Stereological estimativa do número de neurônios Dopaminergic na substância negra do Mouse usando o fracionador óptico e equipamento padrão de microscopia

Chi Wang Ip; David Cheong; Jens Volkmann

doi:10.3791/56103

É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.

Artigo de método

Stereological estimativa do número de neurônios Dopaminergic na substância negra do Mouse usando o fracionador óptico e equipamento padrão de microscopia

18.5K visualizações

⸱

DOI:

10.3791/56103

⸱

1 de setembro de 2017

Chi Wang Ip¹ , David Cheong¹ , Jens Volkmann¹

¹Department of Neurology, University Hospital of Würzburg

Neste artigo

Resumo

Este trabalho apresenta um protocolo passo a passo para a estimativa stereological imparcial de números de celular neuronal dopaminérgicos na substância negra do mouse usando o equipamento padrão de microscopia (i.e., um microscópio de luz, uma tabela de objetos motorizado (x, y, z avião) e software de domínio público para análise de imagem digital.

Resumo

Em pesquisa pré-clínica da doença de Parkinson, análise do tracto nigrostriatal, incluindo a quantificação da perda de neurônio dopaminérgico dentro da substantia nigra, é essencial. Para estimar o número de neurônios dopaminérgicos total, imparcial stereology usando o método fracionador óptico atualmente é considerada o padrão-ouro. Porque a teoria por trás do método fracionador óptico é complexa e stereology é difícil de alcançar sem equipamento especializado, vários sistemas disponíveis comercialmente stereology completa que incluem o software necessário existe, puramente para celular contando razões. Uma vez que compra uma instalação especializada stereology não é sempre viável, por muitas razões, este relatório descreve um método para a estimativa stereological da célula neuronal dopaminergic conta usando equipamentos de microscopia padrão, incluindo um microscópio de luz, um motorizado objeto da tabela (x, y, z plano) com o software de imagem e um computador para análise. Uma explicação passo a passo é dada sobre como realizar a quantificação stereological usando o método fracionador óptico e arquivos previamente programados para o cálculo de contagem de células estimados são fornecidos. Para avaliar a precisão desse método, foi realizada uma comparação com dados obtidos de um aparelho stereology comercialmente disponível. Números de telemóvel comparáveis foram encontrados usando este protocolo e o dispositivo stereology, demonstrando assim a precisão do presente protocolo para stereology imparcial.

Introdução

A quantificação do número de células neuronais é crucial na investigação pré-clínica da doença de Parkinson, para determinar o nível de neurodegeneração dentro da substância negra (SN)¹^,². A imparcial stereological estimativa do número de células em uma região de interesse é considerada o padrão-ouro,³^,⁴^,⁵.

Antes do advento do stereology imparcial, o número de neurônios em seções foi avaliado através da manipulação de células contadas perfis para corrigir as probabilidades variáveis que neu....