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Artigo de método

Abordagem cirúrgica para oclusão da artéria cerebral média e reperfusão induzida por acidente vascular cerebral em ratos

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DOI:

10.3791/54302

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20 de outubro de 2016

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Neste artigo

Resumo

A fim de compreender a patofisiologia de acidente vascular cerebral, é importante o uso de modelos fiáveis. Este documento descreve um dos modelos de AVC mais utilizados em camundongos, denominado o meio modelo de oclusão da artéria cerebral (MCAo) (também denominado o filamento intraluminal ou modelo de sutura) com a reperfusão.

Resumo

Acidente vascular cerebral é a principal causa de morte em todo o mundo e continua a ser uma das principais causas de deficiência adultos longo prazo. Cerca de 87% dos acidentes vasculares cerebrais são isquêmicos na origem e ocorrem no território da artéria cerebral média (MCA). Actualmente a única Food and Drug Administration (FDA) aprovou o medicamento para o tratamento desta doença devastadora é o activador do plasminogénio tissular (tPA). No entanto, o tPA tem uma pequena janela terapêutica para a administração (3-6 h), e só é eficaz em 4% dos pacientes que recebem efectivamente ele. A investigação actual centra-se na compreensão da fisiopatologia de acidente vascular cerebral, a fim de encontrar potenciais alvos terapêuticos. Assim, modelos fiáveis ​​são cruciais, e o modelo de oclusão MCA (MCAo) (também denominado o modelo de filamento ou fio de sutura intraluminal) é considerado como sendo o modelo cirúrgico mais clinicamente relevante de acidente vascular cerebral isquémico e é relativamente não invasivo e facilmente reprodutível. Tipicamente, o modelo é utilizado MCAo com roedores, especialmente ratinhos com devidasa todas as variações genéticas disponíveis para esta espécie. Aqui nós descrevemos (e presente no vídeo) como executar com sucesso o modelo MCAo (com reperfusão) em ratinhos para gerar dados confiáveis ​​e reprodutíveis.

Introdução

O AVC é a quinta maior causa de morte no mundo, com uma pessoa morrer da doença a cada 4 minutos. Mais de 800.000 americanos sofrem um AVC a cada ano, o que não só é devastador para o paciente, mas também para as suas famílias. O AVC é a principal causa de incapacidade em adultos ea despesa anual é estimada para ser da ordem de 36500000000 $ 1 apesar de muito poucas opções de tratamento que estão disponíveis.

ativador do plasminogênio tecidual (tPA) é o único Food and Drug Administration (FDA) licenciado droga para acidente vascular cerebral isquêmico. No entanto, isso só é eficaz se administrada a pacientes dentro de 3-6 horas....

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Protocolo

Este protocolo e os experimentos relatados no vídeo foram aprovados pela Comissão de LSUHSC-S Institutional Animal Care e Use e estão em conformidade com as diretrizes do NIH.

NOTA: ratos machos C57BL / 6 ratos pesando 25-29 g foram utilizados neste estudo. Os ratos foram mantidos com uma dieta padrão de comida pellet com livre acesso à água, sob um 12 hr ciclo claro / escuro em gaiolas ventiladas individualmente. O processo será realizado sob condições estéreis, utilizando técnicas de estéril (por exemplo, luvas estéreis, os instrumentos esterilizados).

Preparativos 1. Pré-cirúrgicos

  1. Induzir a anestesia utilizando uma combinação d....

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Resultados

Os ratinhos foram submetidos a 30 min de isquemia cerebral induzida por MCAo (Figura 1), seguido por um período de reperfusão (24 horas e 1 semana são apresentados aqui, mas o comprimento da reperfusão pode ser variada). A mortalidade durante MCAo foi mínimo (aproximadamente 2%). Pós isquemia, a taxa de mortalidade (nas primeiras 24 horas) foi de cerca de 26%.

Laser Doppler fluxometria foi usada para confirmar.......

