Descrevemos aqui três protocolos diferentes para a investigação in vitro de conjugação, transdução, transformação e natural em Staphylococcus aureus.
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Artigo de método
Metodologia para o Estudo da transferência horizontal de genes em
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
Uma característica importante do grande agente patogénico humano oportunista Staphylococcus aureus é a sua capacidade extraordinária para adquirir rapidamente resistência a antibióticos. Estudos genómicos revelam que o S. aureus transporta muitos genes de virulência e resistência localizadas em elementos genéticos celulares, sugerindo que a transferência genética horizontal (HGT) desempenha um papel crítico na evolução S. aureus. No entanto, uma descrição completa e detalhada da metodologia utilizada para estudar HGT em S. aureus ainda está em falta, especialmente em relação transformação natural, que foi recentemente relatada nesta bactéria. Este trabalho descreve três protocolos que são úteis para a investigação in vitro de HGT em S. aureus conjugação, a transdução do fago, e transformação natural. Para este objectivo, o gene cfr (cloranfenicol / resistência florfenicol), que confere as fenicóis, Lincosamidas, Oxazolidinonas, pleuromutilinas, e estreptogramina A (PhLOPSA) -resistência fenótipo, foi usado. Compreender os mecanismos através dos quais S. aureus transfere material genético para outras estirpes é essencial para compreender a rápida aquisição de resistência e ajuda a esclarecer os modos de difusão relatados em programas de vigilância ou de prever ainda mais o modo de propagação no futuro.
Introdução
Staphylococcus aureus é uma bactéria Gram-positiva comensais que habita naturalmente na pele e cavidade nasal do ser humano e animais. Esta espécie bacteriana é a principal causa de infecções nosocomiais em hospitais e estabelecimentos de cuidados. Além disso, a sua capacidade de desenvolver resistência a diferentes compostos antimicrobianos fez a gestão das infecções causadas por esta bactéria em uma preocupação mundial.
Duas principais vias envolvidas na divulgação de fenótipos de resistência são conhecidos: a disseminação clonal de genótipos resistentes e de difusão dos determinantes genéticos entre a piscina bacteriana. No ca....
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Protocolo
NOTA: As estirpes e os materiais utilizados neste trabalho estão listados na Tabela 1 e a Tabela de Materiais, respectivamente. Nos experimentos de transmissão, N315 e COL cfr derivados -positivas foram usados como doadores do gene cfr (N315-45 e COL-45). Estas estirpes foram anteriormente obtidos por conjugação, utilizando como doador de um CFR clínica -positivo estirpe de Staphylococcus epidermidis (ST2), seguindo o protocolo padrão de conjugação (ver abaixo). Esta estirpe abrigavam o gene cfr em um plasmídeo pSCFS7-like 7.
1. Conjugação Usando o mét....
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Resultados
Os resultados aqui representadas foram previamente publicados (adaptado da referência 7 com a permissão do editor). Foram estudados os potenciais vias de transmissão do gene CFR, o que faz com baixo nível de resistência de linezolida e a expressão do fenótipo de resistência PhLOPSA-14, 15 em estirpes de S. aureus, investigando três mecanismos de HGT.
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Discussão
Este trabalho descreve os três métodos principais para estudar a HGT de determinantes genéticos em S. aureus. Apesar de transdução e conjugação têm sido estudados há décadas, a existência de transformação natural só recentemente foi reconhecida 2. Assim, S. aureus é equipado com todos os três principais modos de HGT, e testar todos eles é necessária para esclarecer as possíveis vias de disseminação de determinantes genéticos. O objetivo deste trabalho é compilar protocolos.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a divulgar.
Agradecimentos
Este trabalho foi parcialmente apoiado pela Takeda Science Foundation, Pfizer Academic Contribution e JSPS Postdoctoral Fellowship for Foreign Researchers (FC).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Caldo de Soja Tríptico (TSB) | Becton Dickinson | ||
| Infusão Cérebro Coração (BHI) | Becton Dickinson | ||
| Caldo nutriente nº 2 | Oxoid | CM0067 | |
| Ágar sangue de ovelha | Eiken Chemical Co., Ltd. | E-MR96 | Ágar tríptico de soja adicionado com 5% (v/v) de sangue de ovelha de acordo com o fabricante. |
| Pó de ágar | Wako Pure Chemical Industries | 010-08725 | |
| Citrato de sódio (citrato trissódico di-hidratado) | Wako Pure Chemical Industries | 191-01785 | |
| Éster de celulose gradeado 0,45 μ L HAWG filtro | Merck Milipore | HAWG 02500 | |
| QIAfilter Plasmid Midi kit | QIAGEN | 12243 |
Referências
- Lindsay, J. A. Genomic variation and evolution of Staphylococcus aureus. IJMM. 300, 98-103 (2010).
- Morikawa, K., et al. Expression of a cryptic secondary sigma factor gene unveils natural competence for DNA transformation in Staphyloco....
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Reimpressões e permissões
