Apresentamos um método detalhado para estudar a fisiologia placentária humana in vivo a termo. O método combina a amostragem de sangue dos vasos entrantes e de saída nos lados materno e fetal da placenta com medidas de ultra-som do fluxo sangüíneo do volume e amostragem do tecido placentário.
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Artigo de método
A abordagem de amostragem de 4 embarcações para estudos integrativos de fisiologia placentária humana
Neste artigo
Resumo
Resumo
A placenta humana é altamente inacessível à pesquisa enquanto ainda está no útero . A compreensão atual da fisiologia placentária humana in vivo é, portanto, baseada em grande parte em estudos com animais, apesar da alta diversidade entre espécies em anatomia placentária, hemodinâmica e duração da gravidez. A grande maioria dos estudos de placenta humana são estudos de perfusão ex vivo ou estudos de trofoblasto in vitro . Embora os estudos in vitro e os modelos animais sejam essenciais, a extrapolação dos resultados desses estudos para a placenta humana in vivo é incerta. Pretendemos estudar a fisiologia da placenta humana in vivo a termo e apresentar um protocolo detalhado do método. Explorando o acesso intraabdominal à veia uterina imediatamente antes da incisão uterina durante a cesariana planejada, recolhemos amostras de sangue dos vasos entrantes e de saída nos lados materno e fetal da placenta. Ao combinar conMedições de centragem a partir de amostras de sangue com medidas de fluxo sanguíneo volumétrico, podemos quantificar a absorção placentária e fetal e a liberação de qualquer composto. Além disso, amostras de tecido placentário dos mesmos pares mãe-feto podem fornecer medições da densidade e atividade do transportador e outros aspectos das funções placentárias in vivo . Através deste uso integrativo do método de amostragem de 4 embarcações, somos capazes de testar alguns dos conceitos atuais de transferência de nutrientes da placenta e metabolismo in vivo , tanto em gravidezes normais quanto patológicas. Além disso, este método permite a identificação de substâncias segregadas pela placenta para a circulação materna, o que pode ser um importante contributo para a busca de biomarcadores da disfunção placentária.
Introdução
De acordo com o National Institutes of Health, EUA, a placenta é o órgão menos entendido no corpo humano 1 , 2 , 3 . É difícil acessar e estudar a placenta humana in vivo sem impor riscos éticos na gravidez em curso. Os estudos da função placentária no ser humano são, portanto, amplamente baseados em modelos in vitro e ex vivo . A maioria dos estudos anteriores in vivo de transporte placentário e metabolismo foram realizados em animais 4 , 5 , ....
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Protocolo
O estudo foi aprovado pelos funcionários de proteção de dados do Hospital Universitário de Oslo e do Comitê Regional de Ética em Pesquisa Médica e de Saúde, no sul da Noruega 2419/2011. Todos os participantes assinaram um consentimento informado e esclarecido na inclusão.
1. Preparações
NOTA: Uma linha de tempo para os procedimentos está descrita na Figura 1 .
Figura 1 : Diagrama de fluxo descrev....
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Resultados
O método de amostragem de 4 vasos é aplicável na prática clínica e obtivemos amostras de sangue com sucesso de 209 pares de mãe / bebê. Em 128 destes, também conseguimos medir o fluxo sanguíneo do volume. A amostragem completa de 4 vasos e as medidas de fluxo de boa qualidade de vasos maternos e fetais foram obtidas em 70 pares mãe-feto ( Figura 3 ). Além disso, até agora, colhemos amostras de sangue e placenta de 30 pacientes pré-eclâmicos. Nós já publicamo.......
