Um modelo de tumor de murino de bexiga ortotópico e Tumor Detection System

Sin Mun Tham; Kesavan Esuvaranathan; Ratha Mahendran

doi:10.3791/55078

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Artigo de método

Um modelo de tumor de murino de bexiga ortotópico e Tumor Detection System

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DOI:

10.3791/55078

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12 de janeiro de 2017

Sin Mun Tham¹ , Kesavan Esuvaranathan¹^,² , Ratha Mahendran¹

¹Department of Surgery, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore, National University Health System, ²Department of Urology, National University Hospital

Neste artigo

Resumo

Este protocolo descreve a geração de tumores da bexiga ortotópico de murídeo em Ratinhos C57BL / 6J e a monitorização do crescimento do tumor.

Resumo

Este protocolo descreve a geração de tumores da bexiga em ratos C57BL / 6J ratinhos fêmea, utilizando a linha celular de cancro da bexiga de murino MB49, que foi modificado para secretar humano Antigénio Específico da Próstata (PSA), e o procedimento para a confirmação da implantação do tumor. Em resumo, os ratos são anestesiados usando drogas injectáveis e são feitos para colocar na posição dorsal. A urina é desocupado da bexiga e 50 ul de poli-L-lisina (PLL) é instilada lentamente a uma taxa de 10 mL / 20 s utilizando um cateter de 24 g IV. É deixado na bexiga durante 20 minutos por tapando o cateter. O cateter é retirado e PLL é desocupado por uma leve pressão sobre a bexiga. Isto é seguido por instilação da linha celular de cancro da bexiga de murino (1 x 10 ⁵ células / 50 ul) a uma taxa de 10 mL / 20 s. O cateter é tapado para evitar a evacuação prematura. Após 1 h, os ratinhos são reavivado com uma droga inversão, e a bexiga está desocupado. A taxa de instilação lenta é importante,uma vez que reduz o refluxo vesico-ureteral, o que pode causar tumores a ocorrer no tracto urinário superior e nos rins. A linha de células deve ser bem re-suspensa para reduzir a aglutinação de células, como esta pode levar à tamanhos irregulares após a implantação do tumor.

Esta técnica induz tumores com alta eficiência. O crescimento do tumor é monitorizado pela secreção urinária PSA. monitorização PSA marcador é mais fiável do que o ultra-som ou de imagem de fluorescência para a detecção da presença de tumores na bexiga. Os tumores em ratinhos geralmente atingem um tamanho máximo que afeta negativamente a saúde em cerca de 3-4 semanas, se deixados sem tratamento. Ao monitorizar o crescimento do tumor, é possível diferenciar os ratinhos que estavam curados do que aqueles que não foram implantadas com sucesso com tumores. Com a análise de ponto final, apenas, o último pode ser assumida por engano ter sido curado por terapia.

Introdução

O objetivo deste método é gerar tumores de bexiga murino ortotópico e monitorar os tumores implantados mais exacta possível, de modo que os ratos sem a implantação do tumor não são pensados para ter sido curado a análise de ponto final. Em geral, o método mostrado irá reduzir a necessidade de grandes números de ratinhos para análise experimental e assegurar uma maior precisão na determinação dos resultados terapêuticos.

O desenvolvimento de um modelo ortotópico de câncer é importante, como células tumorais implantando subcutânea não recapitular o ambiente da doença clínica ou permitir o desenvolvimento de estratégias terapêuticas. A arq....