Avaliação da função Microvascular de tecido adiposo humano usando tele-microscopia

Summary

Sistemas de tele-microscopia são usados para examinar as propriedades funcionais das arteríolas isoladas de tecido adiposo em resposta a estímulos fisiológicos e farmacológicos. Esta técnica pode ser usada para examinar fenótipos microvasculares em domínios diferentes de tecido adiposo em seres humanos obesos.

Abstract

Enquanto a obesidade está intimamente ligada ao desenvolvimento de doenças metabólicas e cardiovasculares, pouco é conhecido sobre os mecanismos que regem esses processos. Supor que mediadores pro-aterogênico liberados do adiposo, particularmente em associação com a adiposidade visceral/central podem promover alterações vasculares patogénicas localmente e sistemicamente, e a noção de doença cardiovascular pode ser o consequência da disfunção do tecido adiposo continua a evoluir. Aqui, descrevemos um método exclusivo de tele-microscopia que envolve a análise das respostas vasodilatador e vasoconstritor intacta pequenas arteríolas humana, retirados do depósito de tecido adiposo de seres humanos vivos. Tele-microscopia é usada para examinar as propriedades funcionais de microvessels isolado em resposta a estímulos fisiológicos ou farmacológicos, usando um sistema de pressão que imita as condições na vivo . A técnica é uma abordagem útil para a compreensão da fisiopatologia e mecanismos moleculares que contribuem para a disfunção vascular localmente dentro do meio do tecido adiposo. Além disso, anormalidades na microvasculatura tecido adiposo também têm sido associadas com doenças sistêmicas. Nós aplicamos esta técnica para examinar o depósito específico respostas vasculares em indivíduos obesos. Avaliamos a vasodilatação endotélio-dependente ao fluxo aumentado e acetilcolina em arteríolas adiposas (50-350 µm de diâmetro interno, 2-3 mm de comprimento) isoladas de dois diferentes depósitos de tecido adiposos durante cirurgia bariátrica do mesmo indivíduo. Demonstrámos que arteríolas de gordura visceral apresentam prejudicada vasodilatação endotélio-dependente, em comparação aos navios isolados do depósito subcutâneo. Os resultados sugerem que o microambiente visceral está associado a disfunção endotelial vascular que pode ser relevante para a observação clínica vinculando aumento de adiposidade visceral aos mecanismos de doença sistêmica. A técnica de tele-microscopia pode ser usada para examinar vasculares fenótipos de diferentes depósitos de gordura, bem como comparar resultados entre indivíduos com diferentes graus de obesidade e disfunções metabólicas. O método também pode ser usado para examinar as respostas vasculares longitudinalmente em resposta às intervenções clínicas.

Introduction

Tele-microscopia é uma técnica útil utilizada para examinar a função vasomotora pequenas arteríolas removido da vida humana assuntos ex vivo. Nosso laboratório centrou-se na dissecação fora microvessels minúsculo de compartimentos diferentes de tecido adiposo para caracterizar os efeitos de vários microambiente adiposa sobre a microvasculatura. Uma grande vantagem desta técnica é que os vasos sanguíneos removidos do corpo humano permanecem funcionais e podem ser examinados prontamente dentro de minutos a horas após a biópsia. Condições fisiológicas são imitadas e firme pressão transmural mantida no espaço intraluminal através de cânulas de vidro micro que rec....

Protocol

o protocolo e exemplos aqui descritos foram aprovados por Boston Universidade escola de medicina institucional Review Board (IRB, protocolo #H-25644) e foram conduzidos de acordo com a declaração de Helsinque. Todos os temas fornecidos escrito consentimento informado antes participação.

1. preparação de soluções e vidro Micro cânulas

1. preparar a solução salina de ácido 4-2-hydrosyethyl-1-piperazineethanesulfonic (HEPES). Para 1 L, dissolver 8,059 g de NaCl, 0,298 g de KCl, 0,296 g MgSO ₄ • 7 H ₂ O, 0,235 g de CaCl ₂ • 2 H ₂ O, 0,16 g KH ₂ PO ₄, 0,01 g E....

Results

Nosso laboratório tem usado tele-microscopia para examinar o endotélio-dependente e - vasodilatação independente, bem como a função de vasocontractile de tecido adiposo arteríolas isoladas de gordura subcutânea e visceral de humanos obesos. A montagem experimental característica é exibida na figura 1A. Tecido adiposo arteríolas são suspensas entre duas pipetas de vidro capilar e preso no lugar com suturas dentro da câmara de órgão, como mostrado na

Discussion

A dissecção e o isolamento de arteríolas adiposas dos tecidos circundantes podem ser um processo demorado e trabalhoso com cuidadosa atenção aos detalhes e protocolo técnico. O procedimento de microdissection exige habilidades meticulosas e utensílios especializados dissecação para evitar possíveis danos ao músculo liso ou endoteliais células camadas da microvasculatura. Até mesmo pequenas punções acidentais na parede arteriolar podem evitar pressurização intraluminal e resultados em um experimento mal sucedido. Além dis.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Nome químico
Acetilcolina	Sigma Aldrich	A6625
Cloreto de cálcio (CaCl2)	Sigma Aldrich	223506
D-(+)-glicose	Sigma	Aldrich G5767
Endothelin-1	Sigma Aldrich	E7764
Etilenoglicol-bis(2-aminoetiléter)-N,N,N',N'-tetra ácido acético (EGTA)	Sigma Aldrich	E3889
Ácido etilenodiaminotetra acético (EDTA)	Sigma Aldrich	E9884
HEPES	Sigma	Aldrich H3784
Nw-nito-L-arginina metil ester cloridrato	Sigma Aldrich	N5751
Sulfato de magnésio (MgSO4)	Sigma Aldrich	M7506
Cloreto de potássio (KCL)	Sigma Aldrich	P3911
Fosfato de potássio (KH2PO4)	Sigma Aldrich	P5655
Papaverine	Sigma Aldrich	P3510
Bicarbonato de sódio (NaHCO 3)	Sigma Aldrich	S6014
Cloreto de sódio (NaCl)	Sigma Aldrich	S7653
Fosfato de sódio monobásico monohidratado (NaH2Po4)	Sigma Aldrich	S9638
Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Equipment
Forceps	Finescience tools	15000-08
Microscópio invertido	Zeiss Achromat
Laboratory tubing	Euro-Pharm	250100306F999
Extrator de agulhas/pipetas	David kopf instruments	720
Sutura de nylon monofilamento oftálmico	Especialidades cirúrgicas	A7756N
Tesoura	Finescience ferramentas	150000-08
Câmara de vaso	DMT	VAS v.2.1