Declaração de Ética: O Comitê Institucional de Cuidado e Uso de Animais da Universidade Estadual do Mississippi aprovou todas as técnicas de captura, manejo e marcação sob os protocolos 04-068, 07-036, 10-033 e 13-034.
1. Estabelecer locais de captura, imobilizar e transportar veados-cervos selvagens
- Identifique propriedades públicas e privadas inscritas no Programa de Assistência à Gestão de Veados22 e estabeleça ≥29 locais de captura em três regiões-fonte no Mississippi, EUA.
- Identifique diversos locais de captura dentro de cada região-fonte para garantir que a amplitude da variação genética presente na população regional seja obtida.
- Observação: aqui, as regiões-fonte incluíram o Delta, que compreende quase 17% da área total do Mississippi, EUA, e é considerada uma região de solo de alta qualidade, com a agricultura como uso principal da terra23,24. Todos os animais do estudo foram capturados nesta região dentro da distribuição de O. v. virginianus25. Outras regiões incluíram a região do Loess Fino (Loess Fino superior e inferior combinados), que compreende quase 14% da área total do Mississippi, EUA, e é considerada uma região de solo de qualidade média. A agricultura também é um uso principal da terra na região do Loess Fino, embora não seja tão prevalente quanto no Delta23,24. Todos os animais do estudo foram capturados nesta região dentro da distribuição de O. v. virginianus21. Por fim, a região de solo da Planície Costeira Inferior (LCP) compreende quase 22% do Mississippi e é classificada como uma região de solo de baixa qualidade. Os usos principais da terra na LCP são a produção de madeira de pinus e a pastagem de gado23,24. A LCP também sobrepõe-se à distribuição geográfica de O. v. osceola; quatro das seis populações-fonte estavam a menos de 21 km dessa distribuição25. Este subsespécie foi descrito como menor que O. v. virginianus26.

Figura 1: Populações de Origem. Regiões fisiográficas onde matrizes grávidas e veados jovens foram capturados no Mississippi, EUA. Esta figura foi modificada a partir da referência31. Clique aqui para visualizar uma versão maior desta figura.
- Selecione locais potenciais de captura que atendam aos seguintes critérios: características de habitat favoráveis ao deslocamento de veados, proximidade de estradas para acesso e distribuição ao longo da área de estudo.
NOTA: Os locais de captura devem permitir o esconderijo do técnico responsável pela captura.
- Isca os locais com cerca de 10 kg de milho descascado para atrair os veados e avalie o uso com base no consumo da isca e nas imagens de veados capturadas por câmeras sensíveis ao movimento. Realoque para locais alternativos caso os veados não visitem os locais isca em um período de 5 a 7 dias.
- Durante os eventos de captura, permaneça em um "posto" oculto.
- Posicione o posto cerca de 20 m a sotavento do monte de isca, levando em consideração a direção predominante do vento, de modo que os veados que se aproximam da isca tenham menor probabilidade de detectar o odor do técnico de captura.
NOTA: Postos elevados são fortemente recomendados, e o uso de cintos de segurança é obrigatório. Existem várias variações de postos, com diferentes fornecedores comerciais, e sua utilização varia conforme preferência pessoal. Por exemplo, um posto fixo inclui assento com escada acoplada à árvore por meio de cintas. Postos portáteis de escalada podem ser transportados pelo técnico de captura e permitem maior mobilidade, pois o técnico pode escolher uma árvore específica ao chegar ao local de captura. Postos portáteis de escalada são limitados ao uso em árvores retas, sem galhos na altura escolhida.
- Utilize uma arma de dardos acoplada a um dardo de telemetria de 3 cc para administrar uma mistura de tiletamina HCl (4,4 mg/kg) e xilazina HCl (2,2 mg/kg).
- Planeje os esforços de captura para coincidir com o ciclo típico de atividade crepuscular dos veados27. Inicie cada tentativa de captura 2 a 3 h antes do pôr do sol.
- Continue os eventos de captura por 2 a 3 h após o pôr do sol, utilizando óculos de visão noturna e um laser de ponto vermelho para posicionamento do tiro, caso os veados não sejam capturados durante o período diurno.
- Dispare nos veados quando estiverem de lado e imóveis.
NOTA: A coxa traseira do veado é o alvo, pois possui tecido muscular significativo e está localizada longe do coração e dos pulmões.
- Aguarde cerca de 15 min para que os animais alvo injetados (crias de seis meses de idade, de ambos os sexos, ou fêmeas adultas grávidas) fiquem completamente imobilizados antes de localizá-los com equipamento de telemetria direcional.
- Confirme que os indivíduos estão sedados verificando os reflexos oculares (piscar). Em seguida, aplique pomada oftálmica nos olhos e vendilhe os veados para reduzir o estresse.
