Artigo de método

Um protocolo para medição de reatividade de Cue em um modelo do rato do transtorno de uso de cocaína

DOI:

10.3791/55864

⸱

18 de junho de 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Center for Addiction Research, University of Texas Medical Branch, 2Institute for Translational Sciences, University of Texas Medical Branch, 3Mitchell Center for Neurodegenerative Diseases, University of Texas Medical Branch, 4Department of Neurology, University of Texas Medical Branch, 5Department of Pathology, University of Texas Medical Branch, 6Department of Pharmacology and Toxicology, University of Texas Medical Branch

* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Reatividade de sinalização é conceituada como sensibilidade para pistas ligadas com experiências de drogas que contribuem a ânsia e recaída em humanos abstinentes. Reatividade de sinalização é modelada em ratos por medição orientação atenção para pistas de drogas associadas que resulta em comportamento de abordagem repetido em um teste de reactividade deixa seguir auto-administração e forçado a abstinência.

Resumo

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Transtorno de uso de cocaína (CUD) segue uma trajetória de auto-administração repetitiva durante o qual anteriormente estímulos neutros ganham valor de incentivo. Reatividade de sinalização, a sensibilidade para as sugestões anteriormente ligados com a experiência de drogas, desempenha um papel proeminente no desejo humano durante a abstinência. Sugestão de reatividade pode ser avaliada como a orientação da atenção para pistas associadas a drogas que é mensurável como comportamento de abordagem repetido nos estudos pré-clínicos e humanos. Neste documento descreve uma avaliação da reatividade de sinalização em ratos treinados para auto-administrar cocaína. Auto-administração de cocaína está emparelhada com a apresentação de sinais discretos que atuam como reinforcers condicionados (i.e., casa, estímulo luz de sons de bomba de infusão). Após um período de abstinência, prensas de alavanca no contexto de auto-administração de cocaína acompanhado as pistas discretas previamente emparelhadas com infusão de cocaína são medidas como reatividade de sinalização. Este modelo é útil para explorar mecanismos neurobiológicos subjacentes deixa processos de reatividade, bem como para avaliar farmacoterapias para suprimir a reatividade de sinalização e, portanto, modificar a vulnerabilidade de recaída. Vantagens do modelo incluem sua relevância translacional e seu rosto e validades preditivas. A principal limitação do modelo é que a tarefa de reatividade de sinalização só pode ser realizada com pouca frequência e só deve ser usada em curta duração (ex., 1 hora), caso contrário ratos começará a extinguir o emparelhamento do sinais discretos com o estímulo de cocaína. O modelo é extensível a qualquer estímulo positivamente reforço emparelhado com sinais discretos; Embora particularmente aplicável às drogas de abuso, este modelo pode segurar aplicações futuras nos campos tais como a obesidade, onde alimentos palatáveis recompensas podem atuar como reforçar positivamente a estímulos.

Introdução

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Transtorno de uso de cocaína (CUD) segue uma trajetória de auto-administração repetitiva durante o qual anteriormente estímulos neutros ganham incentivo valor1. Reatividade de sinalização é a sensibilidade para as sugestões anteriormente ligados com a experiência de drogas, e que desempenha um papel proeminente no desejo humano2,3,4,5. O risco de progressão para CUD, bem como recaída durante a abstinência, é pensado para ser mais elevado para os indivíduos que expressam a alta sensibilidade a drogas associadas pistas6,7. Ambos os contextos ambientais (por exemplo, pessoas, prédios, gêneros musicais) e discretos associada a drogas estímulos (por exemplo, parafernália) tornar-se associado com a recompensa de cocaína; a exposição a estes tacos pode provocar alterações na fisiologia periférica (por exemplo, frequência cardíaca, temperatura da pele e resistência da pele), plasticidade cerebral e cérebro conectividade funcional2,8,9 ,10. Em outras palavras, re-exposição à cocaína associada sugestões ativa o sistema límbico ritmicidade circuitos para evocar condicionadas respostas fisiológicas e subjetivas que impulsionam repetido abordagem (droga-procurando) comportamento11,12 ,13,14,15.

