Summary
Her beskriver vi en enkel hale blodåre blod prøvetaking metode i ikke-anesthetized rotter bruke vakuum utvinning rør system. Denne metoden reduserer risikoen for direkte eksponering til blod og forenkler tar flere eksempler fra en enkelt venipuncture.
Abstract
Blod kan hentes fra rotter i en rekke utvalg steder. For eksempel, er hale venen en overlegen plassering for blodprøve. Men er halen venen tynn slik at det er noen ganger vanskelig å punktere. I tillegg hale venen har lav blodstrøm og krever en lang prøvetaking tid å få tilstrekkelig blod. Nåværende rapporten beskriver en enkel blod sampling metoden, vakuum blod samling metoden, som vanligvis brukes hente blodprøver fra pasienter, her brukt for ikke-anesthetized rotter. 22 G sommerfugl pinne-spissen ble satt inn i en av lateral halen ca 2-3 cm fra spissen av halen i en vinkel på ca 20° og blod ble samlet inn i røret vakuum samling av setter inn gummi slutten av sommerfugl nålen inn va cuum blod samling rør. Dagens eksperimentelle resultatene viser at suksessraten var 95% i forsøksgruppen og 90% i gruppen nybegynner. Suksessraten og punktering ganger var like mellom to grupper. Prøvetaking varigheten var betydelig kortere i forsøksgruppen forhold til nybegynner gruppe. Avslutningsvis er denne vakuum blod samling metoden for sekvensiell blod utvalg fra halen åre ikke bedøvet rotter mulig og lett å lære, som kan tjene som en pålitelig alternativ til andre konvensjonelt blod prøvetaking teknikker for rotter.
Introduction
Blodprøve er fra rotter nødvendig for en rekke eksperimentelle studier. Teknikker for blod samling fra rotta inkluderer punktering av hjertet, retro-orbital plexus, vena jugularis, saphenous blodåre, hale blodkar, carotis communis, abdominal aorta og vena cava. De fleste teknikker (unntatt saphenous åre og hale blodkar punktering) krever narkose1,2. Årer av rotte halen er rutinemessig punktert for blodprøve og vaskulær injeksjon. Etter behandling av halen med varmt vann, er blodkar utvidet og egnet for manipulasjon, selv når rotter er bedøvet3.
Til tross for utviklingen av nye og forbedrede teknikker for å få blodprøver i lite laboratorium dyr2, er det ikke alltid lett å få nok blod når prøvetaking fra liten dyrene. Hale åre rotter er en overlegen plassering for blod prøvetaking4. Men halen venen er tynn, så det er noen ganger vanskelig å punktere og ville ta lang tid å få nok blod på grunn av sin lave blodstrøm. Blodgivning via en vakuum utvinning rør system er en typisk metoden i daglig praksis. Dette lukkede systemet for blod samle reduserer risikoen for direkte eksponering til blod og har gjort det lettere å ta flere eksempler fra en enkelt venipuncture5. Nåværende rapporten beskriver en enkel hale blodåre blod prøvetaking metode i ikke-anesthetized rotter ved hjelp av vakuum utvinning undergrunnssystemet. Denne metoden er lett å mestre og kan brukes til å få et stort volum av blod ganger i rotter.
Protocol
Alle prosedyrer ble godkjent av Tongji Medical College Council på dyr omsorg komiteen av Huazhong University of Science og teknologi (Wuhan, Kina). Manuskriptet ble utarbeidet etter ANKOMME (dyr forskning: rapportering I Vivo eksperimenter) retningslinjer6.
1. dyrehold
- Bruke Sprague-Dawley (SD) rotter (n = 20, 10 menn, 8 uke gammel, veiing 261 til 291 g, mener = 272.85 ±9.07 g) fra eksperimentelle dyr Center på Huazhong University of Science and Technology og vedlikeholde rotter i henhold til guiden og bruk av Forsøksdyr publisert av oss National Institute of Health (NIH publikasjon No.85-23, revidert 1996)
- Hus under standard betingelser med fri tilgang til mat og drikkevann. Holde rotter i 530 cm2 bur med tre-barbering sengetøy. Huset to rotter i hver bur. Holde alle burene åpne rom-miljøet (ingen mikro-isolasjon eller ventilert caging)
- Sikre personalet er involvert i eksperimentell protokollen regelmessig håndtere rotter.
- Opprettholde romtemperatur mellom 21 ° C og 23 ° C. Gi priser en vanlig salt diett (0,3% NaCl) gjennom hele studiet.
2. blod datainnsamling prosedyre
Merk: Vakuum blod samling systemet består av en pinne nål [22 G (0,7 x 25 mm)], en plast holderen, og en rekke vakuum-rør (2 mL) med gummi propper (figur 1).