NOTA: A perda da termorregulação é uma consequência da imobilização.
- Utilize um termômetro retal para avaliar a temperatura corporal após a recuperação. Aqueça os veados com cobertores aquecidos se a temperatura do animal estiver abaixo de 37,7 °C. Resfrie os veados com bolsas de gelo se a temperatura do animal estiver acima de 40,0 °C.
- Posicione o veado em decúbito esternal sobre uma maca estilo militar e transporte-o do local de captura até um reboque fechado.
- Após colocar o veado no reboque, reverta os efeitos da xilazina HCl com 0,125 mg/kg de yohimbina HCl28.
- Transporte todos os veados capturados até a instalação de cativeiro desejada (por exemplo, Mississippi State University Rusty Dawkins Memorial Deer Unit; MSU Deer Unit) e mantenha-os separados por região de origem.
2. Instalações de Cativeiro e Práticas Gerais de Manejo de Animais de Pesquisa
NOTA: A Unidade de Veados da MSU é subdividida em cinco baias de 0,4 a 0,8 ha.
- Cubra todos os lados de cada cercado com tela de sombreamento para atuar como barreira visual e física entre os cercados. A tela de sombreamento ajuda a reduzir lesões e fornece sombra durante os meses de verão.
- Coloque 1-2 abrigos elevados em formato de caixa em uma extremidade de cada cercado para facilitar os eventos de dardos durante a coleta de dados.
- Coloque dois comedouros do tipo cocho em extremidades opostas de cada cercado para reduzir a competição por alimento entre os veados. Forneça também um bebedouro em cada cercado.
- Forneça aos veados uma dieta de alta qualidade (pelotas para veados com 20% de proteína bruta) ad libitum.
OBSERVAÇÃO: Neste caso, forrageiras adicionais disponíveis nos cercados incluíam (Trifolium spp) e festuca (Festuca spp), juntamente com gramíneas e ervas espontâneas.
- Se presentes, mantenha as forrageiras disponíveis nos cercados utilizando uma mistura de herbicidas para controle de plantas daninhas de folhas largas e gramíneas, aplicadas nas doses indicadas nos rótulos respectivos.
OBSERVAÇÃO: Provavelmente será necessário usar instalações fora do campus para alojar machos com idade igual ou superior a 5,5 meses. Essas instalações consistiam em dois cercados de 0,7 ha em cada uma de três propriedades, com práticas de manejo semelhantes às da Unidade de Veados da MSU.

Figura 2: Localizações das Instalações de Cativeiro. Área do estudo onde as instalações satélite e a Unidade de Cervos da Universidade Estadual do Mississippi (MSU) estavam localizadas. As áreas sombreadas indicam os condados de Oktibbeha (A), Noxubee (B), Attala (C), Scott (D) e Copiah (E), Mississippi, EUA. Esta figura foi modificada a partir da referência34. Clique aqui para visualizar uma versão maior desta figura.
3. Controle de Parasitas e Doenças
- Monitore animais de pesquisa para parasitas nematoides (Strongyloides spp) utilizando flutuação fecal, com os parasitas medidos como ovos por grama (OPG).
- Se presentes em níveis elevados, realize o controle parasitário administrando um vermífugo em pellets (ingrediente ativo fenbendazol) na proporção de cerca de 0,77 kg de vermífugo em pellets por 22,7 kg de ração durante o mês de maio.
- Se os níveis parasitários permanecerem altos após o tratamento inicial, utilize um tratamento tópico com ivermectina (5 mg/mL)29, misturado na proporção de 2 mL/0,45 kg, e administre aos animais na proporção de 0,45 kg de ração tratada por 45,4 kg de massa corporal do animal.
NOTA: A doença epizoótica hemorrágica é uma doença viral às vezes letal, transmitida por um mosquito-pólvora (Culicoides spp) durante os meses de verão e outono. Se presente, trate o local de pesquisa com inseticida (inseticida de volume ultra-baixo a 5%) de 2 a 3 vezes por semana, de 1º de julho a 1º de outubro, para reduzir a prevalência dos vetores entre os animais de pesquisa. Aplique este inseticida dentro de cada curral e ao redor do perímetro do local cerca de 90 minutos antes do pôr do sol oficial, por meio de um nebulizador. Os métodos preferenciais para controle de parasitas e doenças são específicos para cada instalação de cativeiro. Os veterinários devem ser consultados durante qualquer pesquisa com vida selvagem em cativeiro para garantir a saúde e a segurança dos animais.
4. Coleta de Dados

Figura 3: Coleta de Dados de Cervos Recém-Nascidos. Medição do comprimento do pé traseiro de um cervo recém-nascido na Unidade de Cervos Memorial Rusty Dawkins da Universidade Estadual do Mississippi, no condado de Oktibbeha, Mississippi, EUA. Clique aqui para visualizar uma versão maior desta figura.