Reatividade de sinalização medida com cérebro funcional, análise de imagem é preditiva de vulnerabilidade de recaída em indivíduos com RUMINA16. Medições de reatividade de sinalização em modelos de roedores servem como uma medida de substituto para o risco de recaída e pode ser explorado para estudos translacionais. Assim, uma farmacoterapia que diminui a reatividade de sinalização em roedores pode ser transportadas para a frente como um tratamento de prevenção de recaída em testes clínicos em humanos. Modelos pré-clínicos com o necessário mérito translacional e validade preditiva são especialmente importantes, uma vez que existem atualmente não farmacoterapias aprovado pela FDA para CUD17.

O procedimento de auto-administração roedor é o padrão-ouro, modelo de translação com validade preditiva para humano drogas18 e criticamente importante para a compreensão molecular e fisiológicas processos CUD subjacente. Resposta - entregaindependente dos resultados de cocaína em distintos efeitos comportamentais, neuroquímicos e moleculares em relação à resposta - exposiçãodependentes de cocaína; ex., entrega de cocaína resposta -independente evoca significativamente maior mortalidade19. Além disso, as consequências neuroquímicas da abstinência de resposta -dependentes cocaína auto-administração são distintas daqueles desencadeada pela abstinência de resposta -independente cocaína entrega20, 21. assim, modelos CUD baseados na resposta - entregadependentes de cocaína são modelos de translação superiores ao avaliar a reatividade de sinalização e associado a mecanismos de ação.

O protocolo descrito abaixo, cocaína é entregue por via intravenosa através de um cateter permanente intra na jugular. No entanto, foram desenvolvidos métodos alternativos para auto-administrar drogas via oral e inalação de rotas. Importante, roedores controlam a entrega da droga, humanos análogos, através de respostas operante. Portanto, há alta concordância entre drogas auto administradas por roedores e humanos22. O procedimento de auto-administração de drogas pré-clínicos abaixo emprega alavanca pressionando, reforçado pela entrega da droga, para motivar as taxas de resposta mais elevadas do que o controle do veículo. Comportamento de busca de drogas é treinado por emparelhamento pistas originalmente "neutras" (por exemplo, uma luz de estímulo ou Tom e o ambiente contextual em cocaína auto-administração ocorre) com infusão de cocaína; Estes tacos tornar-se condicionado reinforcers (para revisão: Cunningham & Anastasio, 2014,23). Posterior re-exposição à cocaína associada pistas desencadeia comportamento droga-procurando em roedores (i.e., tenta entregar cocaína através de pressionando a alavanca anteriormente-ativo), bem como a ânsia e a recaída no CUD assuntos24, 25 , 26 , 27.

Normalmente, os estudos pré-clínicos de roedores de comportamento droga-procurando seguir a auto-administração de cocaína utilizam reintegração de formação e/ou drogas de extinção conduzida dentro do ambiente associada a drogas28,29, 30 , 31 , 32. pressiona a alavanca de ativos anteriormente, na ausência de entrega de drogas e/ou sugestão, normalmente constituem a medida de reintegração após extinção33,34,35. Pelo contrário, comportamento de busca de drogas deixa reatividade é avaliada seguinte abstinência forçada sem prévia extinção formação28,36,37,38,39 .

Desfechos e variáveis experimentais foram cuidadosamente escolhidas e validadas para dissecar os diferentes aspectos da neurobiologia do comportamento de busca de drogas e recaída-como, e é bem estabelecido que o neuroadaptations diferentes entre modelos com e sem extinção formação 40,41,42,43. Além disso, numa perspectiva de translação, formação de roedores extinção não é espelhada em ambientes clínicos para CUD desde as sugestões relacionadas com a droga incluem Estados de humor, lugares e pessoas,44; a exclusiva combinação destes tacos são provavelmente não está disponível em um ambiente clínico45,46,47. Assim, o modelo de roedor aqui descrito atua como um melhor paralelo à condição humana do que muitos dos modelos atualmente disponíveis.

