Aqui, apresentamos um protocolo para descrever o uso de neurotrofina 4 (NTF4) sistematicamente e diretamente para remodelar os músculos laríngeos do envelhecimento do rato.
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Artigo de método
A infusão subcutânea de neurotrofina 4 com bombas osmóticas ou injeção muscular direta melhora o envelhecimento dos músculos da laringe do rato
Neste artigo
Resumo
Resumo
A disfunção laríngea em idosos é uma das principais causas de incapacidade, de distúrbios de voz à disfagia e perda de reflexos protetores das vias aéreas. Poucas, se houver, existem terapias que visam a disfunção do músculo laríngeo relacionado à idade. As neurotrofinas estão envolvidas na inervação muscular e na diferenciação das junções neuromusculares (NMJs). Pensa-se que as neurotrofinas melhoram a transmissão neuromuscular ao aumentar a liberação do neurotransmissor. As junções neuromusculares (NMJs) tornam-se menores e menos abundantes no envelhecimento dos músculos da laringe do rato, com evidência de desnervação funcional. Nós exploramos os efeitos do NTF4 para o uso clínico futuro como um procedimento terapêutico para melhorar a função no envelhecimento dos músculos da laringe humana. Aqui, fornecemos o protocolo detalhado para aplicação sistêmica e injeção direta de NTF4 para investigar a capacidade do músculo laríngeo do rato em envelhecimento de remodelar em resposta à aplicação NTF4. Neste método, os ratos receberam NTF4 sistematicamente via oBomba smotic ou por injeção direta através das pregas vocais. Os músculos laríngeos foram então dissecados e utilizados para exame histológico de morfologia e denervação relacionada à idade.
Introdução
Os músculos laríngeos se contraem de forma rápida e consistente e são vulneráveis aos efeitos adversos do envelhecimento. Espera-se que essa atividade constante contribua para problemas de voz ou disfagia observados em pessoas com mais de 65 anos de idade 1 , 2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 7 . Vários mecanismos moleculares e fisiopatológicos contribuem para esta disfunção relacionada à idade. Esses mecanismos podem incluir a remodelação da mucosa....
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Protocolo
Use ratos machos Fischer 344-Brown Norway com 6 e 30 meses de idade para este protocolo. Os ratos foram obtidos da colônia de roedores do Instituto Nacional do Envelhecimento. Utilizamos ratos para este estudo porque a estrutura da laringe de ratos é semelhante à do ser humano, servindo funcionalmente para a proteção das vias aéreas e vocalizações específicas de espécies. Este estudo foi realizado de acordo com a Política PHS sobre Cuidados Humanos e Uso de Animais de Laboratório, O Guia NIH para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório, e a Lei de Bem-estar dos Animais (7 USC et seq.); O protocolo de uso de animais foi aprovado pelo Comitê Institucional de Cuidados....
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Resultados
Os ratos foram eutanásicos após 2 semanas de infusão de bomba osmótica ou 1 semana após a injeção direta de NTF4. Larynges foram colhidos, colocados em crioprotectores (30% de sacarose e 70% de solução salina tamponada com fosfato) e depois seccionados em série em 10 μm de largura com um criostato. O envelhecimento dos músculos laríngeos é afetado pela administração de NTF4 25 . Além de ratos jovens e velhos, comparamos o lado injetado e não injetado dos músculos .......
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Discussão
Os músculos laríngeos são vulneráveis aos efeitos desfavoráveis do envelhecimento. Estudos anteriores demonstraram alterações nos músculos da laringe envelhecidos que incluem mudanças no tamanho da fibra, número total de fibras, capacidade regenerativa, tamanho NMJ e alterações quantitativas, além de variações na função contrátil e mudanças da isoforma da miosina 4 , 11 , 27 , 30 ,
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado por bolsas do Instituto Nacional de Surdez e Outros Transtornos de Comunicação (R21DC010806 para CAM e JCS e R01DC011285 para CAM).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Neurotrofina 4 | Pepro Tech | 450-04 | 200 ng em 50 μ L |
| Bomba Osmótica Alzet | DURECT Corporation | 2001D | |
| 30 ° endoscópio | Stoltz | 61029D | |
| 50 mm 30 gauge 100-μ L Hamilton | 84850 e 201812 | ||
| solução salina (solução de cloreto de sódio) | Cloridrato de cetamina Sigma-Aldrich | S8776 | |
| Henry Schein | 56344 | ||
| cloridrato de xilazina | Henry Schein | 33198 | |
| 25 G 5/8 agulha | Becton-Dickinson | 305901 | |
| seringa de 1 mL | Becton-Dickinson | ||
| pomada oftálmica | Henry Schein | 8897 | |
| clippers | Oster | 44-018 | |
| etanol | Decon | 2716 | |
| iodo (Betadine) | Purdue Pharma L.P. | ||
| de aquecimento | Sunbeam | 731-5 | |
| 5-0 fio de sutura de nylon | AD Surgical | PMN-518R6 | |
| crile hemostat | Fine Science Tools | 13005-14 | |
| pinça de amarração de sutura delicada | Fine Science Tools | 11063-07 | |
| meloxicam | Henry Schein | 49756 | |
| carprofeno | Merritt Veterinary Supplies | 148700 | |
| pomada antibiótica | Henry Schein | 57110 | |
| acepromizina Aceproject | Henry Schein | 3845 | |
| isoflurano Isothesia | Henry Schein | 50033 | |
| caixa de indução (caixa de anestesia) | Harvard Apparatus | 50-0116 | |
| tanque comprimido de oxigênio | Scott Gross | UN1072 | |
| plexiglas plataforma | Small Parts Inc (Amazon) | ||
| pinça com ponta de borracha | Ferramentas de ciência fina borracha | 11075-00 | |
| borracha líquida para pinça acima | Lowe's | 42518 | |
| (seringa BD cortada no comprimento) | de | Becton-Dickinson | |
| rinocero-laríngea estroboscópio | Kay-Pentax | RLS 9100 B | |
| gravador de vídeo | Kay-Pentax | ||
| sacarose | Sigma-Aldrich | S0389-500G | |
| solução salina tamponada com fosfato | Sigma-Aldrich | P4417-100TAB | |
| criostato Mictotom HM525 | Thermo Scientific | HM 525 | |
| Gill 1 hematoxilina | VWR | 10143-142 | |
| Shandon eosina-Y alcoólico | Thermo Fisher Scientific | 6766007 | |
| anti-canal de sódio Nav1.5 anticorpo produzido em coelho | Sigma-Aldrich | S0819 | |
| Texas red-X faloidina | Sigma-Aldrich | T7471 | |
| alfa-bungarotoxina alexa fluor 488 conjugado | Thermo Fisher Scientific | B-13422 | |
| Anestesia para pequenos animais máquina | Smiths Medical | CDS 9000 |
Referências
- Trupe, E. H., et al. Correlates and consequences of eating dependency in institutionalized elderly. J. Am. Geriatrics Society. 34 (3), 192-198 (1986).
- Ward, P. H., Colton, R., McConnell, F., Malmgren, L., Kashima, H., Woodson, G. Aging of the voice and swallowing. Otolaryngol. Head Neck Surg. 100 (4), 283-286 (1989).
- Gay, E. ....
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Reimpressões e permissões