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Discussão

Desde a sua concepção, há 20 anos, o modelo de acidente vascular cerebral humano MCAo envolvendo a inserção de um filamento foi usado em um grande número de estudos. Isto é principalmente devido ao fato de que ela imita o que acontece clinicamente sob a forma mais comum de acidente vascular cerebral (isto é, acidente vascular cerebral isquémico). O corpo estriado é mais sensível do que a isquemia cerebral, o córtex, e, como tal, o comprimento de tempo de isquemia vai traduzir-se em se tanto o corpo estriado e o.......

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Divulgações

Os autores não têm nada a divulgar.

Agradecimentos

Este trabalho foi financiado pelo Instituto Nacional de Saúde, pelo Instituto Nacional do Coração, Pulmão e Sangue (NIH e NHLBI; HL125572-01A1) e o fundo inicial LSUHSC-S para F.N.E. Gavins.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Camundongos C57BL / 6 machosJackson Laboratory, Bar Harbor, ME# 000664
Cloridrato de cetaminaMorris & Dickson, Shreveport, LA67457-108-10
XylazineAkorn, Inc, Lake Forest, ILNADA # 139-236
Sistema de controle de temperatura DCFHC, Bowdoin, ME40-90-8D
Mini sonda de termistor retalFHC, Bowdoin, ME40-80-5D-02
Almofada de aquecimentoFHC, Bowdoin, ME40-90-2-06
ClippersAmazon, Bellevue, WA#64800
70% etanolWorldwide Medical Products, Bristol, PA#51011023
Microscópio de dissecaçãoOlympus, Center Valley, PASZ40
Tesoura de íris (reta)Fine Science Tools, Foster City, CA11251-20
Fórceps Dumont (45° ponta dobrada)Fine Science Tools, Foster City, CA11297-00
Clipe de micro vasoFine Science Tools, Foster City, CA18055-05
Tesoura de mola de microdissecação (reta)Fine Science Tools, Foster City, CA14088-10
Afastadores (rombos)Fine Science Tools, Foster City, CA18200-11 (Helen usou 17022-13)
Aplicadores com ponta de algodãoFisher Scientific, Waltham, MA23-400-100
Esponjas de gazeCovidien, Mansfield, MA# 9023
7-0 sutura cirúrgica trançada de sedaBraintree Scientific, Braintree, MASUT-S103
0,9% cloreto de sódioMorris & Dickson, Lake Forest, IL0409-4888-20
6-0 sutura MCAO média (monofilamento revestido de borracha de silicone)Doccol Corporation, Sharon, MA6023PKRe
Seda trançada revestida de silicone Sofsilk 6-0Covidien, Mansfield, MASUT-14-1
CarprofenoPfizer, Nova York, NYNADA # 141-199
PuralubeDechra, Norwich, Reino UnidoNDC 17033-211-38
Physitemp controlador de temperaturaHarvard Apparatus, Holliston, MATCAT-2AC
Lâmpada de calorHarvard Apparatus, Holliston, MAHL-1
Sonda doppler a laserAD Instruments, Colorado Springs, COMSP100XP
placas de 24 poçosFisher Scientific, Waltham, MA# 353226
Tamponamento de fosfato solução salina (PBS)Life Technologies, Carlsbad, CA20012-050
Lâminas de barbear de borda únicaFisher Scientific, Waltham, MA12-640
Cloreto de 2,3,5-trifeniltetrazálio (TTC)Sigma Aldrich, St. Louis, MOT8877-50G
Fatiador de matriz cerebral de camundongoBraintree Scientific, Braintree, MABS-A 5000C
VWR, Radnor, PA#182
10% formalinaSigma Aldrich, St. Louis, MOHT501128-4L
ImageJ software de análiseNIH, Bethesda, MDdownload
retrator, Newcastle, CAMP-740
Banho-mariagrátisCompra de dispositivo médico

Referências

  1. Go, A. S., et al. Heart disease and stroke statistics-2014 update: a report from the American Heart Association. Circulation. 129 (3), e28-e292 (2014).
  2. Marks, M. P., et al.

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Reimpressões e permissões

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