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Discussão
O método de amostragem de 4 vasos da placenta é relevante para três propósitos principais. Primeiro, pode ser usado para estudar como substâncias específicas são absorvidas pela placenta do lado materno e, possivelmente, transferidas para a circulação umbilical e para o feto, conforme demonstrado pelos estudos de glicose e aminoácidos. Em segundo lugar, o método é altamente relevante para estudar substâncias produzidas pela placenta e liberadas para a circulação materna ou fetal, conforme demonstrado pelos resulta.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
Em primeiro lugar, agradecemos sinceramente as mães que participaram deste projeto. Em seguida, reconhecemos todo o pessoal que auxiliou e facilitou o procedimento de amostragem, o Anestesista, o enfermeiro anestesista e os enfermeiros cirúrgicos. O projeto não teria sido possível sem o financiamento da Autoridade Regional de Saúde do Sudeste da Noruega e da Unidade Norueguesa de Assessoria em Saúde da Mulher, Universidade de Oslo e financiamento local fornecido pelo Hospital Universitário de Oslo.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Composição corporal materna | |||
| Escala de impedância | Tanita | ou similar | |
| Medições de ultrassom Máquina de ultrassom | |||
| Sequoia 512 | Acuson | equipada com um transdutor curvo com Doppler colorido e de onda de pulso (largura de banda de frequência 2 - 6 MHz) | |
| amostras de sangue | |||
| cânula arerial | BD Medical | 682245 | ou similar |
| Seringa de ponta Luer excêntrica de 20 cc sem agulha | Termo | SS-20ES | ou similar. 3 necessários. |
| Seringa de ponta Luer excêntrica de 10 cc sem agulha | Termo | SS-10ES | ou similar. 9 necessários. |
| Seringa Luer 5 cc 6% sem Agulha | Termo | SS-05S1 | ou similar. 2 necessários. |
| Seringa de gases sanguíneos arteriais | Radiometer Medical | ou similar. 4 necessários. | |
| Agulha alada estéril conectada a tubo flexível, | 450081 Greiner Bio-One | (destinado a uso único).3 necessário. | |
| Tubo de aspiração 6 mL EDTA | Greiner Bio-One | 456043 | ou similar. Etiqueta com local de amostra. 10 necessários. |
| Tubo de vácuo 5 mL LH Separador de heparina de lítio | Greiner Bio-One | 456305 | ou similar. Etiqueta com local de amostra. 5 necessários. |
| Tubo de vácuo 6 mL Ativador de Coágulo de Soro | Greiner Bio-One | 456089 | ou similar. Etiqueta com local de amostra. 5 necessários. |
| Tubo de aspirador 3 mL 9NC Coagulação citrato de sódio 3.2% | Greiner Bio-One | 454334 | ou similar. Etiqueta com local de amostra. 5 necessários. |
| Frascos criogênicos, 2,0 mL | de 430488 Corning | ou similar. Rótulo com local de amostra, soro/tipo de plasma e ID. 90 necessário. | |
| Bandejas marcadas para transportar as seringas | para transportar as amostras de sangue na sala de operações | ||
| Balancim | para mistura suave das amostras | ||
| Gelo | em caixa de isopor | ||
| Nitrogênio | em recipiente apropriado | ||
| forte | |||
| Metal bandeja | |||
| Gelo | em caixa de isopor | ||
| calibrada | |||
| Régua | |||
| 1 M Fosfato tamponado solução salina | Sigma | D1408 | ou similar. Diluir 10 M para 1 M antes de usar |
| solução de estabilização de RNA | Sigma | R0901-500ML | ou similar |
| Temperatura de corte ideal (OCT) composto | vwr | 361603E | ou |
| frascos criogênicos semelhantes, 2,0 mL | Corning | 430488 | ou similar. Etiqueta com local de amostra. conteúdo e ID. 10 necessário. |
| Tubos de centrífuga, fundo cônico 50 mL | Greiner Bio-One | 227.285 | ou similar. Rótulo com "RNA posterior", local de amostra e ID. 2 necessário. |
| Nitrogênio | em recipiente apropriado | ||
| composição corporal fetal | |||
| calibrada | |||
| Fita |
Referências
- Jansson, T., Powell, T. L. Role of the placenta in fetal programming: underlying mechanisms and potential interventional approaches. Clin Sci (Lond). 113 (1), 1-13 (2007).
- Hanson, M. A., Gluckman, P. D. Early dev....
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Reimpressões e permissões