- Plasser rotta i en plast begrensende holder og vask halen med varmt (20-30 ° C) vann for å fjerne synlige skitt eller avføring. Mens assistent holder halen i en uttrukket, tørk halen med 70% etanol, og Rengjør med gasbind gjøre venen klart.
- Sette 22 G sommerfugl pinne-spissen til én av lateral hale (rundt 5 mm) på en posisjon ca 2-3 cm fra spissen av halen i vinkel på ca 20 ° (figur 2). Samle blod inn i vakuum samling røret ved å sette inn gummi slutten av sommerfugl nålen inn i vakuum blod samling røret (Figur 3).
Merk: Maksimal samling blod volumet er 1,2 mL7. - Etter blod samling, fjerne nålen og forsiktig bruk trykk til punktering området med gasbind for 15-30 s å stoppe flyten av blod. Deretter løslate rotta fra plast begrensende holderen og returnere rotta til buret sitt.
- Bruk rør som inneholder EDTA som en antikoagulerende samle blodplasma. Forsiktig Inverter røret flere ganger å blande antikoagulerende i blodet og plassere prøvene på is loddrett.
- Sentrifuge blod prøve samling rør i en nedkjølt sentrifuge 2000 x g i 10 min å skille plasma eller serum.
- Pakk ut plasma/serum, ta vare ikke for å forstyrre de røde og hvite blodlegemer lagene. For å samle blod serum, bruker du rør uten antikoagulerende. Begge typer utvalg kan brukes umiddelbart, eller lagret ved-80 ° C i opptil ett år.
Merk: Vellykket blod samling ble definert som å skaffe 1,2 mL blod hver gang. Maksimal punktering tid ble satt til tre forsøk, om total blod volumet var lavere enn 1,2 mL etter den tredje punktering, den er definert som en mislykket blod samling. Prøvetaking varigheten starter fra halen blodåre punktering til fjerning av sommerfugl nålen etter blod samling. -
Samle blod to ganger i to uker7.
- For å teste og kontrollere muligheten for denne metoden, kan du trene to medisinstudenter (nybegynner) for 2t før du utfører denne blod samling protokollen. Bruk tjue rotter og trekke blod fra 10 rotter ved 2 erfarne stipendiater (forsøksgruppen) og 10 rotter ved 2 medisinske studenter (nybegynner gruppe).
3. statistisk analyse
- Uttrykke data som middelverdien ± standardavvik og analysere med SPSS statistikk 17. En α verdi på 0,05 ble valgt, derfor p < 0,05 ble ansett som statistisk signifikant.
Representative Results
Prøvetaking varighet, kroppsmasseindeks og samling blodvolum to gruppene
Blodet ble samlet inn fra 10 rotter (5 menn), to ganger i to uker i hver gruppe. Gjennomsnittlig massen i begge gruppene var (272.00 ±9.66 g og 273.70 ±8.87 g). Prøvetaking varighet var betydelig kortere i forsøksgruppen forhold til nybegynner gruppe (2,77 ±0.53 min g. 3,28 ±0.83 min, p < 0,05) (tabell 1).
Suksess rate og punktering ganger to grupper
Suksessraten var 95% (19/20) i forsøksgruppen og 90% (18 av 20) i gruppen nybegynner (p > 0,05). Punktering var ikke signifikant forskjellig mellom de to gruppene (1,50 ±0.61 min g. 1,85 ±0.75 min, p > 0,05) (tabell 2). Disse resultatene indikerer denne metoden er lett å lære, og teknikken kan beherskes etter trening for 2T.
