Method Article

Dissecação e preparação Coronal fatia de desenvolver Mouse hipófise

DOI:

10.3791/56356

⸱

November 16th, 2017

 ,  ,  , 
1Department of Pathophysiology, Second Military Medical University, 2Department of Cell Biology, Second Military Medical University

In This Article

Summary

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Apresentamos um protocolo para dissecar as glândulas pituitárias e preparar na hipófise coronais seções de desenvolvimento de ratos.

Abstract

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A glândula pituitária ou hipófise é um importante órgão endócrino secreção de hormônios essenciais para a homeostase. É constituída por duas glândulas com funções e origens embrionárias distintas — a neuro-hipófise e a adenohipófise. A desenvolvimento do mouse hipófise é minúsculo e delicado com uma forma oval alongada. Uma secção coronal é preferida para exibir tanto a adenohipófise e neuro-hipófise em uma única fatia da hipófise do mouse.

O objetivo do presente protocolo é conseguir a adequada da hipófise secções coronais com arquiteturas de tecido bem preservado de desenvolver ratos. Neste protocolo, descrevemos em detalhe como dissecar e processo hipófises corretamente de desenvolvimento de ratos. Primeiro, os ratos são fixos por perfusão transcardial de formaldeído antes da dissecação. Em seguida, três diferentes técnicas de dissecação são aplicadas para obter intactas as glândulas pituitárias, dependendo da idade dos ratos. Para ratos fetais entre embrionários dias (E) 17,5-18.5 e neonatos acima de 4 dias, as regiões de sella inteira, incluindo o osso esfenoide, glândulas e nervos trigêmeo são dissecadas. Para filhotes idade pós-natal dias (P) 5-14, as glândulas pituitária conectados com os nervos trigêmeo são dissecados como um todo. Para ratos mais de 3 semanas de idade, as glândulas pituitária são cuidadosamente dissecadas de graça os tecidos circundantes. Também exibimos como incorporar as glândulas pituitária em uma orientação correta usando os tecidos circunvizinhos como Marcos para obter satisfação secções coronais. Esses métodos são úteis na análise de características histológicas e do desenvolvimento das glândulas pituitária no desenvolvimento de ratos.

Introduction

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A glândula pituitária ou hipófise é um importante órgão endócrino secreção de hormônios essenciais para a homeostase1,2. Anatomicamente, a glândula pituitária é uma estrutura ' dois-em-um ' da neuro-hipófise e a adenohipófise. Estas peças têm a função e diferentes origens embrionárias muito diferentemente. A neuro-hipófise é derivada do ectoderma neural e segrega ocitocina e hormônio antidiurético. A adenohipófise origina-se de bolsa de Rathke e é responsável para a liberação de hormônios, incluindo o hormônio do crescimento, prolactina, hormônio estimulante da tireoide, hormônio folículo estimulante, hormônio....

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Protocol

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camundongos C57BL/6 são criados em condições específicas isentos de organismos patogénicos. Todos os métodos experimentais animais estejam em conformidade com as diretrizes aprovadas pelo Comitê de ética na Universidade de medicina militar de segundo e cuidado Animal.

1. dissecação de pós-natal desenvolvendo hipófise

  1. realizar anestesia: Coloque gelo picado para induzir hipotermia neonatais ratos (P0 - P5). Para os ratos mais de 5 dias de idade, injete intraperitonealmente uretano 5% (30 µ l/g de peso corporal) para induzir anestesia. Avalie respostas para toe cauda pitadas. Prossiga somente depois que o mouse não está respondend....

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Results

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Este protocolo apresenta um método para dissecar as glândulas pituitárias de desenvolver ratos. Para o mouse neonatal, as regiões de sella inteira que contém a glândula pituitária, os nervos trigêmeo e parte de baixo osso esfenoide foram dissecados para fora da base do crânio. A glândula pituitária pequena e delicada permaneceu intacta durante o processo (figura 1A). Para os ratos mais de 5 dias, as glândulas pituitária anexadas aos nervos trigêmeo laterais f.......

