colocação de eletrodos estáveis. No entanto, a presença de anestesia foi mostrado para contaminar respostas fisiológicas normais. Para superar estes confunde anestesia, desenvolvemos uma plataforma inovadora para ensaiar ERG e VEP em ratos conscientes. Eletrodos são implantados cirurgicamente sub-conjunctivally no olho para ensaiar o ERG e epidural sobre o córtex visual para medir a VEP. A gama de amplitude e sensibilidade / parâmetros de tempo são ensaiadas, tanto para o ERG e VEP a aumentar energias luminosas. Os sinais de ERG e VEP são mostrados para ser estável e repetível para, pelo menos, 4 semanas pós-implantação cirúrgica. Esta capacidade de gravar sinais de ERG e VEP sem anestesia confunde nas s pré-clínicosreparativos deve fornecer uma tradução superior aos dados clínicos.
Introdução
O ERG e VEP são minimamente invasivos em ferramentas in vivo para avaliar a integridade das vias da retina e visuais, respectivamente, tanto no laboratório e clínica. O full-campo do ERG produz uma forma de onda característico, que pode ser dividido em componentes diferentes, com cada elemento representando diferentes classes de células da retina 1,2 percurso. O de campo total ERG forma de onda clássica consiste em um declive inicial negativa (a onda), que foi mostrado para representar fotorreceptor atividade pós exposição à luz 2-4. A uma onda é seguido por uma forma de onda positiva substancial (b-ondas), que reflecte a activ....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Protocolo
Declaração de ética: Experiências com animais foram conduzidos de acordo com o Código australiano para o Cuidado e Utilização de animais para fins científicos (2013). aprovação ética animal foi obtido a partir Comitê de Ética Animal da Universidade de Melbourne. Os materiais aqui são para experiências de laboratório apenas, e não destinados ao uso médico ou veterinário.
1. Os eléctrodos Preparando
Nota: Um transmissor três canais é usado para implantação cirúrgica que permite 2 ERG e gravação de 1 VEP a ser realizado simultaneamente. Os três ativa e três eletrodos inativos precisam ser pré-moldado em forma de anel antes da implantação, ....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Resultados
A resposta de fotorreceptores é analisada por montagem de uma Gaussiana retardada até ao bordo dianteiro do ramo descendente inicial da resposta do ERG no topo 2 energias luminosas (1,20, 1,52 log CSM -2) para cada animal, com base no modelo de carneiro e Pugh 22, formulada por Hood e Birch 23. Esta fórmula retorna uma amplitude e um parâmetro de sensibilidade, (Figura 1C e 1D, respectivamente). Uma função hiperbólica foi.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Discussão
Devido à natureza minimamente invasiva da eletrofisiologia visual, registos de ERG e VEP em pacientes humanos são conduzidos sob condições conscientes e exigem o uso apenas de anestésicos tópicos para a colocação do eletrodo. Em contraste, eletrofisiologia visual em modelos animais é convencionalmente realizado sob anestesia geral para permitir a colocação do eletrodo estável, eliminando movimentos oculares e corporais voluntárias. No entanto, anestésicos gerais comumente utilizados alterar as respostas do ERG e VEP com.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Divulgações
RG e RF são funcionários do financiador comercial desta pesquisa (Pfizer Neusentis e Pfizer Global Research). MI foi funcionário da Pfizer Global Research durante esta pesquisa e atualmente é funcionário da Proteostasis Therapeutics (Cambridge, EUA).
Agradecimentos
JC gostaria de agradecer ao David Hay Memorial Fund, da Universidade de Melbourne, pelo apoio financeiro na redação deste manuscrito. O financiamento para este projeto foi fornecido por uma 100200129 de doação ARC Linkage (BVB, AJV, CTON).
....Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Bioamplificador | ADInstruments | ML 135 | Amplifica os sinais ERG e VEP |
| Carboximetilcelulose sódica 1,0% | Allergan | CAS 0009000-11-7 | Manter a hidratação da córnea durante a cirurgia |
| Carprofeno 0,5% | Pfizer Animal Health Group | CAS 53716-49-7 | Analgesia pós-cirúrgica, administrada com solução salina injetável para reposição de líquidos |
| Clorhexadina 0,5% | Orion Laboratories | 27411, 80085 | Desinfecção de instrumento cirúrgico |
| Ativador de gel de cianoacrilato | RS componentes | 473-439 | Seca rapidamente gel de cianoacrilato |
| Gel de cianocrilato | Componentes RS | 473-423 | Fixar parafusos inoxidáveis ao crânio |
| Broca dentária | Storz Instruments, Bausch and Lomb | E0824A | Cabeça de broca em miniatura de ~ 0,7 mm de diâmetro para fazer um pequeno orifício no crânio sobre cada hemisfério para implantar parafusos VEP |
| Broca | Bosch | Dremel série 300 | Broca automática para trepanação |
| Enrofloxin | Troy Laboratories | Posto antibiótico profilático surgey | |
| Ganzfeld esfera integradora | Soluções fotométricas Internacional | Estimulador de luz personalizado: 36 mm de diâmetro, tamanho da abertura de 13 cm | |
| Cotonetes de gaze | Multigate Medical Products Pty Ltd | 57-100B | Seca a incisão cirúrgica e a superfície do crânio exposta durante a cirurgia |
| Isoflurano 99,9% | Abbott Australasia Pty Ltd | CAS 26675-46-7 | Nome Proprietário: Anestésico por inalação Isoflo(TM). Anestésico inalatório de grau farmacêutico misturado com gás oxigênio para cirurgia de implante de eletrodo VEP |
| Pomada Kenacomb | Aspen Pharma Pty Ltd | Para reduzir a irritação da pele e coceira após a cirurgia | |
| Luxeon LEDs | Phillips Lighting Co. | Para estimulação de luz, vinte LEDs de 5 W e um de 1 W, controlados pelo software | |
| Scope Agulha (macrocirurgia) | World Precision Instruments | 501959 | para sutura de cirurgia abdominal e de cabeça, usada com sutura 3 - 0, agulha de olho, aresta de corte 5/16 círculo Tamanho 1, 15 mm |
| Suporte de agulha (macrocirurgia) | World Precision Instruments | 500224 | Para segurar a agulha durante a cirurgia |
| abdominal e de cabeçaPorta-agulha (microcirurgia) | World Precision Instruments | 555419NT | Para segurar a agulha durante a cirurgia ocular |
| Cateter Optiva | Smiths Medical International LTD | 16 ou 21 G | Guia de eletrodos ativos da córnea do crânio à conjuntiva |
| Iodopovidona 10% | Sanofi-Aventis | CAS 25655-41-8 | Nome proprietário: Betadine, Antisséptico para preparar a pele raspada para cirurgia 10%, 500 ml |
| Sistema de aquisição de dados Powerlab | ADInstruments | ML 785 | Adquira sinal do transmissor de telemetria, emparelhado com o conversor de dados de telemetria |
| Proxymetacaine 0.5% | Alcon Laboratories | CAS 5875-06-9 | Analgesia ocular tópica |
| Conector de contenção | feito | na frente do limitador é cônica para minimizar o movimento da cabeça, o comprimento pode ser ajustado para acomodar diferentes comprimentos de rato, o diâmetro total é de 60 mm. | |
| Lâmina de escapo | R.G. Medical Supplies | SNSM0206 | Para incisão cirúrgica |
| Tesoura (macrocirurgia) | World Precision Instruments | 501225 | para cortar tecido no abdmen e na testa |
| Tesoura (microcirurgia) | World Precision Instruments | 501232 | Para dissecar a conjuntiva para fixação do eletrodo |
| Scope Software | ADInstruments | versão 3.7.6 | Simultaneamente aciona o estímulo através do sistema ADI Powerlab e coleta dados |
| Barbeador | Oster | Golden A5 | Pele de barbear de áreas cirúrgicas |
| Parafusos de aço inoxidável | MicroFasteners | L001.003CS304 | Diâmetro do eixo de 0,7 mm, 3 mm de comprimento |
| Quadro estereotáxico | David Kopf | Modelo 900 | Um instrumento estereotáxico para pequenos animais para localizar os pontos de referência de implantação no crânio |
| Campo cirúrgico | Vital Medical Supplies | GM29-612EE | Garantir um ambiente estéril durante a cirurgia |
| Sutura (macrocirurgia) | Agulhas médicas Ninbo | 3-0 | para sutura de cirurgia abdominal e de cabeça, trançado de seda estéril, 60 cm |
| Agulha de sutura ( microcirurgia) | Agulhas médicas Ninbo | 8-0 ou 9-0 | para cirurgia ocular, incluindo, eletrodo de sutura à esclera e fechamento da ferida conjuntival, sutura de nylon, círculo 3/8 1 &vezes; 5, 30 cm |
| Conversor de dados de telemetria | O DataSciences International | R08 | permite que o sinal de telemetria faça interface com o software de coleta de dados |
| Matriz de troca de dados de telemetria | DataSciences International | Coleta dados de transmissores, emparelha com o receptor Receptor de dados de | |
| telemetria | DataSciences International | RPC-1 | Recebe dados de telemetria do transmissor |
| Transmissor de telemetria | DataSciences Transmissor de | telemetria de 3 canais | International F50-EEE |
| Tropicamida 0.5% | Alcon Laboratories | Pinças de dilatação da íris | |
| (macrocirurgia) | World Precision Instruments | 500092 | Manipular tecidos durante cirurgias abdominais e de cabeça |
| Pinças (microcirurgia) | World Precision Instruments | 500342 | Manipular tecidos durante a cirurgia ocular |
Referências
- Frishman, L. J. Origins of the Electroretinogram. , The MIT Press. (2006).
- Granit, R. The components of the retinal action potential in mammals and their relation to the discharge in the optic nerve. J Physiol. 77, 207-239 (1933).
- Brown, K. T.
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Reimpressões e permissões