A seguir descreve um treinamento de auto-administração de cocaína validado, abstinência forçada e reatividade de sinalização teste protocolo para ratos. Brevemente, ratos são implantados com cateteres intra jugular, treinados para auto-administrar cocaína ou solução salina via imprensa alavanca 'ativo', e a recepção do estímulo cocaína ou soro fisiológico é emparelhada com discretos sinais de luz e som que servem como reinforcers condicionados. Após 14 dias de auto-administração de cocaína, ratos são submetidos a 30 dias de abstinência forçada e um teste de reactividade subsequentes 60-min deixa no qual alavanca é medida urgente. O teste de reatividade de sinalização é uma medida de substituto para a vulnerabilidade de recaída de cocaína em humanos.

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Protocolo

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Todas as manipulações de animais são realizadas de acordo com o guia para o cuidado e o uso de animais de laboratório (2011) e com a aprovação do Comité de uso e cuidado institucional do Animal.

1. os animais

  1. ACCLIMATE ratos Sprague Dawley masculinos aproximadamente 8-9 semanas de idade (250-260 g) durante um período mínimo de sete dias em uma sala de colônia, mantida em 21-23 ° C e 45-50% de umidade em um ciclo claro-escuro de 12 h (luzes em 06:00-18:00 h).
  2. Ratos, dois de casa / gaiola e manipular diariamente ao longo do estudo. Providenciar comida e água ad libitum na gaiola em casa em todas as fases do estudo.
    Nota: Restrição alimentar aumenta o saliency do cocaína recompensa48, potencializa a atividade locomotora induzida por cocaína,49e age como um fator de estresse para o restabelecimento de50 e, portanto, pode também reatividade de sinalização de impacto.
  3. Atribua aleatoriamente ratos de solução salina ou cocaína grupos de tratamento.

2. cirurgia

  1. Coloque o rato sob anestesia, usando um coquetel contendo 8,6 mg/kg de xilazina, 1,5 mg/kg de acepromazina e 43 mg/kg de cetamina suspendida em solução salina bacteriostática. Confirme que o rato é suficientemente anestesiado por beliscar seu dedo do pé e monitorar a respiração e os reflexos de motor. Aplica a pomada oftálmica diretamente aos olhos para evitar ressecamento do olho.
    Nota: Se o rato não é suficientemente anestesiados vai expor uma resposta motora para o aperto de dedo do pé, e pode aumentar rapidamente a taxa de respiração do rato.
    1. Utilizando técnica asséptica, enquanto o rato está sob anestesia, implante de um cateter intravenoso na veia jugular, conectada a um monte de volta com uma cânula. Após a implantação cirúrgica, permitem que ratos recuperar por 5-7 dias 28,36,37,51.
      Nota: A via venosa de auto-administração de cocaína em humanos resulta em rápidos aumentos no cérebro cocaína níveis52,53. Assim, em uma de suas variantes mais comuns de pré-clínicos, ratos são treinados para auto-administrar cocaína através de um cateter intra na jugular.
  2. Manter a patência do cateter com liberações diárias usando uma solução de 0,1 mL de solução salina bacteriostática contendo heparina de sódio (10 U/mL), estreptoquinase (0,67 mg/mL) e ticarcillin dissódico (66,67 mg/mL). Começar o cateter rubor no dia após a cirurgia e continuar cada dia seguinte sessões de auto-administração.
    1. Encher uma seringa com a solução e conectar-se a montagem volta à seringa através de tubos de polietileno para lavar.
    2. Verificar o cateter adequado função periodicamente durante todo o experimento por administração intravenosa de 10 mg/kg de sódio methohexital.
      Nota: Esta é uma dose suficiente para anestesiar brevemente o animal apenas quando administrado por via intravenosa.

