Função sensorial anormal subjacente a dor visceral e outros sintomas de doenças inflamatórias e funcionais do intestino. Um protocolo para a gravação eletrofisiológica dos nervos aferentes do cólon em uma preparação de colorectum de rato ex vivo é apresentado aqui.
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Artigo de método
In Vitro Caracterização das propriedades eletrofisiológicas das fibras aferentes do cólon em ratos
Neste artigo
Resumo
Resumo
Disfunção dos nervos sensoriais do cólon tem sido implicada na fisiopatologia de várias condições comuns, incluindo diabetes e doenças inflamatórias e funcionais do intestino. Aqui, descrevemos um protocolo para a caracterização em vitro das propriedades eletrofisiológicas de afferents Colônica em ratos. O colorectum, com o gânglio pélvico intacto (PG), anexado, é removido o rato; superfused com carbogenated solução de Krebs na câmara de gravação; e canulado nas extremidades para permitir a distensão orais e anais. Um feixe de nervos bem emana o PG é identificado, e a atividade do nervo aferente multiunit é gravada usando um eletrodo de sucção. Distensão do segmento do cólon provoca aumentos graduais na descarga multiunit. Uma análise de componentes principais é realizada para diferenciar o baixo limiar, o limite de alta e as fibras aferentes de alcance dinâmico largo. Sensibilidade química de afferents do cólon pode ser estudada através da administração de banho ou intraluminal de compostos de teste. Este protocolo pode ser modificado para aplicação a outras espécies, como ratos e cobaias e para estudar as diferenças nas propriedades eletrofisiológicas de afferents toracolombar/hipogástrica e lombossacral/pélvica do cólon descendente no normal e condições patológicas.
Introdução
O trato gastrointestinal (GIT) é ricamente inervado com nervos aferentes extrínsecos que transmitem sinais sensoriais do intestino para o sistema nervoso central e que contribuem para a interação do intestino-cérebro. Excitabilidade alterada destas afferents extrínseca, bem como alterado processamento central das entradas aferentes, subjaz dor visceral e outros sintomas de condições de GI, incluindo de doenças intestinais inflamatórias e funcionais1. Informações sensoriais do colorectum são transmitidas principalmente pela toracolombar/hipogástrica e os nervos pélvicos/lombossacral (PN)2. Tem havido um aumento do interes....
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Protocolo
o protocolo experimental relatado aqui foi aprovado pelo Animal ético Comité de Shanghai Jiaotong University School of Medicine (# SYXK2013-0050). A dissecção do colorectum com gânglio intacto e nervo porta-malas leva no mínimo 15 minutos para uma pessoa muito experiente nesta técnica. É, portanto, necessário manter o animal vivo, mas sob anestesia profunda enquanto executando as dissecções, para garantir a viabilidade do tecido para posterior gravação eletrofisiológica.
1. preparação da solução de perfusão e compostos de teste
- preparar 5 L da solução de Krebs: 113 mM NaCl, 5,9 mM KCl, 1,2 mM NaH 2 PO 4, 1,....
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Resultados
A Figura 1 é a ilustração esquemática da instalação experimental para a preparação de colorectum ex vivo "tubo", com um representante do nervo distal de gravação para o PG. O nervo presumivelmente continha uma mistura de afferents esplâncnico pélvico e lombar. Em preparações de ratos normais, os nervos aferentes do cólon normalmente têm um baixo nível de atividade espontânea irregular. Distensão de rampa do cólon induz a um aumento gradual da taxa de.......
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Discussão
O protocolo aqui apresentado é um método relativamente simples experimental para avaliar as propriedades eletrofisiológicas das afferents Colônica de ratos. O protocolo (a partir de dissecção de tecidos para configurar a gravação de nervo) normalmente leva cerca de 2 h para completar. Coleção de tecido (passo 3) e preparação do eletrodo sucção (etapa 5) são os passos críticos. É fundamental ser capaz de localizar o PG, o LSN e o PN e tome cuidado para não danificar o gânglio e nervos durante a dissecção do tecido. A pont.......
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Divulgações
Os autores declaram não haverá conflito de interesses.
Agradecimentos
Este protocolo foi apoiado por bolsas de investigação do Nacional Natural Science Foundation da China (#31171066, #81270464) e do centro de ciência de Sino-alemão (GZ919).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Pentobarbital de sódio | Shanghai Westang Bio-Tech | B558 | |
| Capsaicina | Sigma | M2028 | |
| Extrator de eletrodos | MicroData Instrument Inc | PMP107 | |
| Neurolog System (Bioamplificador) | Digitimer, Ltd | do Sistema | |
| Neurolog | Cambridge Electronic Design | Micro1401 | |
| Software de processamento de dados | Cambridge Electronic Design | Spike2 versão 6 | |
| Fio de prata | Instrumentos de precisão mundial | EP12 | |
| Tubos de vidro | Instrumentos de precisão mundial | 1B150-4 | |
| Suporte de eletrodo | Instrumentos de precisão mundial | MEH3SBW | |
| banho de aquecimento | Grant | GR150 | |
| Microscópio de dissecação | Leica | Zoom2000 | |
| Microscópio de dissecação | World Precision Instruments | PZMIII-BS | |
| Isqueiro | qualquer | NA | |
| Ferramentas cirúrgicas | World Precision Instruments | NA | |
| Pinos de insetos | caseiros de fio de aço inoxidável de 0,1 mm | NA | |
| Manipulador | de três viasInstrumentos de Precisão Mundial | KITF-R | |
| Ratos | Qualquer | NA | Qualquer cepa/sexo pode ser usado. |
Referências
- Al-Chaer, E. D., Traub, R. J. Biological basis of visceral pain: recent developments. Pain. 96 (3), 221-225 (2002).
- Christianson, J. A., Traub, R. J., Davis, B. M. Differences in spinal distribution and neurochemical phenotype of colonic afferents in mouse and rat.
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Reimpressões e permissões
