Desenvolvimento neurológico Reflex Teste em Neonatais rato filhotes de cachorro

Resumo

testes de comportamento é o padrão ouro para determinar os resultados após lesão cerebral, e pode identificar a presença de deficiências de desenvolvimento em lactentes e crianças. reflexos do desenvolvimento neurológico são um indicador precoce destas anormalidades. Uma série de testes de reflexo de desenvolvimento facilmente realizados em roedores neonatais foram desenvolvidos e descritos aqui.

Resumo

teste de reflexo do neurodesenvolvimento é vulgarmente utilizados na prática clínica para avaliar a maturação do sistema nervoso. reflexos do desenvolvimento neurológico são também referidos reflexos como primitivos. Eles são sensíveis e consistente com os resultados posteriores. reflexos anormais são descritos como uma ausência, persistência, reaparecimento, ou latência de reflexos, que são os índices preditivos de crianças que estão em alto risco para desordens do neurodesenvolvimento. modelos animais de deficiência do desenvolvimento neurológico, como paralisia cerebral, muitas vezes exibem reflexos desenvolvimento aberrantes, como seria observado em bebês humanos. As técnicas descritas avaliar uma variedade de reflexos do neurodesenvolvimento em ratos recém-nascidos. teste de reflexo do desenvolvimento neurológico oferece o investigador um método de teste que não seja de outra forma disponíveis em tais animais jovens. A metodologia aqui apresentada destina-se a ajudar os investigadores no exame marcos de desenvolvimento em ratos recém-nascidos como um método de detecção de largo de início precocelesão ain e / ou determinação da eficácia de intervenções terapêuticas. A metodologia aqui apresentada tem como objetivo fornecer uma orientação geral para os investigadores.

Introdução

reflexos do desenvolvimento neurológico, ou marcos de desenvolvimento, são uma das primeiras avaliações utilizadas em recém-nascidos humanos e bebês. reflexos neurológicos são movimentos involuntários e repetitivos que demonstram tronco cerebral e da medula espinhal reflexos. Maturação de redes corticais superiores caracterizadas por migração em evolução, mielinização, e sinaptogénese promover controle voluntário e inibição cortical. As alterações na progressão normal da evolução do sistema nervoso central podem interromper o desenvolvimento do cérebro, resultando na fiação anormal cortical, funcionamento, e mielinização, causando atrasos reflexas do neurodesenvolvimento ou ausências. bebês humanos de alto risco para a deficiência do desenvolvimento neurológico, muitas vezes exibir primeiros reflexos anormais. reflexos anormais podem apresentar-se como um atraso na aquisição, ausência, presença prolongada, ou reaparecimento mais tarde na vida, e são preditivos de deficiências de desenvolvimento. ^{1, 2} Portanto, É importante para imitar atrasos reflexas em modelos experimentais de deficiência do neurodesenvolvimento.

Os roedores são vulgarmente utilizados como modelos experimentais. filhotes de ratos são altricial quando nasceu, e, portanto, muito imaturo para realizar motor específico ou complexo, tarefas comportamentais sensoriais e / ou cognitivas. A este respeito, a imaturidade do desenvolvimento refere-se a ambos o seu desenvolvimento físico e órgão. Ratos nascem sem pêlos com uma incapacidade de termorregulação, são cegos e incapazes de andar. Com referência ao desenvolvimento do cérebro, maturação cortical substancial ocorre no pós-natal. crias de ratos recém-nascidos (dia de nascimento referido como dia pós-natal 1; PD1) têm sido sugeridos para atingir um nível de maturação do cérebro que é semelhante a um cérebro humano prematuro de 23 - 28 semanas de gestação, enquanto PD7-10 filhotes são equivalentes a quase- cérebro humano prazo. ^{3, 4, 5, 6}Esta correlação baseia-se em análises anatómicas bruto, no entanto, também têm sido descritas outras medidas de maturação cerebral, tais como electroencefalogramas mielinização e amplitude integrado. ^{5, 7,} por exemplo, pré-oligodendrócitos são as células predominantes no cérebro fetal humano em desenvolvimento a partir de 23 - 32 semanas no útero, e esta fase de maturação corresponde a um roedor PD1-3. ^{5, 8, 9, 10} Além disso, a mielinização começa no útero em seres humanos enquanto que em ratos, que aparece na parte frontal do cérebro em torno PD7-10; o cérebro de roedores recém-nascido permanece em grande parte un-mielinizadas. ^{11, 12,} Tucker et ai. descobriu que o padrão de eletroencefalograma de amplitude integrada de um rato P1 para ser semelhante a um 23-semana gestação feto humano, ao passo que um filhote de cachorro PD7 e PD10 é semelhante a um 30-32 semana e termo infantil, respectivamente. ⁷ Por estas razões, o teste de reflexo recém-nascido em filhotes de ratos neonatais oferece uma oportunidade para capturar a ontogenia e / ou interrupção do desenvolvimento do cérebro.

