A área de superfície pulmonar interna (ISA) é um critério crítico para avaliar a morfologia pulmonar e a fisiologia em doenças pulmonares e regeneração alveolar induzida por lesão. Descrevemos aqui um método padronizado que pode minimizar o viés de medição para ISA tanto na pneumonectomia pulmonar quanto nos modelos de mouse de implante de prótese.
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Artigo de método
Um Método Padronizado para Medição da Superfície de Pulmão Interna via Neumonectomia de Mouse e Implante de Prótese
Neste artigo
Resumo
Resumo
A morfologia, fisiologia e funções respiratórias pulmonares mudam em condições fisiológicas e patológicas. A área de superfície pulmonar interna (AIE), representando a capacidade de troca gasosa do pulmão, é um critério crítico para avaliar a função respiratória. No entanto, o viés do observador pode influenciar significativamente os valores medidos para os parâmetros morfológicos pulmonares. O protocolo que descrevemos aqui minimiza as variações durante as medições de dois parâmetros morfológicos usados para o cálculo do ISA: volume pulmonar interno (ILV) e intercepto linear médio (MLI). Usando ISA como parâmetro morfométrico e funcional para determinar o resultado da regeneração alveolar em modelos de camundongos com pneumonectomia (PNX) e implante de prótese, descobrimos que o aumento do ISA após o tratamento com PNX foi significativamente bloqueado pelo implante de uma prótese na cavidade torácica1. Espera-se que a capacidade de quantificar com precisão a AIS não apenas melhore a confiabilidade e a reprodutibilidade dos estudos de função pulmonar em modelos de regeneração alveolar induzida por lesados, mas também promova descobertas mecanicistas de múltiplas doenças pulmonares.
Introdução
A função fundamental do pulmão é a troca de oxigênio e dióxido de carbono entre os vasos sanguíneos e a atmosfera. As doenças pulmonares como a displasia broncopulmonar (DBP), a doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC) e as infecções respiratórias agudas resultam em diminuição da AIS 2 . Pesquisadores que estudaram doença pulmonar desenvolveram vários métodos quantitativos para avaliar alterações morfológicas nos pulmões, incluindo MLI, ILV, número de unidades de troca de gás, ISA e adesão ao tecido pulmonar 2 , 3 . Estudos pioneiros de Weibel et al. 4....
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Protocolo
Todos os procedimentos utilizados neste protocolo foram realizados de acordo com as recomendações das Diretrizes para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório do Instituto Nacional de Ciências Biológicas de Pequim. Os ratinhos macho CD-1 de 8 semanas de idade foram alojados em uma instalação específica de patógenos livres (SPF) até que os experimentos fossem conduzidos. As cirurgias foram realizadas usando camundongos completamente anestesiados ( ou seja , sem respostas de pinça do dedo do pé). Após a cirurgia, os ratos foram mantidos em uma sala quente e úmida com comida e água doce suficientes. Os ratos foram sacrificados usando uma sobredosagem de aneste....
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Resultados
Realizamos aqui um experimento com um grupo tratado com PNX e um grupo de implante de prótese (Prótese implantada). Esses agrupamentos são os mesmos que os agrupamentos utilizados em um estudo publicado anteriormente em nosso grupo de pesquisa 14 .
O PNX do mouse e os procedimentos de implantação da prótese são mostrados na Figura 2 . Os ratos macho CD-1 de 8 semanas .......
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Discussão
Neste protocolo, fornecemos descrições detalhadas sobre a medição de parâmetros pulmonares após PNX do pulmão esquerdo do rato e implantação da prótese. Atualmente, a ISA é considerada uma métrica chave para a avaliação da função respiratória em muitas doenças pulmonares e na regeneração alveolar induzida por lesão. No entanto, embora a comunidade de pesquisa pulmonar esteja de acordo sobre a utilidade da ISA como métrica útil, até o momento, houve pouca consideração da padronização da medida de ILV e MLI, os dois parâm.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
Os autores gostariam de agradecer o Instituto Nacional de Ciências Biológicas, Pequim, pela assistência. Este trabalho foi apoiado pela Fundação Municipal de Ciências Naturais de Pequim (nº Z17110200040000).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Kit de cautério de baixo custo | Ferramentas de Belas Ciências | 18010-00 | |
| Tesoura Noyes | Ferramentas de Ciências Finas | 15012-12 | |
| Pinça de padrão padrão | Ferramentas de Ciências Finas | 11000-12 | |
| Castroviejo Micro Porta-agulhas | Ferramentas de Ciências Finas | 12060-01 | |
| Clipes de vaso | Ferramentas de Ciências Finas | 18374-44 | |
| I. V. Cânula-20 calibre | Jinhuan Medical Product Co., LTD. | 29P0601 | |
| Sutura cirúrgica | Jinhuan Medical Product Co., LTD. | F602 | |
| Plataforma de intubação de camundongo | Penn-Century, Inc | Modelo MIP | |
| Laringoscópio para pequenos animais | Penn-Century, Inc | Modelo LS-2-M | |
| TOPO Ventilador para pequenos animais | Kent Scientific | RSP1006-05L | |
| Almofada térmica Equipamento | Stuart | SBH130D | |
| Sal de sódio pentobarbital | Sigma | P3761 | |
| Sal de heparina sódica | Sigma | H3393 | |
| Solução de hematoxilina | Sigma | GHS132 | |
| Solução de eosina Y, alcoólica | Sigma | HT110116 | |
| 10 mL Pipeta | Thermo Scientific | 170356 | |
| Paraformaldeído | Sigma | P6148 | |
| O.C.T Compound | Tissue-Tek | 4583 | |
| máquina de criossecção | Leica | CM1950 | |
| Base Descartável Moldes | Fisher HealthCare | 22-363-553 | |
| Agulha de calibre 18 | Becton Dickinson | 305199 | |
| Iodopovidona | Fisher Scientific | 19-027132 | |
| 70% etanol | Fisher Scientific | BP82011 | |
| Conjuntos de infusão para solteiro use | Weigao | SFDA 2012 3661704 | |
| fosfato tampolado | solução salina Gibco | 10010023 | |
| fitas | 3M Scotch | 8915 | |
| almofada de algodão | Vinda | Dr.P | |
| prótese de silicone | Custom made | ||
| microscópio de campo claro | Olympus | VS120 | |
| ferramenta de régua | Adobe |
Referências
- Liu, Z., et al. MAPK-Mediated YAP Activation Controls Mechanical-Tension-Induced Pulmonary Alveolar Regeneration. Cell Rep. 16 (7), 1810-1819 (2016).
- Thurlbeck, W. M. Internal surface area and other measurements in emphysema. Thorax. 22
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Reimpressões e permissões