3. autoadministração

  1. Use o software de programação para gerar 4 programas separados, conforme descrito abaixo.
    1. Código dois programas para auto-administração em uma proporção fixa (FR) 1 agenda, i. e., onde uma imprensa de alavanca ativo resulta em uma infusão. Para o programa #1, código a alavanca esquerda como a alavanca ativa; para o programa #2, código a alavanca direita como a alavanca ativa. Construa dois programas para ser 180-min em comprimento e entregar o estímulo de cocaína e discreta cue complexo da seguinte maneira:
      1. Tem uma alavanca ativa pressione causa iluminação simultânea de ambos a casa e a luz estímulo acima a alavanca ativa.
      2. Após um atraso de 1-s, tem a bomba de infusão entregar 0,1 mL da solução ao longo de 6 s.
      3. Ter o estímulo luz desligar após 7-s (Inactive ao mesmo tempo como a bomba de infusão).
      4. Tem a luz de casa desligar após 27-s, com a última 20-s indica um período de tempo limite, durante o qual alavanca ativo prensas não têm agendadas consequências e, no entanto, estes ainda são registrados.
      5. Para saída de dados, colete infusões, alavanca ativo prensas, prensas de alavanca inativos e latência para pressionar alavanca ativo.
    2. Código de mais dois programas para auto-administração em um FR5 agendar, i. e., onde cinco alavanca prensas resultado em uma infusão. Novamente, fazer um programa com a alavanca activa como a esquerda e um programa com a alavanca de ativa como direito. Faça os dois programas 180-min em comprimento e entregar o reforçador e discreta cue complexo da seguinte maneira:
      1. Tenho cinco alavanca ativo prensas causa iluminação simultânea de ambos a luz da casa e o estímulo de luz acima da alavanca ativa.
      2. Repita as etapas 3.1.1.2 através de 3.1.1.5.
  2. Formação de auto-administração
    1. Preparar a solução de cocaína diariamente em estéril 0,9% NaCl para uma dose de 0,75 mL de mg/kg/0.1.
      Nota: Ao longo da duração de cada sessão de auto-administração de 180 min, ratos administram cerca de 4-5 mL de solução de cocaína, assim, para preparar-se em excesso, antecipar aproximadamente 8 mL/rato diariamente.
    2. Encha a seringa do cateter (10 mL) pelo menos 8 mL de solução salina ou cocaína. Depois de se assegurar que a solução salina/cocaína está fluindo, inserir as seringas para a bomba de infusão e conectar a tubulação de polietileno envolvida por uma trela de mola de metal no início de cada sessão de auto-administração. Ajuste cuidadosamente a seringa em cada bomba de infusão tal que a solução é uniformemente e completou distribuídos na tubulação antes de anexar a cada cateter de polietileno.
    3. Lugar de ratos nos aposentos do respectivo padrão operante condicionado alojados em compartimentos ventilados, som-atenuação com fãs. Consistentemente Coloque cada rato na mesma Câmara operante e mantenha a alavanca ativa do mesmo lado ao longo de todas as experiências. Contrabalançar a atribuição de ratos entre esquerda e direita ativas alavancas.
      Nota: Cada câmara está equipada com um recipiente de pelota ladeado por duas alavancas de resposta retrátil, uma luz de estímulo acima cada alavanca de resposta e uma casa de luz em frente as alavancas. Seringas de cocaína/solução salina são conectadas a um 23G agulha (arquivada para evitar picar tubulação) anexado à tubagem de polietileno envolvida dentro uma trela de mola de metal que se conecta ao cateter de cada rato e é operada em um giro líquido. Seringas são colocadas em bombas de infusão localizadas adjacentes ao cubículo.
    4. Ratos de trem para alavanca Pressione para infusões de cocaína (0,75 mg/kg/0.1 infusão de mL) ou infusões de soro fisiológico (0,1 mL) durante sessões diárias de 180-min usando estabeleceram métodos28,36,37,51.
      Nota: Esta formação é realizada simplesmente, colocando o rato na câmara operante e permitindo a imprensa de alavanca; pressionando a alavanca ativa resultará na recepção do sinal discreto complexo e infusão de cocaína, enquanto pressionando a alavanca inativa carrega sem consequências programadas.
      1. Agendar as conclusões sobre o resultado de alavanca ativo na entrega de cocaína ou infusão de solução salina durante um período de 6-s emparelhado simultaneamente com a iluminação da casa luz e luz acima a alavanca ativa de estímulo e ativação da bomba de infusão (isto é a discreta sinalização complexo emparelhado com entrega de cocaína); Prensas de alavanca inativo produzem sem consequências programadas. Após o parto de reforçador (cocaína), a luz de estímulo, bem como a bomba de infusão é inativada; a luz da casa permanece em por um adicional de 20-s indicar um período de tempo limite, durante o qual alavanca prensas não têm agendadas consequências.
        Nota: Uma descrição de como configurá-lo encontra-se em passos 3.1.1.1-3.1.1.4
    5. Após a conclusão da sessão 180-min, retire cada rato da sua câmara de condicionamento operante e irrigue o cateter (passo 2.2). Limpe cuidadosamente as câmaras entre sessões, limpar cada superfície com uma solução de etanol 70%.
      Nota: Ratos que receberam cocaína durante a sessão de auto-administração podem ser difíceis de remover da câmara e são mais propensos a ser agressivo. Use movimentos lentos, cuidadosos para desconectar seu baraço cada rato.
    6. Treinar ratos um FR1 horário de reforço e progresso para uma programação FR5 depois de atingir um critério de sete infusões/h com menos de 10% a variabilidade do número total de infusões por sessão por três dias consecutivos. Continue as sessões de auto-administração até ratos chegaram a um total de 14 dias de treinamento de auto-administração.
      Nota: Esta é uma variante da aprendizagem operante; alguns protocolos preferem ter ratos permanecem no FR1 em toda a totalidade da experiência. Alterações no cronograma de proporção fixa de FR1 a FR5 não afetam o número de infusões, um animal self-administers54,,55. No entanto, aumentar o tamanho de proporção fixa ajuda a garantir a estabilidade de responder em ratos e pode aumentar o saliency a recompensa56. Além disso, se for desejado um tratamento durante a abstinência forçada, ratos devem ser pseudo aleatoriamente para os grupos de tratamento em cima de alcançar a estabilidade (menos do que a variabilidade de 10% do número total de infusões por sessão para um mínimo de 3 dias consecutivos) no o horário de FR5. Além disso, ratos salinos não progredirá do FR1 para FR5, como o saliency de soro não é suficiente para atingir a estabilidade necessária para progredir de FR1 para FR5.

