Artigo de método
* These authors contributed equally
Os protocolos apresentados descrevem como realizar um ensaio de inibição de hemaglutinação para quantificar os anticorpos específicos de gripe de amostras de soro de destinatários de vacina contra gripe. O primeiro ensaio determina as concentrações de antígeno viral ideal por hemaglutinação. O segundo ensaio quantifica anticorpos específicos da gripe através da inibição da hemaglutinação.
Anticorpos são comumente usados como marcadores de substituto para serológica proteção contra gripe e outros patógenos. Conhecimento detalhado da produção de anticorpos pré- e pós-vacinação é necessária para entender a imunidade induzida pela vacina. Este artigo descreve um protocolo ponto-a-ponto fiável para determinar anticorpos específicos de gripe. O primeiro protocolo descreve um método para especificar os montantes de antigénio necessários para hemaglutinação, que padroniza as concentrações para uso posterior no segundo protocolo (ensaio de hemaglutinação, ensaio HA). O segundo protocolo descreve a quantificação de anticorpos específicos de gripe contra diferentes cepas virais usando uma diluição serial de humana soro ou célula sobrenadantes de cultura (ensaio de inibição da hemaglutinação, ensaio HI).
Como um exemplo aplicado, mostramos a resposta imunitária de uma coorte saudável, que recebeu uma vacina trivalente inativada. Além disso, é mostrada a reactividade cruzada entre os vírus da gripe de diferentes e métodos para minimizar a reactividade cruzada usando diferentes tipos de animais células vermelhas do sangue (hemácias) são explicados. A discussão destaca vantagens e desvantagens dos ensaios apresentados e como a determinação de anticorpos específicos de gripe pode melhorar a compreensão da imunidade vacina-relacionados.
Infecção com vírus da gripe está associada com altos custos de saúde1,2,3,4, mortalidade e morbidade considerável. Em particular, idosos, recém-nascidos, gestantes e pacientes com doença crônica são em risco para desfechos clínicos mais graves. Portanto, a vacinação contra estirpes de vírus da gripe de circulação é a principal medida para diminuir o fardo da doença nessas populações de alto risco. O aumento da resposta imune individual após a vacinação, por exemplo, anticorpos específicos gripe acima de um limite de proteção, reduz ....
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Os protocolos de estudo foram aprovados pelo Comitê de revisão ética local (www.EKNZ.ch) e foi obtido consentimento escrito de todos os participantes.
1. soro coleção
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Resposta de anticorpos induzidos pré e pós-vacinação contra Influenza A H3N2
A resposta de anticorpo induzida pela vacina foi avaliada em 26 voluntários saudáveis que receberam a vacina contra a gripe uma subunidade trivalente inativada contendo Influenza A/H1N1/Califórnia/2009, A/H3N2/Texas/2012 e B/Massachusetts/02/2012 antes de 2014 / temporada de gripe de 2015. A Figura 6 mostra um exemplo representativo de 2 receptores de vacina. Curi.......
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Quantificação de anticorpos específicos vírus influenza pré- e pós-vacinação é uma importante ferramenta necessária para estudos de vacina. Com base nas medidas de proteção contra a infecção pelo vírus, tais como soroproteção substituto (> 01:40) ou seroconversão (aumento de 4-fold título), vacinação, estratégias podem ser otimizados9. Usando os protocolos fornecidos pode determinar: (i) o potencial de hemaglutinação, de um vírus específico e (ii) os anticorpos para o vírus de interesse.
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A.E. foi apoiado por uma pesquisa concede a partir do programa "SNSF Ambizione Score" (PZ00P3_154709), "Forschungsfond, strategischer Förderung Projekte" Universidade de Basel, Basel de Stiftungsinfektionskrankheiten e Bangeter Naraa Stiftung. L.K. foi apoiado por uma bolsa de técnico Universidade de Graz, Áustria. J.L. confirma apoio por uma comunhão IDoutora da iniciativa SystemsX.ch no programa de biologia de sistemas (9th chamada).