- Procure diariamente pela criação de veados em cativeiro durante a estação de parto.
- Marque os cervos recém-nascidos de forma única com identificadores plásticos médios nas orelhas, utilizando um aplicador de brincos com antibiótico aplicado na extremidade macho do brinco para prevenir infecções potenciais. Coloque o brinco aproximadamente no centro da orelha do cervo.
- Meça a massa corporal (com precisão de 0,01 kg) com uma balança digital suspensa e meça o comprimento do pé traseiro e o comprimento total do corpo (com precisão de 1 mm).
- Colete amostras de pelos e envie para um local remoto para determinação de parentesco (consulte a Tabela de Materiais).
NOTA: A determinação de parentesco foi realizada com base em DNA, utilizando um banco de dados proprietário, não estatístico e com linguagem de consulta estruturada personalizada. Na comparação de alelos em pares, o site remoto de determinação de parentesco atribuiu o parentesco ao excluir todos os machos e fêmeas exceto um pai e uma mãe, com base na presença de um alelo compartilhado de cada progenitor em todos os locos testados (B. G. Cassidy, comunicação pessoal). Esse método de determinação de parentesco também foi utilizado em pesquisas anteriores com veados caudas-brancas em cativeiro30,31.
- Administre 2 cc de toxoide contra Clostridium perfringens tipos C e D e antitoxina contra Clostridium perfringens tipos C e D por via subcutânea e administre 0,3 cc/kg de ivermectina em propilenoglicol (Escola de Veterinária da Universidade Estadual do Mississippi, Mississippi, EUA) por via oral a cada cervo.
- Imobilize quimicamente machos adultos (≥1,5 anos de idade) durante outubro e novembro para coleta de dados.
- Imobilize os adultos em baias utilizando a mesma combinação de cloridrato de tiletamina e cloridrato de xilazina usada para captura de animais selvagens (passo 1.4).
- Durante os eventos de sedação, conduza o técnico que irá aplicar o dardo até a extremidade da baia onde estão localizados os postos elevados de observação. Posicione um único técnico em cada um dos dois postos.
- Peça à pessoa que acompanhou o técnico até o posto que retorne à extremidade oposta da baia.
NOTA: Os veados se afastam desses técnicos e posicionam-se diante dos postos, onde os técnicos estão em posição adequada para realizar disparos éticos em cada veado.
- Dispare nos veados quando estiverem de lado e imóveis (seção 1.4).
- Aguarde cerca de 15 minutos para que os animais atingidos pelo dardo fiquem completamente imobilizados antes de se aproximar.
- Confirme que os indivíduos estão sedados verificando os reflexos oculares (piscar). Aplique pomada oftálmica nos olhos e vendilhe os veados para reduzir o estresse.
- Após a sedação bem-sucedida de um veado individual, monitore as taxas vitais do animal.
- Use um termômetro retal para avaliar a temperatura corporal após a recuperação. Aqueça os veados com mantas aquecidas se a temperatura do animal estiver abaixo de 37,7 °C. Resfrie os veados com bolsas de gelo se a temperatura do animal estiver acima de 40,0 °C.
- Coloque o veado em uma maca estilo militar e transporte-o por meio de um veículo utilitário para uma área predeterminada de coleta de dados.
- Após o transporte, registre as mesmas medidas morfométricas coletadas ao nascimento (passo 4.1).
- Meça a massa corporal (com precisão de 0,01 kg) com uma balança digital suspensa e meça o comprimento do pé traseiro e o comprimento total do corpo (com precisão de 1 mm).
NOTA: Os veados individuais reagem de maneira diferente à combinação de medicamentos utilizada durante os eventos de sedação; portanto, administre cerca de 0,1–0,3 cc da mistura de cloridrato de tiletamina e cloridrato de xilazina (dependendo da massa corporal de cada veado) caso o animal desperte antes da conclusão da coleta de dados.
- Administre quantidades apropriadas de antibiótico, ivermectina, vacina contra clostridiose e vacina contra leptospirose a todos os veados após serem transportados para a área de coleta de dados (consulte as seções 1 e 3).
- Realize três medições de chifres em machos adultos utilizando uma fita métrica específica para chifres enquanto o animal estiver sedado.
- Meça a largura interna (distância máxima entre os ramos principais), a circunferência basal (diâmetro mínimo localizado entre o colarinho e o primeiro ramo, G1) e o comprimento do ramo principal (distância da base do chifre até a ponta do ramo principal) dos chifres antes da remoção.
- Remova os chifres cerca de 3 cm acima do colarinho utilizando uma serra alternada. Não remova chifres a menos de 3 cm de altura.