4. forçada abstinência

  1. Coloque os ratos em abstinência forçada por 30 dias; ou seja, não fornecem ratos com a oportunidade para auto-administrar cocaína ou soro fisiológico para uma duração de 30 dias. Importante, durante esse período não retorne ratos para as câmaras operante (o contexto anterior de auto-administração). No entanto, remova ratos de casa gaiolas para manipulação diária e pesagem, como medida de saúde geral.
    Nota: A duração da abstinência forçada pode ser alterada, mas é importante escolher uma duração suficiente evitar efeitos de teto e piso. Fatores de ser cônscio ao escolher a duração do período de abstinência forçada incluem roedor estirpe, idade, comprimento de sessão de auto-administração e duração, drogas, duração de dose e infusão de drogas e o sexo do animal.

5. cocaína Cue reatividade

  1. Código de dois programas de software para a tarefa de reatividade de sinalização em uma programação FR1; um programa com a alavanca esquerda como a alavanca ativa e com a alavanca direita como a alavanca ativa. Construção de cada programa para recolher alavanca pressionar dados para 60-min e entregar o sinal discreto complexo conforme descrito abaixo.
    1. Repita os passos 3.1.1.1-3.1.1.4
    2. Para saída de dados, colete apresentações de sinalização (anteriormente conhecidas como infusões), alavanca anteriormente ativo prensas, prensas de alavanca inativos e latência para pressionar alavanca.
  2. Sessão de testes de reactividade de Cue de cocaína
    1. Avalie a reatividade de sinalização no dia 30 de abstinência forçada em uma sessão de teste operante de 60 min. Escalone as horas de início de ratos para facilitar a rápida decapitação e colheita de cérebro. Importante, para o teste de reatividade do taco, não coloque a seringa na bomba de infusão para que o som da bomba de infusão serve como um sinal auditivo mas nenhum reforço de cocaína é entregue.
      Nota: Reatividade Cue pode ser avaliada em dias excepto dia 30 de abstinência forçada, no entanto, o fato de que a capacidade de resposta às sugestões de cocaína-emparelhado varia ao longo do tempo34 deve ser mantido em mente ao escolher a data para o teste de reatividade de sinalização.
    2. Colocar cada rato na câmara de auto-administração em que ele foi treinado e amarrar a sua cânula como durante as sessões diárias de auto-administração. Pressiona a alavanca que previamente entregue a cocaína ou solução salina é agora apenas reforçada pela entrega do complexo sinalização discreta (i. e., o estímulo luz e casa são iluminados e a bomba de infusão é ativada) em um cronograma FR1 (i.e., um complexo de sinalização discreta é apresentado por imprensa alavanca ativo); contar as apresentações de sinalização e prensas de alavanca anteriormente ativo durante uma sessão de 60 min e também gravar o número de prensas de alavanca inativo. No entanto, como com auto-administração, prensas de alavanca inativo produzem sem consequências programadas.
      Nota: Uma opção de controle adicional é gravar prensas alavanca anteriormente-ativos e inativos na ausência de consequências programadas (i. e., nenhum reforçador complexo sinalização discreta).
    3. Após a conclusão da reatividade do taco sessão de teste, imediatamente eutanásia em ratos para capturar os efeitos bioquímicos da re-exposição para a câmara de condicionamento operante e discreta cue complexo.

