A Fluxo Simples Citometria método para medir glicose Captação e expressão de transportadores de glicose para monócitos subpopulações em sangue total

Clovis S. Palmer; Joshua J. Anzinger; Tiffany R. Butterfield; Joseph M. McCune; Suzanne M. Crowe

doi:10.3791/54255

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A Fluxo Simples Citometria método para medir glicose Captação e expressão de transportadores de glicose para monócitos subpopulações em sangue total

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DOI:

10.3791/54255

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12 de agosto de 2016

Clovis S. Palmer¹^,²^,³ , Joshua J. Anzinger⁴ , Tiffany R. Butterfield⁴ , Joseph M. McCune⁵ , Suzanne M. Crowe¹^,²^,⁶

¹Centre for Biomedical Research, Macfarlane Burnet Institute for Medical Research and Public Health, ²Department of Infectious Diseases, Monash University, ³Department of Microbiology and Immunology, University of Melbourne, ⁴Department of Microbiology, The University of the West Indies, ⁵Division of Experimental Medicine, Department of Medicine, University of California, San Francisco, ⁶Department of Medicine, Monash University

Neste artigo

Resumo

Os monócitos são componentes integrais do sistema imunológico inato humano que dependem do metabolismo glicolítico quando ativados. Descrevemos um protocolo de citometria de fluxo para medir a expressão do transportador de glicose e a captação de glicose por monócitos totais e subpopulações de monócitos em sangue total fresco.

Resumo

Os monócitos são células imunitárias inatas que podem ser ativadas por patógenos e inflamação associados a certas doenças inflamatórias crónicas. A activação de monócitos induzem funções efectoras e um deslocamento concomitante da oxidativo ao metabolismo glicolítico que é acompanhada por um aumento da expressão do transportador de glucose. Este aumento do metabolismo glicolítico é também observada para a imunidade treinada de monócitos, uma forma de memória imunológica inata. Embora os protocolos in vitro que examinam a expressão do transportador de glucose e a captação de glicose pelos monócitos foram descritos, nenhum foi examinado por fluxo multi-paramétrico citometria em sangue total. Descreve-se um protocolo de citometria de fluxo multi-paramétrica para a medição da absorção de glucose análogo 2-NBDG fluorescente no sangue total pelo total de monócitos e a clássica (CD16 ⁺⁺ CD14 ^-), intermediário (CD14 ⁺⁺ CD16 ⁺⁾ e não clássico ( CD14 ⁺ CD16 ⁺⁺⁾ de monócitossubpopulações. Este método pode ser usado para examinar a expressão do transportador de glucose e a captação de glucose para o total de monócitos e subpopulações de monócitos durante a homeostase e doenças inflamatórias, e pode ser facilmente modificado para analisar a absorção de glucose por outros leucócitos e subpopulações de leucócitos de sangue dentro.

Introdução

Os monócitos são um dos principais componentes do sistema imune inato humano que são rapidamente mobilizados para os locais de infecção e inflamação ^1. Activação dos monócitos é fundamental para limitar os danos aguda por patógenos e também é central para a patogênese de diversas doenças crônicas, incluindo a aterosclerose ^2, do cancro de ^3, e HIV ^4,5.

O metabolismo de repouso e monócitos ativados difere radicalmente, com monócitos descansando utilizando metabolismo oxidativo e monócitos activados utilizando metabolismo glicolítico (ou seja, a fermentação da glicose em lactato) ^6.<....