Figur 1 : 2 mL vakuum blod samling rør (venstre), 22 G sommerfugl p (midten); plast begrensende holderen (høyre). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2 : Pinne-spissen ble satt inn i laterale hale venen (rundt 5 mm) der ca 2-3 cm fra spissen av halen i vinkel på omtrent 20 °. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3 : Vellykket venipuncture. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
| Forsøksgruppen | Nybegynner gruppe | |||||||||
| Kjønn | Kroppsvekt (g) | Samlet blodvolum (mL) | prøvetaking varighet | Kjønn | Kroppsvekt (g) | Samlet blodvolum (mL) | prøvetaking varighet | |||
| E1-1 | mann | 291 | 1.2 | 3.12 | B1-1 | mann | 282 | 1.2 | 3,18 | |
| E1-2 | mann | 291 | 1.2 | 2,73 | B1-2 | mann | 282 | 1.2 | 2,18 | |
| E2-1 | mann | 276 | 1.2 | 2.3 | B2-1 | mann | 264 | 1.2 | 3,73 | |
| E2-2 | mann | 276 | 1.2 | 2.37 | B2-2 | mann | 264 | 1.2 | 2.47 | |
| E3-1 | mann | 267 | 1.2 | 2,73 | B3-1 | mann | 265 | 1.2 | 3.52 | |
| E3-2 | mann | 267 | 1.0 | 3.88 | B3-2 | mann | 265 | 1.2 | 2,53 | |
| E4-1 | mann | 263 | 1.2 | 2.41 | B4-1 | mann | 289 | 1.2 | 2.32 | |
| E4-2 | mann | 263 | 1.2 | 2,52 | B4-2 | mann | 289 | 1.2 | 3,62 | |
| E5-1 | mann | 265 | 1.2 | 3,61 | B5-1 | mann | 277 | 1.2 | 3.48 | |
| E5-2 | mann | 265 | 1.2 | 2,42 | B5-2 | mann | 277 | 1.2 | 3.12 | |
| E6-1 | kvinne | 285 | 1.2 | 3.33 | B6-1 | kvinne | 274 | 0,9 | 4.87 | |
| E6-2 | kvinne | 285 | 1.2 | 3.03 | B6-2 | kvinne | 274 | 1.2 | 3.37 | |
| E7-1 | kvinne | 271 | 1.2 | 2.82 | B7-1 | kvinne | 268 | 1.0 | 3.93 | |
| E7-2 | kvinne | 271 | 1.2 | 2,42 | B7-2 | kvinne | 268 | 1.2 | 3.82 | |
| E8-1 | kvinne | 268 | 1.2 | 1.93 | B8-1 | kvinne | 262 | 1.2 | 2.07 | |
| E8-2 | kvinne | 268 | 1.2 | 3.05 | B8-2 | kvinne | 262 | 1.2 | 3.67 | |
| E9-1 | kvinne | 273 | 1.2 | 2,52 | B9-1 | kvinne | 281 | 1.2 | 4.38 | |
| E9-2 | kvinne | 273 | 1.2 | 3.17 | B9-2 | kvinne | 281 | 1.2 | 4.57 | |
| E10-1 | kvinne | 261 | 1.2 | 1.82 | B10-1 | kvinne | 275 | 1.2 | 2,53 | |
| E10-2 | kvinne | 261 | 1.2 | 3.25 | B10-2 | kvinne | 275 | 1.2 | 2.28 | |
| Gjennomsnitt | 2,77 | 3.28 | ||||||||
| No-1: serienummeret for rotter i forsøksgruppen for den første blod samlingen. | ||||||||||
| No-2: serienummeret for rotter i forsøksgruppen for andre blod samling. | ||||||||||
| BN-1: serienummeret for rotter i gruppen nybegynner for den første blod samlingen. | ||||||||||
| BN-2: serienummeret for rotter i gruppen nybegynner for andre blod samling. | ||||||||||
Tabell 1: Resultatene av blod samles i forsøksgruppen og gruppen nybegynner.
| Blod samling ganger | Gjennomsnittlig punktering ganger | En gang punktering | To ganger punktering | Tre ganger punktering | Mislyktes | Suksessraten | |
| Forsøksgruppen | 20 | 1,50 ±0.61 | 11 | 8 | 0 | 1 | 95% |
| Nybegynner gruppe | 20 | 1,85 ±0.75 | 7 | 9 | 2 | 2 | 90% |
| En gang punktering: antall rotter med vellykket blod samling etter den første punktering | |||||||
| To ganger punktering: antall rotter med vellykket blod samling etter den andre punktering | |||||||
| Tre ganger punktering: antall rotter med vellykket blod samling etter den tredje punktering | |||||||
| Mislyktes: antall rotter med mislykkede blod samling etter den tredje punktering | |||||||
Tabell 2: Sammenligning av punktering tider og suksessrate forsøksgruppen og gruppen nybegynner.
Discussion
Nåværende rapporten beskriver en enkel å lære blod samling metoden i rotter. Resultatene viste at denne metoden er gjennomførbar for gjentatte ganger å samle et stort volum av blod fra rotter. Videre er kan denne metoden være lett mestrer med en kortsiktig læringskurve. Denne fremgangsmåten kan utføres i ikke-anesthetized rotter og bare forårsaker minimal belastning på dyrene.
