Fluorescente modelo de camundongo ortotópico de câncer de pâncreas

Resumo

Um procedimento para implantar células cancerígenas pancreáticas que expressam proteínas fluorescentes verdes (PANC-1 GFP) ortotopicamente no pâncreas de camundongos Balb-c Ola Hsd-Fox1nu para avaliar a progressão e metástase do tumor é apresentado aqui.

Resumo

O câncer de pâncreas continua a ser um dos cancros para os quais a sobrevivência não melhorou substancialmente nos últimos décadas. Apenas 7% dos pacientes diagnosticados vai sobreviver mais do que cinco anos. De modo a compreender e imitar o microambiente de tumores pancreáticos, utilizou-se um modelo murino ortotópico de cancro do pâncreas que permite imagem não invasiva de progressão do tumor em tempo real. Células de cancro do pâncreas que expressam a proteína fluorescente verde (GFP PANC-1) foram suspensos em matriz da membrana basal, de alta concentração, (por exemplo, Matrigel HC) com meio isento de soro e, em seguida, injectado no cauda do pâncreas por laparotomia. A suspensão de células na matriz de membrana basal elevada concentração torna-se uma substância do tipo gel, uma vez que atinja a temperatura ambiente; Portanto, gelifica quando entra em contacto com o pâncreas, criando uma vedação no local da injecção e impedir qualquer fuga de células. O crescimento do tumor ea metástase para outros órgãos são monitorados em directoanimais usando fluorescência. É fundamental utilizar os filtros apropriados para a excitação e de emissão de GFP. Os passos para a implantação ortotópica são detalhados neste artigo para que os pesquisadores podem facilmente replicar o processo em ratinhos nus. Os passos principais deste protocolo são preparação da suspensão de células, a implantação cirúrgica, e todo o corpo fluorescente imagiologia in vivo. Este modelo ortotópico foi concebido para investigar a eficácia de novos terapêutica em tumores primários e metastáticos.

Introdução

O câncer de pâncreas é diagnosticada com maior frequência em comparação com outros tipos de câncer e é o ^4º principal causa de mortes relacionadas ao câncer nos Estados Unidos. A partir do momento do diagnóstico, mais de 90% dos pacientes morrem dentro de cinco anos ^1,2. Actualmente, a remoção cirúrgica do tumor é a única cura para o cancro do pâncreas, mas menos do que 20% dos doentes são elegíveis para se submeter a cirurgia, principalmente devido ao momento do diagnóstico da doença é em fase avançada e tem metástase ^3,4. A falta de sintomas específicos faz com que o câncer de pâncreas uma doença silenciosa; alguns dos sintomas incl....

Protocolo

O protocolo descrito a seguir é executado sob a orientação e aprovação do Comitê de Cuidados e Uso de Animais da Universidade Ocidental. Todos os experimentos são realizados em conformidade com todas as orientações pertinentes, regulação e agências reguladoras.

Cultura 1. celular

1. Preparação de Meio Completo
   1. Usando uma câmara de segurança biológica de Classe II, preparar meio completo por adição asséptica de soro fetal de bovino (FBS) e penicilina estreptomicina (P / S) para um frasco de 500 ml de meio RPMI. Misture delicadamente por agitação. A concentração final de cada um suplemento é 10% de FBS e 1%....

Resultados

Este método descreve um implante ortotópico cirúrgica das células cancerosas pancreáticas humanas fluorescentes, com foco na preparação da suspensão de células para injecção, anestesia adequada para os roedores, a entrega de suspensão de células via laparotomia, eo uso de fluorescente em imagens de pequenos animais in vivo. A detecção de um sinal verde fluorescente (sinal GFP) entre duas e três semanas pós-implantação, fornece investigadores uma sugestão visual para con.......

Discussão

Descreve-se um modelo murino ortotópico de cancro do pâncreas que expressa GFP, permitindo, assim, a monitorização não invasiva do crescimento do tumor usando todo o corpo in vivo imagiologia fluorescente (Figura 1). Esta técnica permite monitorar o desenvolvimento do tumor em tempo real (Figura 3); ele pode ser uma ferramenta importante para pesquisadores para estudar a eficácia terapêutica de novos agentes contra o câncer de pâncreas. Outro aspecto importante deste modelo é q.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
RPMI media 1640	Caisson Labs	RPL03-500ML
Soro Fetal Bovino	Gibco	10437-077
Penicilina Estreptomicina	Thermo Ficher Sci	15140-122
Membrana basal Matrigel HC, alta concentração	Corning	354248
SutureVet PGA 6-0 PGA	Henry Schein	39010
Alcare ou Antisséptico Espumado para as mãos	Steris	639680
DPBS (solução salina tamponada com fosfato da Dubelcco)	Seringa Thermo Ficher Sci	21300025
TB 27 G 1/2	Becton Dickinson	305620
Isoflurano	Blutler Schein	50562
Ketoprofeno	Fort Dodge Animal Health
Tesoura Cirúrgica, 5.5" maionese reta	22-1600		da Henry Schein
	Anticancer, Inc
: iBox Scientia	UVP, LLC. Planalto, CA.		Sistema de imagem de pequenos animais para observar o tumor fluorescente em animais vivos

Linha celular GFP PANC-1 Sistema de imagem de pequenos animais