A bateria de reflexos descritos abaixo são adaptados a partir de estudos por WM Fox e R. Lubics ^{13, 14} WM Fox foi um dos primeiros investigadores a respeito da ontogenia dos reflexos no rato. ¹³ Estes reflexos incluem, mas não estão limitados a, agarramento do membro e colocação, evitar rochedo, endireitamento, acelerado endireitamento, da marcha, de sobressalto auditivo, postura, e da abertura do olho. Ambos dos membros anteriores e dos membros posteriores aperto (referido como palmar e plantar aperto em seres humanos, respectivamente) são facilitados por meio de reflexos espinais e inibição corticoespinhal de áreas motoras não primários. ^{15, 16} dos membros posteriores colocação (reflexo plantar) reflecte a maturação do tracto corticoespinhal. ^{16, 17, 18} Cliff evitação (respostas protectoras), endireitamento (labirinto), e acelerado endireitamento envolvem integração e a comunicação entre a entrada sensorial e a saída do motor (tais como os envolvidos com as vibrissas e vestibular). ^{19, 20, 21} Gait reflecte locomoção. ¹⁴ de sobressalto auditivo avalia estimulação acústica e conexões sinápticas de neurónios gigantes no núcleo reticular pontis caudal. ²¹ Postura envolve projecções adequadas corticais-espinal / espinal-cortical, a força muscular, neuromuscular e inervação. ^{22, 23} Maturation dos receptores de ácido -aminobutírico gama pode correlacionar com a abertura do olho. ²⁴ É importante ter em mente que os reflexos refletir uma rede muito mais complicado e desde aqui é uma correlação geral. Além disso, esses reflexos fornecer um método rápido e fácil de avaliar o desenvolvimento neurológico em idades muito jovens, onde os testes de comportamento mais complexo não é viável.

O objectivo deste estudo é o de proporcionar uma orientação geral para o teste de reflexo do neurodesenvolvimento que podem ser facilmente incorporados em estudos com ratos neonatais experimentais. A metodologia descrita foi realizada em Long-Evans crias de rato neonatal e quantificação dos resultados foi baseada no primeiro dia de aparecimento. O dia em que reflex teste é iniciado e o equipamento utilizado pode ser modificado para se adequar a uma melhor modelo experimental diferente (tal como, por diferentes estirpes e espécies). Ao estabelecer a progressão fisiológica normal de refmaturação lex num modelo animal específico, os investigadores podem avaliar os efeitos de factores de stress externos, manipulações endógenos, e / ou intervenções terapêuticas sobre neurodesenvolvimento em modelos de ratos neonatais. Em geral, o uso de reflexos como uma determinação da maturidade cerebral é vantajoso prever na lesão cerebral perinatal, e é um reflexo do neurodesenvolvimento posteriores.

Protocolo

O Animal Care e do Comitê Use, Ciências da Saúde da Universidade de Alberta aprovou todos os estudos com animais.

Nota: Embora este protocolo pode ser adaptado para outras espécies e estirpes, este protocolo é escrito para ratos Long-Evans. Estes ratos demonstraram ter desempenhos superiores a motor e acuidade visual em comparação com outras estirpes de roedores. ^{25, 26} O protocolo para gravidezes cronometrados, a suplementação dietética, inflamação materna, e reflexos do neurodesenvolvimento é o seguinte.

