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Artigo de método

Murino do tendão flexor lesão ea cirurgia de reparação

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DOI:

10.3791/54433

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19 de setembro de 2016

Neste artigo

Resumo

tendões flexores na mão são comumente feridos, levando a mão função prejudicada. No entanto, a resposta de cura de tecido cicatricial não está bem caracterizada. Um modelo murino de cura do tendão flexor é demonstrada aqui. Este modelo pode melhorar a compreensão global do processo de cura e avaliar abordagens terapêuticas para melhorar a cicatrização.

Resumo

Tendão conecta o músculo esquelético e o osso, facilitando o movimento de quase todo o corpo. Na mão, tendões flexores (STF) permitem flexão dos dedos e função geral mão. Lesões ao SFT são comuns, e cura satisfatória é muitas vezes prejudicada devido ao tecido cicatricial em excesso e aderências entre o tendão eo tecido circundante. No entanto, pouco se sabe sobre os componentes moleculares e celulares de reparação FT. Para esse fim, num modelo murino de reparação FT que recapitula muitos aspectos de cicatrização em humanos, incluindo a gama de movimento diminuída e diminuição propriedades mecânicas, tem sido desenvolvido e descrito anteriormente. Aqui uma demonstração em profundidade deste procedimento cirúrgico é fornecido, envolvendo o corte transversal e subsequente reparação do tendão flexor longo dos dedos (FDL) na pata posterior murino. Esta técnica pode ser usado para realizar a análise da linhagem de diferentes tipos celulares, avaliar os efeitos do ganho do gene ou a perda de função, e para testar a eficácia de intervenções farmacológicas no processo de cicatrização. No entanto, existem duas limitações principais para este modelo: i) o tendão FDL na porção média da pata posterior de murino, em que a transecção e reparação ocorrer, não é rodeado por uma bainha sinovial. Portanto, este modelo não leva em conta a potencial contribuição da bainha para o processo de formação de cicatriz. ii) A fim de proteger a integridade do local de reparação, o FT é libertado na junção miotendínea, diminuindo as forças mecânicas do tendão, provavelmente contribui para aumentar a formação de cicatriz. Isolamento de células suficientes a partir do tecido de granulação do FT durante o processo de cura para a análise de citometria de fluxo demonstrou ser um desafio; citologia centrifugação a concentrar-se nestas células é um método alternativo utilizado, e permite a geração de preparações de células no qual a rotulagem de imunofluorescência pode ser realizada. Com este método, a quantificação de células ou proteínas de interesse durante FT cura torna-se possível.

Introdução

tendões flexores da mão de obra em conjunto com os músculos flexores do antebraço e bainhas digitais para permitir a flexão dos dígitos e função de agarrar a mão. tendões flexores executar ao longo do aspecto palmar da mão; este local relativamente superficial muitas vezes resulta em lesões nos tendões flexores durante um trauma para a mão. Tendões curar através de uma resposta do tecido da cicatriz em vez de regeneração do tecido do tendão normal de 1. Embora este tecido cicatricial dá continuidade ao tendão, função dramaticamente é diminuída em relação ao tendão saudável. Compósitos tecido do tendão-de cicatriz são caracterizados por propriedades mecânic....

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Protocolo

O Comité University em Pesquisa Animal da Universidade de Rochester aprovado todos os experimentos com animais. Dez-12 semanas de idade C57BL fêmea / 6J foram usadas.

1. Preparação de Animais para a cirurgia do tendão flexor (~ 15 min)

  1. instrumentos cirúrgicos autoclave para esterilizar, usar luvas estéreis por toda parte, e manter um campo de cirurgia estéril.
  2. Anestesiar o rato através de injecção intraperitoneal (IP) com um volume de cetamina (80 mg / kg) e xilazina (10 mg / kg) correspondente ao peso do corpo. Confirmar profundidade de sedação através de ausência de reflexo toe-pitada.
  3. Administrar analgesi....