6. análise, organização e coleta de dados

  1. Quebrar dados em três categorias convencionais: saúde geral, auto-administração e reatividade de sinalização.
    1. Monitorar o estado geral de saúde (ex., animal de peso, pele condição) durante todo o experimento e fornecer animais com veterinária conta, se necessário, ou remova o estudo se pressionar alavanca parece afetada pela saúde.
    2. Colete dados de auto-administração durante os 14 dias de auto-administração. Use um teste t pareado, bicaudal para determinar diferenças estatísticas entre cocaína e grupos de auto-administração salina para número total de infusões, alavanca ativo prensas, prensas de alavanca inativos e latência para pressionar alavanca ativo.
      Nota: Auto-administração dados precisam ser analisados antes de forçado a abstinência se um deseja estudar o efeito de um tratamento durante abstinência forçada na reatividade de sinalização (de modo que os grupos podem ter um número médio igual de infusões, bem como ativo e inativo Prensas de alavanca). Se um projeto de dois-por-dois é escolhido (cocaína ± tratamento, ± salina), uma ANOVA de duas vias com análise post hoc apropriado deve ser usada para analisar estes dados.
    3. Para dados de reatividade de sinalização coletar e analisar para o número total de apresentações de sinalização, alavanca anteriormente ativo prensas, prensas de alavanca inativo e latência para pressionar alavanca. Também analise esses dados com um teste t pareado, bicaudal para determinar diferenças entre animais auto administrar cocaína e aqueles auto administração de solução salina.
      Nota: Novamente, se um projeto de dois-por-dois é escolhido (cocaína ± tratamento, ± salina), uma ANOVA de duas vias com análise post hoc apropriado deve ser usada para analisar estes dados.

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Resultados

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Resultados de um experimento de auto-administração e abstinência de cocaína seguido por um teste de reatividade de sugestão de um estudo anteriormente publicado57 são mostrados na Figura 1. O cronograma de estudo é representado na figura 1A.

Ratos individualmente a transição do FR1 para FR5 conforme a critérios. Como condicionamento operante pros...

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Discussão

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Exposição a drogas-emparelhado sugestões e alterações fisiológicas em resposta a estas pistas16 estão associados a recaída,11,16 e o teste de reatividade de sinalização cocaína empregado acima contingentemente apresenta sugestões de cocaína-pareado na ausência de drogas; assim, o comportamento droga-procurando na forma de ativos anteriormente alavanca prensas serve como uma medida de vulnerabilidade de recaída. O protocolo de reatividade d...

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Divulgações

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Os autores têm sem conflitos de interesse a divulgar.

Agradecimentos

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Todos os testes comportamentais foi realizada na Universidade do Texas Medical Branch (UTMB) roedores In Vivo avaliação (RIVA) Core, dirigido pelo Dr. Kelly Dineley e alojado no interior do centro para pesquisa de vício, dirigido pelo Dr. Kathryn Cunningham. Suporte para este trabalho veio de Peter F. McManus Charitable Trust, Instituto Nacional de centro de Ciências de saúde ambiental para toxicologia ambiental no UTMB (T32ES007254), Instituto de Ciências translacionais UTMB (UL1TR001439), Centro de Mitchell para doenças neurodegenerativas e centro de pesquisa do vício no UTMB (DA007287, DA070087 e estudo piloto fundos).

