Demonstramos um ensaio para analisar as pistas ambientais e genéticas que influenciam o comportamento de acasalamento na mosca da fruta Drosophila melanogaster .
É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.
Artigo de método
Um método para testar o efeito de sugestões ambientais no comportamento de acoplamento em
Neste artigo
Resumo
Resumo
A movimentação sexual de um indivíduo é influenciada pelo genótipo, experiência e condições ambientais. A forma como esses fatores interagem para modular os comportamentos sexuais permanece mal compreendida. Em Drosophila melanogaster , as pistas ambientais, como a disponibilidade de alimentos, afetam a atividade de acasalamento oferecendo um sistema atraente para investigar os mecanismos que modulam o comportamento sexual. Em D. melanogaster , as sugestões ambientais são muitas vezes detectadas através dos sistemas gustativos e olfativos quimiossensíveis. Aqui, apresentamos um método para testar o efeito de pistas químicas ambientais sobre o comportamento de acasalamento. O ensaio consiste em uma pequena arena de acasalamento contendo meio alimentar e um casal de acasalamento. A frequência de acasalamento para cada casal é monitorada continuamente por 24 h. Aqui apresentamos a aplicabilidade deste ensaio para testar compostos ambientais de uma fonte externa através de um sistema de ar pressurizado, bem como a manipulação dos componentes ambientais diretamente na arena de acasalamento. VocêUm sistema de ar pressurizado é especialmente útil para testar o efeito de compostos muito voláteis, enquanto a manipulação de componentes diretamente na arena de acasalamento pode ser útil para determinar a presença de um composto. Este ensaio pode ser adaptado para responder a perguntas sobre a influência de pistas genéticas e ambientais sobre comportamento e fecundidade de acasalamento, bem como outros comportamentos reprodutivos masculinos e femininos.
Introdução
Os comportamentos reprodutivos tipicamente têm altos custos de energia, especialmente para as mulheres, que produzem gametas maiores do que os machos e devem escolher cuidadosamente as condições para elevar sua prole em desenvolvimento. Devido ao custo da energia, não é surpreendente que a reprodução esteja ligada a condições nutricionais. Isso é verdade na maioria, se não em todos, animais, incluindo mamíferos, cuja puberdade pode ser adiada pela desnutrição e cuja excitação sexual pode ser afetada negativamente pela restrição alimentar 1 .
A reprodução do organismo modelo genético Drosophila melanogaster....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Protocolo
1. Caixa de acoplamento ambientalmente controlada
- Para garantir uma área de teste controlada e fácil de limpar, configure um armário de cozinha de aço inoxidável de 120 cm x 64 cm x 85 cm como ilustrado na Figura 1A.
- Faça um furo na parte de trás do armário logo abaixo do teto e quatro conjuntos de quatro furos nos lados, cada um com um diâmetro de 2 cm. Perfure os dois primeiros conjuntos de quatro furos, em cada lado da caixa a uma altura de 7 cm do fundo da caixa e com 12,5 cm entre os orifícios. Perfure os outros dois conjuntos de cada lado da caixa a uma altura de 35 cm da parte inferior.
NOTA: Os quatro conjuntos de q....
- Faça um furo na parte de trás do armário logo abaixo do teto e quatro conjuntos de quatro furos nos lados, cada um com um diâmetro de 2 cm. Perfure os dois primeiros conjuntos de quatro furos, em cada lado da caixa a uma altura de 7 cm do fundo da caixa e com 12,5 cm entre os orifícios. Perfure os outros dois conjuntos de cada lado da caixa a uma altura de 35 cm da parte inferior.
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Resultados
O uso desse ensaio contínuo, comportamento de acasalamento e freqüência de acoplamento em específico, pode ser determinado em condições ambientais experimentais. Para controlar as condições ambientais, transformamos um armário de cozinha de aço inoxidável em uma área de teste, com sua própria fonte de luz e difusão, o que garante uma alta abundância de luz e um mínimo de brilho do topo das arenas de acoplamento ( Figura 1A ) . A área de teste interna é completamente enca.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Discussão
Este protocolo descreve um ensaio para testar o comportamento de acasalamento ao longo de 24 h, enquanto controla continuamente as pistas ambientais que um casal de acasalamento tem a hipótese de usar para determinar a freqüência de acasalamento. É possível aumentar a frequência de acasalamento em resposta ao ar de fermento entregue através de um sistema de ar pressurizado quando o meio também contém levedura ( Figura 2B ). Além disso, uma resposta semelhante na freqüência de acoplamento pode ser observ.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Divulgações
Os autores não têm interesses concorrentes a divulgar.
Agradecimentos
Agradecemos ao Bloomington Drosophila Stock Center pelas ações da mosca; C. Gahr, JT Alkema e S. van Hasselt por sua tentativa inicial de desenvolver o ensaio de ar pressurizado; Jasper Bosman, pelo conselho sobre o cultivo de fermento; E Rezza Azanchi e Joel Levine por desenvolverem originalmente o monitoramento do lapso de tempo do comportamento de acoplamento de Drosophila . A JA Gorter foi apoiada por uma bolsa do Programa de Pós-Graduação da Escola de Pesquisa de Neurociências BCN / NWO. Este trabalho foi apoiado em parte pela organização holandesa de pesquisa científica (NWO) (referência: 821.02.020) a JC Billeter.
....Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| ArmárioArmário de | |||
| cozinha em aço inoxidável | Horecaworld | 7412.0105 | |
| LEDs brancos | Lucky Light | ll-583wc2c-001 | Branco frio, 20 mAmp e 2 V |
| LEDs vermelhos | Lucky Ligt | ll-583vc2c-v1-4da | Comprimento de onda entre 625 nm, 20 mAmp e 6 V |
| Resistor | Royal Ohm | CFR0W4J0561A50 | 560 ohm, 0,25 W, 250 V e 5% de tolerância |
| Aplicativo de medidor de luz para smartphone | Patrick Giudicelli | Medidor de luz/lux GRÁTIS, versão 1.1.1 | |
| Temporizador de energia | Alecto | TS-121 | |
| Suportes | Ângulo agudo 5 por 5 mm, 2 x 5450 e 1 x 1100 mm de comprimento | ||
| Placa | 1190 x 545 x 5 mm | ||
| Papel de filtro lençóis | Filtros LEE | 220 | White frost |
| Ventilador pequeno | Nanoxia Silêncio profundo | 4260285292828 | 80 mm Ventilador de PC ultra-silencioso, 1200 RPM |
| Ventilador grande | Nanoxia Silêncio profundo | 4260285292910 | Ventilador de PC ultra-silencioso de 120 mm, câmera de webcam de 650-1500 RPM |
| Logitech | 950270 | B910 HD WEBCAM OEM, Ângulo: 78 graus, resolução: 5 milhões de pixels | |
| Software da câmera | DeskShare | Monitor de segurança pro | |
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
| Criação de moscas | |||
| Frascos de criação de moscas | Flystuff | 32-130 | 6oz Estoque de Drosophila garrafa |
| Flypad | Flystuff | 59-114 | |
| Moscas | Canton-S | ||
| Frascos de criação de moscas | Dominique Dutscher | 789008 | tubos de Drosophila estreitos 25x95 mm |
| Incubadora | Sanyo | MIR-154 | |
| Placa quente magnética | Heidolph | 505-20000-00 | MR Hei-Standard |
| Agar | Caldic Ingredientes B.V. | 010001.26.0 | |
| Glicose | Gezond& wel | 1019155 | Dextrose/Druivensuiker |
| Sacarose | Van Gilse | Açúcar granulado | |
| Fubá | Flystuff | 62-100 | |
| Gérmen de trigo | Gezond& wel | 1017683 | |
| Farinha de soja | Flystuff | 62-115 | |
| Melaço | Flystuff | 62-117 | |
| Levedura seca ativa | Red Star | ||
| Tegosept | Flystuff | 20-258 | 100% |
| Peptona (bacto) | BD | 211677 | |
| Ácido Acético | Merck | 1000631000 | Glacial, 100% |
| Greiner bio-one de petris pequeno | 627102 | 35 x 10 mm com aberturas Filme de | |
| parafina | Bemis NA | Parafilm | |
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
| Configuração de levedura e ar pressurizado | |||
| Petridish grande | Gosselin | BP140-01 | 140 x 20,6 mm |
| Água ultrapura | Millipore corporation | MiliQ | |
| Extrato de levedura | BD | 212750 | |
| Ágar (puro) | BD | 214530 | bacto |
| Glicose (0(+)-glicose monohidratada) | Merck | 18270000004 | |
| Open caps | Schott | 29 240 28 | GL45 |
| Septo de silicone | VWR | 548-0662 | |
| Conexões de anteparo farpado | Nalgene | 6149-0002 | |
| Grande diâmetro do tubo de | : externo 1,2 cm e interno 0,9 cm | ||
| Diâmetros pequenos dos | : externo 0,8 cm e interno 0,5 cm | ||
| tubo de 15 ml | Falcon | ||
| Aquarium pump | Sera precision | Sera air 110 plus, AC 220-240 V, 50/60 Hz, 3 W e pressão >100 mbar | |
| Carvão ativado | Superfish | A8040400 | Norit Carvão ativado |
| de filtro descartável | Whatman | 10462100 | |
| Pipetas serológicas | VWR | 612-1600 | |
| Seringa | BD Plastipak | 300013 | |
| Cola quente | Pattex | ||
| Filtro de seringa | Whatman | FP 30/tamanho dos poros 0,45 mm CA-S | |
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
| AnáliseSoftware estatístico | |||
| R | lme4 |
Referências
- Hileman, S. M., Pierroz, D. D., Flier, J. S. Leptin nutrition, and reproduction: timing is everything. J. Clin. Endocrinol. Metab. 85 (2), 804-807 (2000).
- Grosjean, Y., et al. An olfactory receptor for food-derived odours promotes male courtship in Drosophi....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Reimpressões e permissões