1. Animais Experimentais

1. Quando os ratos chegam à instalação de alojamento animal, abster-se de qualquer interação por um dia ou dois para permitir que eles se aclimatar ao seu novo ambiente. Seguindo aclimatação, lidar com os ratos a cada dia durante cerca de cinco dias, ou quando os ratos são não mostrando sinais de stress. stress induzido-humana pode alterar os resultados do teste e de Leanúncio para a perda da gravidez.
2. Uma vez que os ratos são confortáveis, a criação começa. Colocar duas fêmeas e um rato macho numa gaiola de criação de dois andares (h = 38 cm, a 1.800 ^cm2 da área do piso durante a noite) (03:00 - 8 AM). Essas gaiolas prevenir o stress e superlotação. De manhã, usando uma pipeta de transferência, lave a vagina dos ratos fêmeas com aproximadamente 0,25 ml de solução salina. Transferir a solução para um tubo de microcentrífuga.
3. Coloque as duas fêmeas e machos de volta para suas respectivas gaiolas convencionais.
4. Ver a solução recolhida na secção 1.2, sob um microscópio de luz (100X) para determinar em que fase do ciclo estral da ratazana está experimentando e se ou não o esperma estão presentes. Se existem esperma, gravar a data como dia embrionário (E1) (Figura 1). Se grávida, dá a fêmea sua própria gaiola no E14.
   NOTA: As células no esfregaço vaginal são, claro, portanto, usar uma configuração de pouca luz. Certifique-se de que o condensador é ajustado para sua configuração mais baixa. de Anúnciosapenas o controle de brilho para escurecer a luz. Se um mostrador brilho está disponível, configurá-lo para 1.

2. dietética Suplementação

NOTA: Este protocolo destina-se a avaliar os efeitos terapêuticos de brócolis dietética consumo broto durante a última semana de gravidez. Crescer os rebentos de acordo com Wu et al. ^27.

1. Mergulhe as sementes de rebentos de brócolos por 2-3 h. Espalhar as sementes sobre uma caixa sprouter semente bancada e definida sobre uma superfície quente para a germinação.
2. Regar as sementes duas vezes por dia, uma vez em a AM (8 - 09:00) e uma vez no PM (3 - 04:00).
3. No dia cinco, coloque os brotos por uma janela para o dia (brotos deve ter duas folhas cada e ficará verde durante o dia).
4. No final do dia, a colheita das couves puxando suavemente os rebentos de brócolos fora da caixa peneirada e deitado sobre uma superfície plana para secar.
5. Uma vez que os rebentos são completamente secas, weigh a 200 mg e em lugar de um saco de plástico selado.
6. Começando em E14, alimentar cada ratazana grávida 200 mg de rebentos de brócolos secas diariamente até PD21 (o dia filhotes são desmamados).

3. Inflamação

1. Para induzir a inflamação e reproduzir de lesões da substância branca em prole, injectar ratazanas grávidas com lipopolissacarídeo (LPS) a cada 12 h no E19 e E20. No dia da injecção, trazer a gaiola para o laboratório a partir da instalação de alojamento. Permitir que o rato grávida para se aclimatar e tornar-se calmo durante pelo menos 1 h. Se um rato apresenta sinais clínicos de danos permanentes nos rins ou sistémica, ele vai ser imediatamente sacrificados e removida a partir do estudo.
2. Pesar a barragem grávida.
3. Dissolve-se 200 ug / kg de LPS (serotipo 0127: B8) em 100 mL de solução salina. Aspirar a solução numa seringa de 1 ml equipada com uma agulha 30 G ½.
   1. Usar uma agulha nova por cada injecção. Permitir que a solução a aquecer-se durante alguns minutos para minimizar o desconforto.
4. Anote o tempo e injetar a barragem grávida intraperitoneal. injecções alternados entre os lados para assegurar a igualdade de distribuição.
   NOTA: Machholz et al. descreve os procedimentos de retenção e de injecção adequadas. ²⁸

