Aqui, apresentamos a preparação de uma decocção er-xian (EXD) em quatro etapas - imersão, decocção, filtração e concentração - e demonstram a administração de um soro contendo EXD preparado para ratos. Estes métodos são aplicáveis ao estudo in vivo e in vitro de decocções à base de plantas, como medicamentos tradicionais chineses.
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Artigo de método
Preparação de Fitoterapia: Decocção Er-Xian e Soro contendo Er-Xian para
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Resumo
Resumo
A medicina tradicional à base de plantas, uma medicina alternativa no cenário clínico, recebeu atenção crescente nos últimos anos. Antes da entrega ao corpo, um procedimento de extração adicional é comumente requerido para liberar os constituintes ativos das ervas cruas. A decocção de água é um procedimento de extração clássico que ainda é amplamente utilizado nas configurações clínicas. Aqui, propomos um protocolo detalhado para a decocção er-xian (EXD), a fim de aplicar decocções à base de plantas para estudos experimentais. O cálculo de uma dose apropriada para animais é descrito, bem como os quatro passos principais de EXD: imersão, decocção de água, filtração e concentração. Além disso, o EXD contendo soro é introduzido em ratos como meio de validação in vitro . Aqui, os ratos foram administrados oralmente EXD por três dias. As amostras de sangue foram então recolhidas, inactivadas, centrifugadas e filtradas. O soro, diluído com o meio de cultura, pode ser utilizado para tratar células ou tecidos em vItro. Por exemplo, EXD foi aplicado tanto em estudos in vivo como in vitro e demonstrou que o EXD melhora a osteogênese. Este protocolo pode ser usado como referência para a preparação e aplicação de medicamentos à base de plantas.
Introdução
O interesse no estudo e na aplicação de ervas medicinais tradicionais está crescendo atualmente. Ao contrário das drogas modernas, nas quais os ingredientes químicos são definitivos, as fórmulas à base de plantas possuem alguns ingredientes desconhecidos e requerem processos de extração para permitir a entrega de seus compostos ativos. Embora muitos estudos tentam selecionar um composto pequeno com uma estrutura bem conhecida como representante da erva inteira ou fórmula herbal, nem as eficiências farmacológicas nem os mecanismos podem ser considerados equivalentes 1 , 2 . Embora as impressões digitais permit....
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Protocolo
O protocolo segue as diretrizes de cuidados com os animais da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Xangai e é aprovado pelo experimento animal Comitê de Ética Animal de Xangai.
1. Protocolo I: Preparação do EXD
- Cálculo
- Administrar o EXD a um grupo de tratamento de 10 camundongos de região de controle de Imprinting Control (ICR) de seis meses de idade (0,02 kg / mouse), 5 dias por semana durante 12 semanas.
NOTA: Um total de 1,702 EXDs são necessários. Como os EXDs são medidos em incrementos discretos, na prática real, administre 2 EXDs. - Calcule o volume de EXD aplicado por m....
- Administrar o EXD a um grupo de tratamento de 10 camundongos de região de controle de Imprinting Control (ICR) de seis meses de idade (0,02 kg / mouse), 5 dias por semana durante 12 semanas.
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Resultados
O efeito de EXD sobre a densidade óssea de camundongos OVX
A coloração com hematoxilina e eosina (H & E) da vértebra lombar mostra aumento da trabécula óssea após o tratamento com EXD in vivo ( Figura 1A , painel direito) em comparação com os do grupo OVX ( Figura 1A , painel esquerdo). A Figura 1B mostra as imagens μCT representativas do 4º lombar em camu.......
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Discussão
Nos últimos anos, tem sido dada mais atenção às ervas medicinais, um tipo de medicina alternativa que foi aplicada no cenário clínico no mundo oriental há milhares de anos. Diferente do padrão de "banco para cama" da medicina moderna, a medicina herbal tradicional exige primeiro o padrão de "cama a bancada" para explicar seus mecanismos. Isso pode ser seguido de validação realizada no estágio do banco e processamento para o desenvolvimento de novos medicamentos otimizados. Até agora, existem vários m.......
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Divulgações
Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado pela National Natural Science Foundation of China (81573992). Agradecemos a Emily K. Lo e Kathleen DiNapoli pela assistência de edição de idiomas.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Curculigo orchioides Gaertn (9 g), Herbaa Epimedii (9 g), Radix Morindae Officinalis (9 g), Radix Angelicae Sinensis (9 g), Córtex Phellodendri (6 g) e Rhizoma Anemarrhenae (6 g) | Kang-qiao Medicina Chinesa Yinpian Co. Ltd (Xangai, CN) | 160922 | componentes EXD |
| Papel de filtro | GElifesciences | 99-103-952 | Filtro EXD decocção antes da concentração |
| Imprinting Control Region (ICR) camundongos | Shanghai Laboratory Animal Center | SCXK 2007-0005 | Estudo in vivo |
| Ratos Sprague Dawley | Laboratory Animal Center | SCXK 2007-0005 | Preparação de soro contendo EXD |
| Filtro de seringa | Millipore | SLGP033RB | 0,22 µ m |
| agulhas de gavagem (10 ml) | Shanghai BO Ge departamento de vendas comerciais | 59104274 | Administração de EXD |
| Cetamina (80 mg/kg) | Fujian Gutian Pharma Co. Ltd | H35020148 | Anestesia |
| xilazina (10 mg/kg) | Sunway Pharma Co. Ltd | CB07591 | Anestesia |
| Dulbecco' modificação de Eagle' s meio Dulbecco (DMEM) meio de cultura | Gibco | 12800-116 | DMEM com 2 mM L-glutamina e sem ribonucleosídeos e ribonucleotídeos |
| Estreptomicina | Sigma | 1277 | 100 µ g / ml |
| Penicilina | Sigma | 4687 | 100 µ g / ml |
Referências
- Zhang, L. G., Ouyang, X. W., Wu, T. T., Ni, L. J., Shi, W. Z. Quantitative evaluation of in vitro effects and interactions of active fractions in a Chinese medicinal formula (Yaotongning Capsule) on rat chondrocytes. J Ethnopharmacol. 155 (3), 1424-1432 (2014).
- Ogawa, Y., Fujii, Y., Sugiyama, R., Konishi, T.
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Reimpressões e permissões
