Este artigo descreve um conjunto de técnicas de luz e microscopia eletrônica de varredura para estudar a anatomia interna e externa do olho de insetos. Estes incluem várias técnicas tradicionais otimizadas para trabalhar em olhos de formiga, detalhados de solução de problemas e sugestões para otimização de espécimes diferentes e regiões de interesse.
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Artigo de método
Técnicas para investigar a anatomia do sistema Visual de formiga
Neste artigo
Resumo
Resumo
Este artigo descreve um conjunto de técnicas em microscopia de luz (LM) e microscopia de elétron (EM) que pode ser usada para estudar a anatomia interna e externa do olho de insetos. Estes incluem técnicas histológicas tradicionais otimizado para trabalhar em olhos de formiga e adaptado para trabalhar em conjunto com outras técnicas, como a microscopia eletrônica de transmissão (TEM) e microscopia eletrônica de varredura (MEV). Essas técnicas, embora muito útil, podem ser difícil para a microscopista iniciante, então grande ênfase foi colocada neste artigo sobre solução de problemas e otimização para espécimes diferentes. Podemos fornecer informações sobre técnicas de imagem para o espécime inteiro (foto-microscopia e SEM) e discutir as suas vantagens e desvantagens. Destaca-se a técnica utilizada na determinação de diâmetros de lente para o olho inteiro e discutir novas técnicas para melhoria. Por fim, discutimos as técnicas envolvidas na preparação de amostras para LM e TEM, corte, coloração e estas amostras de imagem. Vamos discutir os obstáculos que um pode vir do outro lado quando preparar amostras e melhor forma de navegar ao redor deles.
Introdução
Visão é uma modalidade sensorial importante para a maioria dos animais. Visão é especialmente crucial no contexto de navegação para identificar objetivos, estabelecendo e aderindo às rotas e obter informações bússola1,2. Insetos detectam informação visual usando um par de olhos compostos e, em alguns casos, uma a três colocados dorsalmente simples olhos chamados ocelos3,4,5.
Os olhos das formigas são de particular interesse porque, enquanto as formigas são maravilhosamente diversificadas, e....
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Protocolo
1. preparação das amostras
Nota: É necessário primeiro compreender o local relativo o olho composto e ocelos uns aos outros e para a cabeça. Isto pode ser conseguido através da aquisição de imagens da vista dorsal da cabeça. Por isso, recomendamos o processamento de amostras para Fotomicrografia ou usando técnicas SEM. Abaixo estão as etapas envolvidas em ambos os processos.
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Coleta de amostras
- Coletar e armazenar amostras diretamente em etanol a 70%. Recolha as castas diferentes, sempre que possível.
- Rotular espécimes com hora, data e local, bem como quaisquer outras observações relevantes (<....
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Resultados
Os métodos descritos aqui permitem o estudo detalhado da simples e olhos compostos das formigas. A vista dorsal da cabeça usando técnicas de fotomicrografia de Z-pilha de imagem permite obter uma visão geral do layout do sistema visual (Figura 1). Esta é uma boa preparação para as dissecções e para determinar o ângulo de corte desejado. Esta técnica também é útil para a tomada de medidas tais como a largura da cabeça, comprimento do olho e diâmetros de lente .......
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Discussão
O conjunto de métodos indicados acima permitem uma investigação eficaz sobre o sistema óptico de formigas e outros insetos. Estas técnicas informam nossa compreensão da resolução de amostragem, sensibilidade óptica e potencial sensibilidade de polarização do olho a ser estudado. Esse conhecimento fornece uma base importante para a investigação fisiológica e comportamental em suas capacidades visuais. Além disso, enquanto os métodos detalhados aqui concentraram-se em sistemas visuais de formiga, estas técnicas podem ser u.......
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Divulgações
Os autores declaram não interesses concorrentes.
Agradecimentos
Estamos gratos a Jochen Zeil, Paul Cooper e Birgit Greiner por compartilhar seus conhecimentos em anatomia de insetos e para várias das técnicas demonstrando descrevemos aqui. Estamos gratos aos funcionários talentosos e apoio do centro de microscopia avançada no ANU e a unidade de microscopia em MQU. Este trabalho foi apoiado por uma bolsa de pós-graduação para FRE e subsídios do Conselho australiano de pesquisa (DE120100019, FT140100221, DP150101172).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Formiga | Myrmecia midas | ||
| Estereomicroscópio | Leica M205 FA | ||
| Revestidor de pulverização catódica | Pro Sci Tech | ||
| Etanol | Sigma Aldrich | ||
| Placa de Petri | ProSciTech | ||
| Microscópio de dissecação | Leica MZ6 | ||
| Pino | de insetoProSciTech | ||
| Esmalte incolor | Sem marca: de qualquer loja | ||
| Lâmina | ProSciTech | ||
| Lâmina de barbear | ProSciTech | ||
| Foreceps | ProSciTech | ||
| Lamínula | ProSciTech | ||
| Microscópio composto | Leica DM5000 B | ||
| Glutaraldeído | Sigma Aldrich | ||
| Paraformalydeído | Sigma Aldrich | ||
| Cloreto de Potássio (KCl) | Sigma Aldrich | ||
| di-Sódio Hidrogenofosfato (Na2HPO4) | Sigma Aldrich | ||
| Potássio di-Hidrogenofosfato (KH2PO4) | Sigma Aldrich | ||
| Sódio Cloreto (NaCl) | Sigma Aldrich | ||
| Tetróxido de ósmio | Sigma Aldrich | ||
| Acetona | Sigma Aldrich | ||
| Araldite Resina epóxi | Sigma Aldrich | ||
| Toluidie Blue | Sigma Aldrich Hotplate | ||
| Riechert HK120 |
Referências
- Zeil, J. Visual homing: an insect perspective. Curr. Opin. Neurobiol. 22, 285-293 (2012).
- Wehner, R. Desert ant navigation: how miniature brains solve complex tasks. J. Comp. Physiol. A. 189, 579-588 (2003).
- Fent, K., Wehner, R.
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Reimpressões e permissões