4. testes Developmental Reflex

1. Em PD1 (dia do nascimento), filhotes de remover os pesos de nascimento de barragens e ficha. Coloque os filhotes de volta para suas respectivas gaiolas e movê-los para a instalação de animal até PD3. Isto assegura a ligação entre a barragem e materna pup.
   1. Grave o reflexo testes para avaliação confiável. Ajustar a câmara de vídeo de modo que é a velocidade máxima do obturador para análises quadro-por-quadro (1 / s) 1000. Posicione a câmera de vídeo para que ele seja diretamente acima ou ao lado do filhote de rato e todos os materiais utilizados para cada reflexo. Por exemplo, para a colocação dos membros posteriores, colocar a câmara ao lado da cria de rato para assegurar a elevação e colocação do membro posterior é capturado.
   2. Para endireitamento acelerado, coloque a câmera acima do filhote de rato e almofada de aterragem, a fim de gravar a capacidade do filhote de cachorro para a direita no ar.
2. pesos ficha diariamente até ao fim da experiência. Em PD3, iniciar o teste de reflexo do neurodesenvolvimento (Figura 4). Mover gaiolas num quarto silencioso durante um período mínimo de 1 h antes do teste para que se aclimatem ao ambiente.
3. Realizar o teste de reflexo do neurodesenvolvimento em um tempo consistente cada dia, os ratos são noturno. Por exemplo, teste entre nove horas - doze horas por dia. Manter os filhotes directamente sob uma lâmpada de aquecimento ou sobre uma almofada de calor em todos os tempos, para manter uma temperatura corporal estável de 36,5 ° C; filhotes de ratos desta idade perdem calor facilmente. Medida com uma sonda de temperatura rectal. Se feito de forma eficiente, as temperaturas filhotes corpo não mudam, porque eles não são removidos da represa e lixo tempo suficiente. NOTA: Monitorar a temperatura da lâmpada de calor para assegurar que esta não exceda 37 ° C.
   1. Grave a pontuação de cada reflexo cada dia até que uma resposta positiva é observada. A resposta reflexa positiva ocorre quando o cachorro é capaz de executar uma tarefa em dois dias consecutivos. A data da primeira ocorrência de uma resposta positiva é usado para a quantificação. Sem mais testes é necessário seguir a resposta positiva. Por isso, a data de fim de cada reflexo é variável.
4. membro anterior Grasping
   1. A partir do dia PD3, realizar o teste do reflexo forelimb alcance. Coloque uma haste romba contra a palma da mão de cada pata dianteira e aplicar uma ligeira pressão manual. A pressão da luz deve deslocar ligeiramente a pata dianteira para assegurar que o contacto é feito e as crias podem sentir a haste. Agarrando aparecerá como flexão de todos os dígitos em torno da haste. aquisição bem sucedida deste reflexo ocorre quando ambas as patas dianteiras agarrar a haste durante dois dias seguidos.
   2. Pontuação do alcance membro anterior:
      0 para não agarrar
      1 para agarrar bem sucedida por uma pata anterior (para a esquerda ou rforepaw ight pode ser especificado aqui)
      2 para agarrar bem sucedida por ambas as patas dianteiras
5. hindlimb Grasping
   1. A partir do dia PD3, realizar o teste do reflexo hindlimb alcance. Coloque uma haste romba contra a sola de cada pata traseira e aplicar uma ligeira pressão manual. A pressão da luz deve deslocar ligeiramente a pata posterior para assegurar que o contacto é feito e as crias podem sentir a haste. agarrar bem sucedida da haste aparece como a flexão dos dedos em torno da haste. aquisição bem sucedida deste reflexo ocorre quando ambas as patas posteriores agarrar a haste durante dois dias seguidos.
   2. Pontuação do alcance dos membros posteriores:
      0 para não agarrar
      1 para o sucesso agarrar por uma pata traseira (esquerda ou pata traseira direita pode ser especificado aqui)
      2 para agarrar bem sucedida por ambas as patas traseiras
6. corrigindo
   1. A partir do dia PD3, iniciar o teste do reflexo de endireitamento. Segure firmemente o filhote em decúbito dorsal, com as quatro patas na posição vertical. Deixar ir of o filhote e imediatamente iniciar o temporizador. Endireitamento é conseguido quando o cachorro é capaz de virar / rolar sobre a todas as quatro patas, e cada pata é perpendicular ao corpo. Dê a cada filhote um máximo de 15 s para atingir esse objetivo.
