Injeção de corante azul de metileno em pelve renal facilita a avaliação de defeitos de obstrução do trato urinário junção durante o desenvolvimento embrionário do trato urinário de rato. Aqui, um protocolo para injeção de corante azul de metileno na pelve renal é descrito.
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Artigo de método
Avaliar defeitos de obstrução do trato urinário junção por injeção de corante azul de metileno
Neste artigo
Resumo
Resumo
Defeitos de obstrução do trato urinário junção são anomalias congênitas induzindo hidronefrose e hidroureter. Defeitos de obstrução urinária murino junção podem ser avaliados pelo controle de fluxo do corante azul de metileno dentro do sistema urinário. Corante azul de metileno é injetado em pelve renal dos rins embrionários perinatais e fluxo do corante é monitorado da pelve renal do rim através do ureter e para dentro do lúmen da bexiga após a aplicação de pressão hidrostática. Acumulação de tintura será evidente no lúmen do tracto urinário perinatal normal da bexiga, mas vai ser restrita entre a pelve renal e o ponto final de um ureter anormal, se ocorrerem obstruções do trato urinário. Esse método facilita a visualização de hidronefrose e hidroureter e a confirmação da obstrução de junção do trato urinário. Este manuscrito descreve um protocolo para injeção de corante azul de metileno na pelve renal para confirmar obstruções de junção do trato urinário.
Introdução
O sistema urinário consiste de um par de rins e ureteres e um comum da bexiga e uretra. A principal função do sistema urinário é manter a homeostase do corpo gerindo o equilíbrio de água e eletrólitos do sangue. Os rins filtram o sangue para controle concentrações de eletrólitos e equilíbrio ácido-base e produzem urina para excretar o excesso de água e resíduos, incluindo solutos e metabólitos. Urina é então transportada através do ureter da pelve renal do rim para o bladderin de uma maneira unidirecional, onde é armazenado e, finalmente, eliminada através da uretra1.
Os ureteres são tubos retos, proveniente do ducto....
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Protocolo
ratos (Wnt5a flox / ratos flox (Wnt5a tm1.1Tpy) e Dll1Cre linha, modelo de mouse UVJO) 7 eram geridas de acordo com as diretrizes do NIH para o cuidado e o uso de animais de laboratório e estudado sob um protocolo aprovado pelo Comitê de uso e cuidado do Animal de NCI-Frederick.
1. preparação da solução de corante azul de metileno
- medir pó de azul de metileno 0,1 g.
- Dissolver o azul de metileno em solução salina normal de 10 mL ou 1 x salina tamponada fosfato (PBS) completamente vortexing.
- A 10 mg/mL solução de azul de metileno de filtragem com um....
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Resultados
Rins e sistema urinário inferior estão localizados dorsal à maioria dos outros órgãos internos como o fígado e intestino. Depois de remover esses outros órgãos internos, um par de rins e ureteres e bexiga única são visíveis (figura 1A). Após dissecação bem sucedida, o corante injetado em pelve renal fluirá do rim para a bexiga através da uretra. A pelve renal é a funil-como dilatada porção proximal do ureter no rim. Portanto, o ponto de injeção do corante é p.......
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Discussão
Rins de mouse são funcional início em E16.5 e um teste de injeção de corante é teoricamente possível deste ponto do tempo. No entanto, o rim é muito pequeno para ser injetado com a solução de corante e fenótipos como hidronefrose e hidroureter não são claramente observados desde que estes fenótipos são um efeito secundário da urina acumulada devido ao transporte de urina anormal. Estes fenótipos, desde as obstruções, como UPJO ou UVJO, são evidentes no E18.5 por distendido rins e ureteres. Maiores rins de embriões em E19.......
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Divulgações
O autor não tem nada para divulgar.
Agradecimentos
Agradeço o Dr. Alan O. Perantoni (CDBL/ICN/NIH) para apoiar a apresentação deste manuscrito. Agradeço também a Dr. Michael Hall (CDBL/ICN/NIH) e Nirmala Sharma (CDBL/ICN/NIH) para editar este manuscrito. Eu sou grato a Lai Thang (SAIC) para sua criação do mouse excelente. Este trabalho foi financiado pelos institutos nacionais de saúde, Instituto Nacional de câncer e o centro para pesquisa do câncer.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Azul de metileno | Sigma-Aldrich | M9140 | |
| Quality Biological Inc. SOLUÇÃO SALINA NORMAL - 500ML | Fisherscientific | 50-983-204 | |
| 3 mL com ponta BD Luer-Lok | 309657 | ||
| Filtros de Seringa Acrodisc com Membrana Supor | Pall corporation | 4614 | |
| Exel Conjuntos de Veias do Couro Cabeludo (Borboleta); 27G x 3/4" 12" | EXELINT | 26709 | |
| Tesoura de Operação Delicada | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-6702 | |
| Micro Pinça de Dissecação | Roboz Surgical Instrument Co. | Pinças RS-5135 | |
| Dumont; Padrão #5 | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5045 | |
| BD Agulhas PrecisionGlide 30 G x 1/2" | BD | 305106 |
Referências
- Rasouly, H. M., Lu, W. Lower urinary tract development and disease. Wiley Interdiscip Rev Syst Biol Med. 5, 307-342 (2013).
- Kispert, A. T-Box Genes in the Kidney and Urinary Tract. Curr Top Dev Biol. 122, 245-278 (2017).
- Bohnenpoll, T., Kispert, A.
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Reimpressões e permissões