Blod kan hentes fra rotter på forskjellige steder. Hale venen er en overlegen plassering for blod prøvetaking4. Men er det ikke alltid lett å få nok blodvolum fra tynn og lav blod flyte hale åre rotter. Vakuum blod samling systemet brukes vanligvis til å ta pasienter i daglig praksis. Dette vakuum blod samling system er brukt i pasienter og forskning dyr for en lang tid8,9,10. Dette systemet består av et vakuum blod samling rør med silikon belegg slange veggen og butterfly nål. Den var basert på vakuum negative trykket tillater kontinuerlig tegningen av blod uten risiko for blod samle, som også reduserer sjansen for forurensning og hemolyse11. Volumet av blodprøve i kateter er ca 0,3 mL. Etter uttak nålen fra halen blodåre, vil blod blokkert i kateter strømme inn samle vakuumrør på grunn av vakuum. Denne metoden gjelder også for innsamling av blod fra rotter veiing mindre enn 100 g med bruk av en mindre punktering nål.
Dette blod samling metoden har flere fordeler. Denne fremgangsmåten bare forårsaker minimal skade rotter og blod samling kan utføres uten bruk av anestesi, dermed påvirker stressrespons og bedøvelse i blodprøve kan unngås. Våre observasjoner viste at rotter var stille i plast begrensende holderen under prosedyren og var det ingen dødsfall under disse eksperimentene. Dernest gjentatt blodgivning hver og en eller to dager er mulig, som gjør at hyppige utvalg av blod med et tilstrekkelig volum for ulike forskningsformål. Til slutt, denne metoden er lett å lære og enkelt ble mastret av nybegynnere etter en kort (2t) læring periode, som angitt av lignende suksess priser og punktering ganger mellom eksperimentelle og nybegynner i denne rapporten. I en tidligere rapport viste Lee et al. en lignende metode av prøvetakingen blod fra venen lateral halen av rotte4. Vår metode er enklere enn som rapportert av Lee et al. 4 ved at vi direkte inn nålen punktering hale venen og den andre enden av røret er direkte koblet til vakuumrør for innsamling av blod, uten bruk av en ekstra sprøyten og manuell aspirasjon av blod og uten behovet av "melk ing' venen å lette blodstrøm. Samle blod med dette lukkede systemet reduserer risikoen for blod forurensning. Bruk av plast begrensende holderen også reduserer stress til rotta og forenkler fiksering av halen.
Følgende to trinnene er avgjørende for bruk av denne metoden. 1) sett halen og unngå bevegelsen av halen; 2) forsiktig punktering venen i en vinkel på 20 ° å unngå punktering gjennom åre og holde nålen punktering i blodåre.
Avslutningsvis er vedtatt vakuum blod samling metoden i rotter sikker, mulig og enkel å praktisere. Dette gjør hyppige utvalg av blod med en tilstrekkelig blodvolum fra ikke-anesthetized rotter.
Disclosures
Forfatterne ikke avsløre
Acknowledgments
Forfatterne har ingen takk å gjøre.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| a double-pointed needle | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 22G | (0.7×25mm) |
| vacuum tubes | Wuhan Zhi Yuan, medical science and technology co., LTD, China | 2 ml | |
| rat restraining holder | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 250g rat hoder model | |
| normal salt diet for rats | Rats received a normal salt diet (0.3% NaCl) throughout the study | ||
| SPSS software for statistical analysis | SPSS Inc, Chicago; USA | Version 17.0. |
References
- Brown, C. Blood collection from the tail of a rat. Lab Anim (NY). 35 (8), 24-25 (2006).
- Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).
- Staszyk, C., Bohnet, W., Gasse, H., Hackbarth, H. Blood vessels of the rat tail: a histological re-examination with respect to blood vessel puncture methods. Lab Anim. 37 (2), 121-125 (2003).
- Lee, G., Goosens, K. A. Sampling blood from the lateral tail vein of the rat. J. Vis. Exp. (99), (2015).
- WHO Guidelines on Drawing Blood: Best Practices in Phlebotomy WHO Guidelines Approved by the Guidelines Review Committee. , (2010).
- Kilkenny, C., Altman, D. G. Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution. Lab Anim. 44 (4), 377-378 (2010).
- Diehl, K. H., et al. A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes. J Appl Toxicol. 21 (1), 15-23 (2001).
- Eder, J. M., Cutter, G. R. A new device for collecting cord blood. Obstet Gynecol. 86 (5), 850-852 (1995).
- Reynolds, B. S., et al. Comparison of a new device for blood sampling in cats with a vacuum tube collection system - plasma biochemistry, haematology and practical usage assessment. J Feline Med Surg. 9 (5), 382-386 (2007).
- Wiwanitkit, V. Comparison of blood specimens from plain and gel vacuum blood collection tubes. J Med Assoc Thai. 84 (5), 723-726 (2001).
- Wollowitz, A., Bijur, P. E., Esses, D., John Gallagher, E. Use of butterfly needles to draw blood is independently associated with marked reduction in hemolysis compared to intravenous catheter. Acad Emerg Med. 20 (11), 1151-1155 (2013).