   2. Marcar o endireitamento:
      0 para deitado de costas (ou 15 s para o tempo máximo atribuído)
      1 para deitado sobre o lado (esquerdo ou do lado direito pode ser especificado aqui) ou a capacidade do filhote para a direita, mas na postura errada (ou 15 s para o tempo máximo atribuído)
      2 para endireitamento de sucesso e postura adequada
7. colocação hindlimb
   1. Começando em PD4, iniciar o membro posterior colocação de teste do reflexo. Segurar o filhote verticalmente no ar, pelo tronco. Acidente vascular cerebral suavemente o dorso da pata traseira com uma superfície de ponta romba (tal como o bordo de uma mesa). Um reflexo colocação correta é quando o filhote de rato retira a hindlimb estimulada, seguido pelo posicionamento do membro posterior para baixo nessa superfície.
   2. Marcar o pl hindlimbacing reflexo:
      0 para nenhum sucesso
      1 para a colocação de uma pata traseira (esquerda ou pata traseira direita pode ser especificado aqui)
      2 para sucedida colocação hindlimb para ambas as patas posteriores
8. Cliff Avoidance
   1. Começando em PD4, iniciar o teste penhasco evasão. Coloque a cria de rato ao bordo de uma superfície plana, de tal modo que as patas dianteiras e focinho do filhote são sobre a borda. O resultado correcto é uma resposta protectora, em que a cria de rato se afasta da borda da escarpa. A mão do experimentador ou um pouso de espuma é colocado sob o penhasco para pegar o cachorro da queda.
   2. Pontuação evitar penhasco:
      0 para nenhum movimento ou cair fora da borda
      1 por tentativas a afastar-se do rochedo mas com membros de suspensão
      2 para o movimento bem-sucedido longe do precipício
9. Marcha
   1. Comece a avaliação da marcha em PD6. filhotes lugar no centro de um 15 centímetros diameter círculo e permitir que o cachorro 30 s para completar a tarefa. ¹⁴ Uma marcha bem sucedida é realizada quando a cria de rato é capaz de se mover tanto as patas dianteiras fora do círculo em menos de 30 s.
   2. Marcar a marcha como o tempo em segundos que leva o filhote de rato para mover fora do círculo. Grave o tempo que leva o filhote para mover ambas as patas dianteiras fora do círculo. Ficha 30 s, se o filhote é incapaz de completar a tarefa dentro do tempo determinado
10. auditivo Startle
    1. Iniciar a análise de sobressalto auditivo em PD10. Apresentar um ruído alto (sino) diretamente sobre o filhote para avaliar se ou não uma resposta de sobressalto está presente. A resposta de sobressalto positiva é observada quando o filhote exibe um movimento 'empurrão', longe do som.
    2. Marcar o sobressalto auditivo:
       (Ou não) para nenhuma resposta de sobressalto
       (Ou sim) para uma resposta de sobressalto positiva
11. Postura
    1. Comece análise postura em PD12. Place filhotes sobre uma superfície aberta e não escorregadia, e observar a postura do cachorro tem quando se move. Uma postura imaturo é reflectida arrastando do abdómen, quando em movimento, e que aponta perpendicular de ambas as patas dianteiras e patas traseiras em relação ao corpo. Um postura madura é adquirida quando o cachorro pode levantar o abdómen desde a superfície e ambas as patas dianteiras e patas traseiras são apontada directamente, ou em paralelo com o corpo, quando em movimento.
    2. Marcar a postura:
       0 para nenhum movimento
       1 para a postura imaturos quando se deslocam
       2 para a postura maduro enquanto se move
12. Olho aberto
    1. Comece análise de abertura olho em PD12. Grave o dia ambas as pálpebras abertas:
       0 para sem olhos visíveis
       1 para um olho visível (lado esquerdo ou direito pode ser especificado aqui)
       2 para dois olhos visíveis
13. Righting acelerado
    1. A partir do dia PD14, começar a testar corrigir acelerado. Coloque o filhote em uma supina posição 30.48 centimeters acima de uma aterragem de espuma. Soltar o cachorro e observar a sua capacidade de endireitar-se. Endireitamento se refere a quando o cachorro é capaz de virar para a posição prona e terra em suas patas.
    2. Marcar o endireitamento acelerado:
       0 para cair em suas costas
       1 para cair em seu lado (esquerdo ou do lado direito pode ser especificado aqui)
       2 para pouso em suas patas

