Preparação de horizontais Fatias de rato adulto Retina de Estudos eletrofisiológicos

Resumo

Nós desenvolvemos uma preparação fatia horizontal da retina de mamífero adulto com o plano de corte paralelo à superfície da retina. campos dendríticos de neurônios da retina orientados nonradially não foram truncados, permitindo o estudo do processamento de sinal com técnicas de patch-clamp e de imagem.

Resumo

preparações fatia vertical são bem estabelecido para o estudo e circuitos de transmissão de sinal na retina de mamífero adulto. O plano de corte nestas preparações é perpendicular à superfície da retina, tornando-o ideal para o estudo dos neurónios e radialmente orientadas, como os fotorreceptores e as células bipolares. No entanto, as grandes células de mandris dendríticas, células horizontais amácrinas de campo amplo, e as células ganglionares são na maior parte truncada, deixando marcadamente reduzida actividade sináptica nestas células. Considerando que as células ganglionares e células amácrinas deslocadas pode ser estudada em toda uma preparação-montada da retina, células horizontais e células amácrinas localizados na camada nuclear interna são pouco acessível para eléctrodos no tecido da retina inteira.

Para alcançar o máximo de acessibilidade e integridade sináptica, desenvolvemos uma preparação fatia horizontal da retina do rato, e estudou a transmissão do sinal na sinapse entre fotorreceptores e horizontalcélulas. corte horizontal permite (1) identificação visual fácil e não ambígua de corpos celulares horizontais para segmentação eletrodo, e (2) a preservação dos campos dendríticas de células horizontal estendidos, como um pré-requisito para cone de entrada sináptica intacta e funcional para os dendritos das células horizontais.

células horizontais de fatias horizontais exibiram atividade sináptica tónico no escuro, e eles responderam a breves flashes de luz com uma redução da atividade sináptica atual e diminuída para dentro. evidência imunocitoquímica indica que quase todos os cones dentro do campo dendrítica de uma célula horizontal estabelecer sinapses com os dendritos periféricos. A preparação fatia horizontal é, portanto, bem adequado para estudar as propriedades fisiológicas dos neurônios da retina estendida horizontalmente, bem como transmissão de sinais sensoriais e de integração através das sinapses selecionados.

Introdução

A informação visual é codificado como um padrão espaço-temporal dinâmica de ativação de fotorreceptores, e da sinapse fita entre fotorreceptores e neurônios de segunda ordem determina a transferência a jusante da informação visual. A preparação fatia vertical da retina de mamífero é uma ferramenta muito valiosa para estudar o processamento de sinais em vias verticais, ou seja, entre os fotorreceptores e as células bipolares, e entre células bipolares e alguns tipos de célula amacrine ^{1, 2, 3, 4.}

No enta....

Protocolo

Todos os procedimentos foram realizados de acordo com as diretrizes para experiências com animais emitidos pela República Federal da Alemanha.

Observação: Uma vez que o tecido da retina vai ser desprovido de oxigénio durante partes prolongadas deste processo, todos os passos devem ser realizadas tão depressa quanto possível. Ratos deve ser escuro adaptado pelo menos 3 horas antes da dissecção. Para evitar a adaptação à luz da retina, a preparação e o corte deve ser realizado sob luz vermelha fraca.

1. Preparação da mídia e de outros produtos químicos

1. Prepare Ames 'Medium

Resultados

Em fatias horizontais da retina de rato, corpos celulares horizontais podem ser facilmente identificados de acordo com a sua morfologia original com vários dendritos primários emergentes a partir de um corpo celular poligonal (Figura 1A). corpos celulares horizontal localizada perto da superfície da fatia foram rotineiramente acessível para eléctrodos de patch-clamp. Durante gravações, as células foram preenchidos com um corante fluorescente, revelando a sua arbori.......

Discussão

Em contraste com fatias verticais, a morfologia dendrítica de neurónios e radialmente orientadas, como as células horizontais e células amácrinas é bem preservada. Em comparação com as preparações de retina inteiros, estes tipos de células são facilmente acessíveis para microeléctrodos e pode ser estudado por ambos os métodos electrofisiológicos e de imagem. Aqui, nós nos concentramos na retina externa; No entanto, uma abordagem semelhante tem sido reportado especialmente para células amácrinas da retina interna

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Ames' Medium	Sigma	A1420
Bicarbonato de Sódio	Sigma	S5761
Hepes	Sigma	H3375
Carbogen	Air Liquide
Agarose	Sigma	A9045
Placa de Petri de 35 mm (plástico)	Nunc Thermofisher	150318
Vidro Petri prato	Quimiolina	50-1470-40
Dispensário de isoflurano	hospital
Lâmina injetora de vibratomo	Biosystems	39053250
Vibratome	Leica Microsystems	VT1200
Vibrocheck	Leica Microsystems Microsystems
Microondas
Banho-maria
Pinças
agulhas
Tesoura de mola
Lâminas
Microscópio
Pipeta
Pasteur Pipeta			de vidro Pasteur

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