Um método de análise celular para o côndilo Mandibular murino e morfométricas

Summary

Este manuscrito apresenta métodos para a Análise morfométrica e as mudanças celulares dentro do côndilo mandibular de roedores.

Abstract

Articulação temporomandibular (ATM) tem a capacidade de adaptação a estímulos externos, e carregar as alterações pode afetar a posição dos côndilos, bem como os componentes estruturais e celulares da cartilagem condilar mandibular (MCC). Este manuscrito descreve métodos para analisar estas mudanças e um método para alterar o carregamento da TMJ em camundongos (i.e., à compressão estática TMJ carregando). A avaliação estrutural ilustrada aqui é uma abordagem simples morfométricos que usa o software Digimizer e é executada em radiografias de ossos pequenos. Além disso, a análise de celulares muda levando a alterações na expressão do colágeno, a remodelação óssea, a divisão celular, e proteoglycan distribuição no MCC é descrita. A quantificação dessas mudanças em cortes histológicos - contando os pixels fluorescentes positivos usando imagem de software e o mapeamento de distância de medição e manchado área com Digimizer - também é demonstrado. Os métodos mostrados aqui não são limitados a TMJ murino, mas podem ser usados em ossos adicionais de pequenos animais experimentais e em outras regiões de ossificação endocondral.

Introduction

A TMJ é uma articulação de carga exclusiva localizada na região craniofacial e é formada de fibrocartilagem. O MCC da TMJ é essencial para a função da articulação, incluindo o movimento da mandíbula sem impedimentos ao falar e mastigar, mas geralmente é afetado por doenças degenerativas, incluindo osteoartrite¹. A TMJ tem a capacidade de adaptação a estímulos externos e alterações de carga, levando a alterações estruturais e celulares para os componentes do MCC^2,3,4,5. As propriedades de carga do MCC podem ser explica....

Protocol

Comitê institucional cuidados de animais do centro de saúde da Universidade de Connecticut aprovou todos os procedimentos de animais.

1. compressão estática TMJ carregamento: Boca forçada a abrir

Nota: Ratos transgénicos quatro semanas de idade, abrigando fluorescentes repórteres para colágeno (Col2a1XCol10a1), gentilmente cedidos pelo Dr. David Rowe (Universidade de Connecticut), foram utilizados para os experimentos descritos neste manuscrito (n = 8; 4 machos e 4 fêmeas). O transgene de Col2a1 ciano (azul) é expressa em células na zona prehypertrophic do MCC, enquanto o Col10a1 cereja (vermelhas) células estão pr....

Results

Estatísticas descritivas foram realizadas para examinar a distribuição de medidas morfométricas (comprimento mandibular, condilar comprimento, largura condilar) e análise histológica. Os resultados foram comparados entre o grupo carregado (ou seja, ratos submetidos a carga compressiva com a mola de titânio beta) e grupo controle (ou seja, ratos de controle que não recebeu qualquer procedimento de correspondência). Diferenças estatisticamente significativas entre médias f.......

Discussion

Este manuscrito descreve métodos para a medição de morfometria e análise celular dos côndilos mandibulares murino e mandíbulas. As medições radiográficas morfométricas também podem ser usadas para analisar outros ossos de pequenos animais experimentais. Além disso, a análise celular (célula quantificação e mapeamento de distância de cartilagem) não estão limitada a do côndilo mandibular roedor, mas pode ser usado para quantificar a cortes histológicos de tecidos diversos.

Modelos de rato trans.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Sistema de Radiografia MX20	Faxitron X-Ray LLC
Software de imagem digimizador	Software
Resina de incorporação Shandon Cryomatrix	Thermo Scientific	6769006
Microscópio manual Axio Imager Z1	Carl Zeiss	208562
filtro de proteína fluorescente amarelo  - EYFP	Chroma Technology Corp	49003
filtro de proteína fluorescente ciano - ECFP	Chroma Technology Corp	49001
filtro de proteína fluorescente vermelho - Cy5	Chroma Technology Corp	49009
acetato de sódio anidro	Sigma-Aldrich	S2889
L-tartarato de sódio dibásico di-hidratado	sódio 228729		Sigma-Aldrich
	Substrato Sigma-Aldrich	237213
ELF97	Thermo Fisher Scientific	E6600
ClickiT EdU Alexa Fluor 594 HCS kit	Life Technologies	C10339;	inclui EdU (5-etinil-2'-desoxiuridina)
DAPI (4',6-Diamidino-2-Fenilindo, Dicloridrato)	Thermo Scientific	D1306
Fosfato de sódio dibásico	Sigma-Aldrich	S3264
Fosfato de sódio monobásico	Sigma-Aldrich	71505
Toluidine Blue O	Sigma-Aldrich	T3260
Adobe Photoshop	Adobe Systems Incorporated
Comprimidos salinos tamponados com fosfato (PBS)	Research Products International	P32080-100T
CNA Beta III Nickel-Free Archwire	Ortho Organizers, Inc.
Prisma GraphPad	GraphPad Software, Inc.