Nota: Diferentes tipos de quantificação dos reflexos estão disponíveis, dependendo da questão dos investigadores. Quantificação dos reflexos pode ser feito como a observação inicial de um reflexo, primeiro dia da aparência até o desaparecimento do reflexo, o tempo que leva para realizar com sucesso a tarefa, a velocidade de desempenho e / ou melhoria do desempenho ao longo do tempo. ^{13, 14, 29, 30, 31} Para o current estudo, o primeiro dia de aparecimento foi usada como um marcador. Ao usar modelos multíparas, filhotes da mesma ninhada normalmente se comportam de forma semelhante, devido à sua composição genética, no útero e ambiente pós-parto e disponibilidade nutricional. ³² Por conseguinte, um único filhote pode não ser contabilizado como uma n = 1 devido à polarização da maca. Filhotes examinados dentro de uma ninhada pode ser calculada a média para que cada maca representa um n = 1. ^{32, 33} Alternativamente, vários filhotes dentro da mesma ninhada pode ser analisada utilizando o modelo de efeitos mistos, que leva em conta as crias dentro da mesma ninhada. ^{32, 33}

Resultados

A linha do tempo desta concepção experimental é apresentada na Figura 2. ³⁰ Os métodos e os resultados foram publicados previamente. ³⁰ O objetivo do estudo foi avaliar se a suplementação dietética com brotos de brócolis durante a gestação e no período pré-desmama protegida a prole de atraso do desenvolvimento neurológico induzido por exposição in utero a LPS. ratas grávidas cronometradas ...

Discussão

teste de reflexo do neurodesenvolvimento é uma medida preditivo do desenvolvimento cortical anormal e maturação, que podem ser de importância em circunstâncias onde neuropatologia evidente não é evidente. Durante o teste do neurodesenvolvimento, é crítico para assegurar que os filhotes são examinadas ao mesmo tempo por dia. Os ratos são noturnos e, portanto, o seu ritmo circadiano pode alterar o desempenho se o teste é realizado em tempos diferentes durante o dia. ³⁴ O teste deve ser concluído em...

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Reprodução
Pipetas de transferência	Fisherbrand	12-711-9AM	Usado para rubores vaginais.
Solução salina estéril	Hospira	7983254	A solução usada para coletar células durante as rubricas vaginais.
400 µ L Tubos de microcentrífuga	Fisherbrand	05-408-120	Usado para segurar a solução salina.
Microscópio óptico	Leica	Leica ATC 2000	Para observação da solução salina. Pode ser qualquer microscópio de luz usado no laboratório.
Slides	Fisherbrand	12-552-5	A solução salina é colocada na lâmina. Pode ser qualquer slide usado no laboratório.
Lamínulas	Fisherbrand	12-545-F	Para lamínula os slides. Pode usar qualquer lamínula usada no laboratório.
Dietary  Suplementação
Sementes de brotos de brócolis	Sementes germinadas da mumm As		sementes de brotos de brócolis são encomendadas e cultivadas em laboratório.
Caixa de Sementes de Bancada Sprouter	Mumm's Sprouting Seeds		Uma caixa é usada para germinar e cultivar as sementes antes da colheita.
		250 mL	O copo é usado para embeber a semente. Qualquer tamanho de béquer que caiba pode ser usado.
Inflamação Materna
Lipoplissacarídeo (LPS)	Sigma	L3129	A endotoxina usada para imitar a inflamação materna.
Seringa de 1 mL	Seringa BD	309659	Usada para injetar a rata grávida.
Calibre (30 G x 1/2)	BD Agulha PrecisionGlide	305106	Use a agulha menor para evitar dor e desconforto.
Solução salina estéril (cloreto de sódio a 0,9%, USP)	Hospira		é usada para dissolver o LPS.
Pesos
Scale	Instrumento		Para registrar os pesos. Pode ser qualquer escala com 2 casas decimais usada no laboratório.
Reflexos do Neurodesenvolvimento
Haste			Pode ser um clipe de papel ou palito de dente. Isso é para agarrar os membros anteriores e posteriores.
Papel de filtro redondo	Whatman	1001 150	Papel de 15 cm de diâmetro utilizado para análise da marcha.
Temporizador	Fisher Scientific	06-662-51	Para cronometrar o tempo alocado para endireitar e marchar.
		romba	Pode ser uma borda de uma mesa. Isso é para colocação de membros posteriores e prevenção de penhascos.
Aterrissagem			Para quando os filhotes realizam o endireitamento acelerado.
Gravador de vídeo	Sony	VCT-D580RM	Para gravar todos os reflexos testados. Deve ser capaz de gravar a 1/1.000 fps
Bell			Para sobressalto auditivo.
Lâmpada ou almofada			Para manter a temperatura corporal dos filhotes em exame.