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Resultados

O flexor longo dos dedos (FDL) muscular, localizada na panturrilha, age para flexionar os dígitos da pata de camundongo traseira através do tendão flexor (esboçada em azul na Figura 1A, e mostrado histologicamente na Figura 2A), que funciona proximal do miotendínea junção e termina nas falanges distais. Neste modelo de cicatrização do tendão flexor, o tendão FDL é seccionado e reparado no mid-pé, proximal à bifurcação para os dígitos da pata posterior (s.......

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Discussão

O procedimento cirúrgico para um modelo murino de transecção completa e reparação do flexor longo dos dedos tendão é apresentado neste estudo. Além disso, uma nova aplicação de concentrar populações de células pequenas com citologia centrífuga é demonstrada, permitindo a análise imunocitoquímica quantitativa do ambiente celular durante a cicatrização do tendão flexor. Este modelo de reparação do tendão flexor demonstra uma resposta de cura reprodutível, que pode ser utilizado para avaliar mudanças no processo de cura ut.......

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Divulgações

Os autores declaram que não têm interesses financeiros conflitantes

Agradecimentos

Este trabalho foi parcialmente apoiado pela Sociedade Americana de Cirurgia do Prêmio Pilot Mão e NIH / NIAMS 1K01AR068386-01 (a AEL) e NIAMS / NIH P30AR061307.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Preparação cirúrgica
Camundongos C57BL/6J Jackson Laboratories000664
CetaminaHospiraNDC # 0409-2051-05
XilazinaLloyd Inc.NDC # 61311-482-10
BuprenorfinaPar Pharmaceutical Inc.NDC# 42023-179-10
Irrigação com cloreto de sódio a 0,9%HospiraNDC# 0409-6138-03Para preparação de soluções de cetamina/xilazina e buprenorfina
Seringa de 1 mlBD309659
30 G agulhaBD305106
Solução de iodopovidonaAplicare82-226
70% etanol
Pomada oftálmica veterinária PuralubeDechra Produtos VeterináriosNDC# 17033-211-38
NomeEmpresaNúmero de CatálogoComentários
Ferramentas cirúrgicas
Balança portátil 200 gOhausSP202
Tesoura de molaFine Science Tools15124-12
Dumont # 5 fórcepsFine Science Tools11251-30
Porta-agulhasFine Science Tools91201-13
Micro tesoura de molaFine Science Tools15003-08
Micro porta-agulhasFine Science Tools12061-02
Suturas de nylon 5-0 Suturas de nylonEthicon668G
8-0Ethicon2808G
Lab-LineBarnstead International26025
NomeEmpresa<strong>Número de catálogoComentários
citospina
colagenase tipo I, liofilizadoLife Technologies 1700-017
albumina de soro bovino9998S
1x PBSThermo Fisher10010-023
Funis de citologiaFisher HealthCare10-354
HistoBond+ lâminas de microscópioVWR16005-110
Cytospin 2 centrífugaShandonSH-CYTO2
NomeEmpresaNúmero de CatálogoComentários<
strong>Immunocytochemistry
Bandeja de coloração deslizante com tampa pretaIHC WorldM920-2
Click-iT Plus EdU Kit de ImagemLife Technologies C10639Inclui EdU e 
Caneta de barreira hidrofóbica ImmedgeVector LaboratoriesH-4000
ProLong Diamond meio de montagemThermo FisherP36970
Lamínulas de vidro 24 x 50 mm #1.5
Esmalte
para microcirurgia Aquecedor de lâminas de histologia Tecnologias de sinalização celular de Hoeschst 33342 transparente

Referências

  1. Lin, T. Biomechanics of tendon inury and repair. J Biomech. 37, 865-877 (2004).
  2. Strickland, J. W. Development of flexor tendon surgery: twenty-five years of progress. J Hand Surg [Am]. 25, 214-235 (2000).
  3. Bunnell, S.

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Reimpressões e permissões

Etiquetas

Cirurgia de Reparação TendinosaPata Posterior MurinaFlexor Digitorum LongusTransecção TendinosaPadrão de Sutura de KesslerDigestão por ColagenaseAnálise por Citometria de FluxoMarcação ImunofluorescenteMicroscopia Fluorescente