Figura 4: Coleta de Dados de Machos Adultos. Remoção de chifres com serra tico-tico em um cervo-do-mato macho adulto em cativeiro. Clique aqui para visualizar uma versão maior desta figura.
- Após coletar todos os dados do indivíduo sedado, coloque o veado na baia apropriada e administre 0,125 mg/kg de cloreto de iombina HCl28 ou 4,0 mg/kg de cloreto de tolazolina HCl32 para reverter os efeitos do cloreto de xilazina HCl. Monitore os indivíduos para garantir que permaneçam em posição esternal até que saiam da sedação e estejam completamente alertas.
NOTA: Caso ocorram complicações e os animais precisem ser eutanasiados, a eutanásia por dislocação cerebral por meio de pistola de atordoamento e seccionamento da veia jugular são meios éticos para abater o animal.
- Leve os chifres a uma área designada para finalizar a medição do tamanho dos chifres.
- Meça cada ponta individual que se projeta a partir do eixo principal (G1, G2, G3, etc.) e pontos adicionais anormais com auxílio de um arame.
NOTA: Pontos que não possuem um correspondente no eixo principal oposto ou que não estão de acordo com a definição de um conjunto típico de chifres são definidos pelo Boone and Crockett Club33.
- Enrole o arame ao redor do ponto onde a ponta se encontra com o eixo principal e marque esse ponto como referência.
- Meça a partir desse ponto de referência até a ponta da ponta e repita para cada ponta.
- Obtenha as demais medidas de circunferência identificando o ponto mais estreito entre as pontas G1 e G2 (circunferência H2), entre as pontas G2 e G3 (circunferência H3) e entre as pontas G3 e G4, se presente (circunferência H4).
- Se a ponta G4 não estiver presente, meça a distância entre o ponto médio da ponta G3 e a extremidade do eixo principal e meça a circunferência H4 no ponto intermediário.
- Meça menos de quatro circunferências quando os chifres tiverem menos de três pontas.
NOTA: Por exemplo, um eixo principal com dois pontos típicos inclui apenas três medições de circunferência. Os indivíduos podem usar outras diretrizes (Safari Club International) para calcular o tamanho dos chifres; no entanto, métodos consistentes devem ser usados para cada animal para comparação válida.
- Após realizar todas as medições, calcule uma pontuação dos chifres semelhante à pontuação Boone e Crockett bruta atípica33.
- Pese os chifres com precisão de 0,1 g usando uma balança digital científica e atribua uma massa crítica mínima de 1 g para animais de primeiro ano com chifres menores que 3 cm.
- Imobilize quimicamente juvenis em baias com aproximadamente 5,5 meses de idade, utilizando os mesmos métodos empregados em adultos (seção 4.2), e marque os juvenis com uma etiqueta plástica grande na orelha (passo 4.1.1).
- Utilize as mesmas taxas da mistura de fármacos para imobilizar adultos em cativeiro conforme usadas para imobilizar veados selvagens (seção 1).
- Colete as mesmas medidas obtidas ao nascimento (passo 4.1.2) e administre os mesmos profiláticos dados aos adultos (seção 4.2).
NOTA: Após a coleta de todos os dados, transporte cada macho juvenil até sua instalação satélite designada aleatoriamente por meio de reboque.
5. Produção de Descendentes da Primeira e Segunda Geração
- Classifique veados jovens de seis meses capturados na natureza e filhotes nascidos na instalação de cativeiro a partir de mães capturadas na natureza como indivíduos da primeira geração.
- Durante a estação reprodutiva, coloque dois machos com 7-16 fêmeas, obtendo uma razão sexual média de reprodução de um macho para oito fêmeas.
NOTA: Selecione machos reprodutores de instalações satélite com base na aparência física, pois os machos mais saudáveis (com maiores chifres e tamanho corporal) têm maior probabilidade de cobrir as fêmeas durante toda a estação reprodutiva sem sofrer lesões devido ao comportamento agressivo dos machos nesse período.
- Permita que os veados acasalem apenas com outros indivíduos da mesma região de origem (por exemplo, machos do Delta acasalam com fêmeas do Delta, machos do Thin Loess acasalam com fêmeas do Thin Loess, e machos do LCP acasalam com fêmeas do LCP).
- Classifique veados concebidos por pais da primeira geração como descendentes da segunda geração. Crie esses indivíduos em cativeiro desde o nascimento e forneça a mesma dieta de alta qualidade oferecida aos seus pais.
NOTA: As fêmeas podem produzir filhotes em múltiplos anos, mas normalmente com diferentes pais a cada ano. Colete os mesmos dados sobre os descendentes da segunda geração que foram coletados sobre os indivíduos da primeira geração e os capturados na natureza.