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Discussion

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Para o desenvolvimento de murino pituitaries, tem sido difícil tecnicamente obter as seções coronais adequadas, devido a suas características de pequenas e frágil e características anatômicas únicas6,8. Alguns grupos de pesquisa assim escolhi meados-sagital seções para analisar a morfologia do embrionário e neonatal na hipófise11,12. Embora a meados-sagital da hipófise também é capaz de mostrar anterior, .......

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Disclosures

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Os autores não têm nada para divulgar.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Este trabalho foi apoiado pelas concessões do Nacional Natural Science Foundation da China (31201086, 31470759 e 31671219) e a Fundação de ciência Natural de Shanghai (12ZR1436900).

....

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Ferramentas/Equipamentos
Tesoura cirúrgica-retaJinZhongJ21010pode ser comprada de outros fornecedores
Tesoura fina-esticarJinZhongWA1010pode ser comprada de outros fornecedores
Pinça sem corteJinZhongJD1020pode ser comprada de outros fornecedores
Pinça finaDumontRS-5015para isolamento da agulha pituitária
26G (0,45 mm)HongDapara perfusão transcárdica
Seringa (1 mL)BD300841pode ser comprada de outros fornecedores
Seringa (10 mL)BDpode ser comprada de outros fornecedores Prato
35 mmCorning430165pode ser comprado de outros fornecedores
Papel para limpeza de lentesShuangQuanpode ser adquirido de outros fornecedores Microscópio
anatômicoOLYMPUSSZX-ILLB2-200pode ser adquirido de outros fornecedores
de embutirThermo Fisher22-272423pode ser adquirido de outros fornecedores Sistema
console de embutir lenços de papelKEDEEKD-BM11pode ser adquirido de outros fornecedores
MicrotomeThermo FisherHM315Rpode ser comprado de outros fornecedores
Lâminas Superfrost-PlusThermo Fisher22-037-246pode ser comprado de outros fornecedores
Vidro de coberturaThermo Fisher12-543pode ser comprado de outros fornecedores
Microscópio de fluorescênciaOLYMPUSBH2-RFCApode ser comprado de outros fornecedores
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Reagentes
uretanoBBIEB0448
NaClSigmaS9625para PBS
KClSigmaP9541para PBS
Na2HPO4.12H2OSigma71650para PBS
K2HPO4SigmaP2222para PBS
NaNO2Sigma237213
Injeção de heparina sódicaSPHH31022051para perfusão salina
Paraformaldeído (PFA)SigmaP6148
EtanolSCR10009218
XilenoSCR10023418
ParafinaThermo Fisher8330
HematoxilinaSigmaH9627para H & Coloração E
Eosin YSigmaE4009para H & Hormônio
nacionalanti-crescimento de coelho de coloração E (GH)para imunocoloração
de anticorpoHituitary Program
Anticorpo GFAP de coelho anti-ratoSigmaG9269para imunocoloração
de cabra anti-coelho IgG, HRPJackson111-035-003para imunocoloração
Sistema TSANEN Life Science ProductsNEL700para imunocoloração
Estreptavidina, Alexa Fluor 594Thermo FisherS32356para imunocoloração
Anti-FITC Alexa Fluor 488Thermo FisherA11090para imunocoloração
de de

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Fauquier, T., Lacampagne, A., Travo, P., Bauer, K., Mollard, P. Hidden face of the anterior pituitary. Trends Endocrinol Metab. 13 (7), 304-309 (2002).
  2. Haedo, M. R., et al. Regulation of pituitary function by cytokines. Horm Res. 72 (5), 266-274 (2009).
  3. Zhu, X., Gleiberman, A. S.....

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Pituitary Gland DissectionCoronal Section PreparationMouse Pituitary DevelopmentTissue Embedding TechniqueSellar Region IsolationTrigeminal Nerve OrientationParaffin Wax SectioningHistological Analysis MethodImmunolabeling CompatibilityDeveloping Mouse Pituitaries

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