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
EquipamentoTubo de
cateter: 0,50 mm ID x 0,94 mm OD x 0,2 mm de larguraFisher Scientific, Hampton, NH, EUA11-189-15A1/experimento
Cue LightMed Associates Inc., St. Albans, VT, EUAENV-229M2/cânulas guia de câmara operante
(calibre 22, tamanho do pedestal-8 mm, comprimento de corte 11 mm, 5 mm acima do pedestal)Plastics One, Roanoke, VA, USA8IC313G5UPXC1/rat
House LightMed Associates Inc., St. Albans, VT, USAENV-227M1/câmara operante
Bomba de Infusão MedAssociates Inc., St. Albans, VT, EUAPHM-1001/câmara operante
LeversMed Associates Inc., St. Albans, VT, EUAENV-110M2/câmara operante
Liquid SwivelsInstech, Plymouth Meeting, PA, USA375/221/câmara operante
MED-PC Package com software de bomba de infusãoMed Associates Inc., St. Albans, VT, USASOF-735 (software de infusões SOF-700RA-10 versão 1.04)1
Coleira de mola de metalPlastics One, Roanoke, VA, USAC313CS/SPC1/agulha de câmara operante
(23g, 1 pol)Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, EUA3051931/ câmara operante
Nitex Mesh (folha de malha tecida 6/6, 12"x12", 500 mícrons de espessura, 38% de área aberta)Amazon, Seattle, WA, EUACMN-0500-C, B000FMUNE6~1 folha/100 ratos
Pacote de Interface PCIMed Associates Inc., St. Albans, VT, EUADIG-700P2-R2, MED-SYST-161/16 câmaras operantes
Fonte de Alimentação para Módulos de InterfaceMed Associates Inc., St. Albans, VT, USASG-6510DCâmaras operante 1/16
Cubículo Atenuante de SomMed Associates Inc., St. Albans, VT, EUAENV-018V1/câmara operante
Seringas, 10 mL Luer-Lok™ pontaFisher Scientific, Hampton, NH, EUA14-827-521 caso/experimento (1/câmara operante)
Tygon Tubulação para descargas: 0.51mmID x 1.52mm OD 0.51mm largura x 152.4m comprimentoFisher Scientific, Hampton, NH, USA14-170-15B1/ experimento
Produtos químicos
Acepromazina (10mg/mL)Henry Schein (Saúde Animal), Melville, NY, EUA003845~0,5mg/rato*
Resina de reparo AcraweldHenry Schein (Dental), Melville, NY, EUA10139591/experimento
Altalube (pomada oftálmica)Henry Schein (Dental), Melville, NY, EUA60500591 / experimento
CocaínaNIDA North Bethesda, MD, EUAN /A ~ 350mgs / rato para todo o experimento *; requer Licença DEA
Heparina (10.000 unidades USP / 10 mL)Sagent Pharmaceuticals, Schaumburg, IL, EUANDC 25021-400-101 / experimento (~ 21 unidades / rato *)
Jet LiquidHenry Schein (Dental), Melville, NY, EUA12564011 / experimento
Cetamina (100mg / mL, 10mL)Henry Schein (Dental), Melville, NY, EUA1049007~15mg/rat*; requer licença da DEA
Metoexital Sodium (Brevital®, 500 mg/50 mL)Patterson Dental, Saint Paul, MN, USA043-54611/experimento; requer licença da DEA
Solução salina (0,9%, USP)Baxter, Deerfield, IL, EUA2B13071 caso/experimento
Estreptoquinase de Streptococcus β-hemolítico (Lancefield Grupo C) ≥ 3.000 unidades/mgSigma Aldrich, St. Louis, MO, EUAS3134-250KU1 frasco/experimento (~1,5mg/rato/experimento*)
Sal dissódico de ticarcilinaFisher Scientific, Hampton, NH, EUA50-213-695~4 frascos/experimento ou compre o frasco de 25g cat.# 50-489-093 (~150mg/rato/experimento*)
Xilazina (100mg/mL)Henry Schein (Saúde Animal), Melville, NY, EUA033198~3mg/rato*
*Assume que a idade do rato é a descrita no protocolo, os ratos se auto-administram por 14 dias e as rubores ocorrem por 21 dias.

Referências

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