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Reservatórios de pipeta multicanal descartáveis de 25 ml | Integra | 4312 | |
| tubos de PCR de 8 poços | Marca GMBH | 781332 | Para alíquotas de soro |
| Placa de microtitulação de 96 poços, | TPP | 92097 | Para ensaio HI ao usar hemácias de mamíferos |
| Placa de microtitulação de 96 poços, | Corning em | 3897 | Para ensaio HI ao usar hemácias |
| aviáriasAqua ad iniect. Steril | Bichsel AG | 1000004 | Para preparar soluções de antígeno influenza e filtrado de cólera |
| Frango RBC (10%) | Cedarlane | CLC8800 | suspensão de 10% de glóbulos vermelhos de frango em solução de Alsever |
| Filtrado de cólera | Sigma-Aldrich | C8772 | Usado como enzima destruidora de receptor (RDE) |
| Dulbecco's PBS | Sigma-Aldrich | D8537 | Para diluir as amostras de soro, hemácias e antígenos |
| Eppendorf Pipeta multicanal, 12 canais, 10-100 µ l | Pipeta multicanal Sigma-Aldrich | Z683949 | |
| Eppendorf, 8 canais, 10-100 µ l | Sigma-Aldrich | Z683930 | |
| Porquinho-da-índia RBC (10%) | Cedarlane | CLC1800 | suspensão de 10% de glóbulos vermelhos de cobaias em solução de Alsever |
| Influenza Anti-A/California/7/09 HA soro | NIBSC | 14/134 | Usado como controle positivo no ensaio HI |
| Influenza Anti-A/Suíça/9715293/2013-like HA sérum | NIBSC | 14/272 | Usado como controle positivo no ensaio HI |
| Influenza Anti-A/Texas/50/2012-Like HA Serum | NIBSC | 13/178 | Usado como controle positivo no ensaio HI |
| Influenza Anti-B/Brisbane/60/2008-HA sérum | NIBSC | 13/254 | Usado como controle positivo no ensaio HI |
| Influenza Anti-B/Massachusetts/02/2012 Soro HA | NIBSC | 13/182 | Usado como controle positivo no ensaio HI |
| Antígeno Influenza A/Califórnia/7/09 (H1N1)(NYMC-X181) | NIBSC | 12/168 | Inativado, parcialmente purificado A/California/7/09 (H1N1)(NYMC-X181) vírus (ca. 46µ gHA/ml) |
| Antígeno da gripe A/Suíça/9715293/2013 (NIB88) | NIBSC | 14/254 | Vírus A/Suíça/9715293/2013 (NIB88) inativado, parcialmente purificado (ca. 55µ gHA/ml) |
| Antígeno da gripe A/Texas/50/2012 (H3N2)(NYMCX-223) | NIBSC | 13/112 | Inativado, parcialmente purificado A/Texas/50/2012 (H3N2)(NYMCX-223) vírus (ca. 74µ gHA/ml) |
| Antígeno da gripe B/Brisbane/60/2008 | NIBSC | 13/234 | Vírus B/Brisbane/60/2008 inativado, parcialmente purificado (ca. 42µ gHA/ml) |
| Antígeno da gripe B/Massachusetts/02/2012 | NIBSC | 13/134 | Vírus B/Massachusetts/02/2012 inativado, parcialmente purificado (ca. 35µ gHA/ml) |
| Tubos de Soro | S-Monovette, Sardstedt | 01.1601.100 | Para extração de soro com ativador de coagulação |
| Único Doador Humano RBC, Tipo 0 | Pesquisa Inovadora | IPLA-WB3 | Suspensão de glóbulos vermelhos humanos de dador único em solução de Alsever (ca. 26%) |
| Turquia RBC (10%) | Cedarlane | CLC1180 | suspensão de 10% de glóbulos vermelhos de peru em solução de Alsever |
| Solução salina tamponada com fosfato (PBS) | Gibco |
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