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Artigo de método

PET e MRI guiada irradiação de um modelo do rato de Glioblastoma usando um Microdifusora

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DOI:

10.3791/56601

28 de dezembro de 2017

Neste artigo

Resumo

No passado, pequena animal irradiação geralmente foi realizada sem a capacidade de direcionar um volume de tumor bem delineados. O objetivo era imitar o tratamento do glioblastoma humano em ratos. Utilizando uma plataforma de irradiação de animais pequenos, realizamos guiada por MRI irradiação conformal 3D com secundário-volume baseados em PET impulsionando em um ajuste pré-clínicos.

Resumo

Há décadas, pesquisa de radiação animal pequeno principalmente foi realizada usando configurações experimentais bastante cruel, aplicando técnicas simples de feixe único sem a capacidade para atingir um volume de tumor específico ou bem delineados. A entrega de radiação foi conseguida usando fontes de radiação fixo ou aceleradores lineares produzindo raios-x megavoltage (MV). Estes dispositivos são incapazes de alcançar precisão sub mm necessário para pequenos animais. Além disso, as altas doses entregue para avaliação saudável de resposta cesto tecido circundante. Para aumentar a tradução entre pequenos estudos animais e humanos, nosso objetivo era imitar o tratamento do glioblastoma humano em um modelo do rato. Para habilitar uma irradiação mais precisa em uma configuração pré-clínicos, recentemente, plataformas de pesquisa guiada por imagem pequeno animal radiação precisão foram desenvolvidas. Semelhante ao planejamento de sistemas humanos, planejando essas micro-irradiators de tratamento baseia-se na tomografia computadorizada (CT). No entanto, baixo contraste de tecidos moles na CT torna muito difícil de localizar alvos em determinados tecidos, como o cérebro. Portanto, incorporando a ressonância magnética (MRI), que tem excelente contraste de tecidos moles em relação ao CT, permitiria uma delimitação mais precisa do alvo para irradiação. Na última década também biológica de imagens técnicas como tomografia por emissão de pósitrons (PET) ganharam interesse para orientação de tratamento de terapia de radiação. PET permite a visualização de , por exemplo, consumo de glicose, transporte de aminoácidos ou hipóxia, presente no tumor. Visando essas peças altamente proliferativas ou rádio-resistente do tumor com uma dose maior poderia dar um benefício de sobrevivência. Esta hipótese levou à introdução de tumor biológico volume (VFC), além do volume de destino bruto convencionais (GTV), volume de destino clínico (CTV) e volume de destino planejado (PTV).

No laboratório de imagem pré-clínicos da Universidade de Ghent, um microdifusora, um pequeno animal de estimação e um animal pequeno 7 T MRI estão disponíveis. O objetivo era incorporar irradiação guiada por MRI e PET-guiada secundário-volume aumentar em um modelo do rato de glioblastoma.

Introdução

Glioma de alto grau é o tumor cerebral maligno mais comum e mais agressivo em adultos com uma sobrevida média de 1 ano apesar de modalidades de tratamento atual. O tratamento padrão inclui máxima ressecção cirúrgica seguida de radioterapia de feixe externo combinado (RT) e temozolomide (TMZ), seguido de manutenção TMZ1,2,3. Desde a introdução do TMZ agora mais de 15 anos atrás, sem melhorias significativas foram feitas no tratamento destes tumores. Portanto, a implementação de novas estratégias terapêuticas é urgente, mas deve primeiro ser investigada em modelos de terapia do....

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Protocolo

O estudo foi aprovado pelo Comitê de ética para experimentação animal (ECD 23/09 e ECD 12/28). Todos os detalhes comerciais podem ser encontrados na Tabela de materiais.

1. F98 GB modelo de células de rato

  1. Cultura das células F98 GB, obtidas ATCC, em monocamadas usando de Dulbecco meio Eagle modificado, soro de vitelo de 10%, 1% penicilina, estreptomicina 1%, 1% L-glutamina e 0,1% anfotericina b e coloque numa incubadora de CO2 (5% de CO2 e 37 ° C).
  2. Inocule as células de glioma no cérebro de ratos de F344 Fischer femininos (170 g de peso corporal).
    1. Use instrumentos estér....

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Resultados

Para imitar a metodologia de tratamento humano para a irradiação do glioblastoma num modelo pré-clínico, a inclusão de radioterapia guiada por MRI foi necessário. Usando o PCTPS e a interface microdifusora, fomos capazes de irradiar F98 glioblastoma em ratos com vários arcos não-coplanares conformados direcionamento da região de contraste aprimorado em T1-weighted MRI17. Rigid-corpo transformações em combinação com uma cama de várias modalidades foram usadas para r.......

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Discussão

Para atingir a precisa irradiação do alvo tumor glioblastoma no cérebro de ratos, orientação de CT on-Board do microdifusora não era suficiente. Tumores cerebrais são dificilmente visíveis devido ao contraste de tecidos moles insuficiente, mesmo se o realce de contraste seria usado. Como tal, MRI precisa ser incluído para permitir a irradiação mais precisa. Usando uma aquisição sequencial do senhor sobre um sistema de T 7 e uma aquisição de TC sobre o microdifusora, de que fomos capazes atingir a dose para a melhoria de .......

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Divulgações

Os autores têm sem conflitos de interesse a divulgar

Agradecimentos

Os autores gostaria de agradecer a Stichting Luka Hemelaere e Soroptimista Internacional para apoiar este trabalho.

....

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
GB RAT modelo
F98 Linha celular de glioblastomaATCCCRL-2397
Fischer F344/Ico crl RatosCharles RiverN/ASistema de
microbombaWorld Precision InstrumentsUMP3Micro 4: https://www.wpiinc.com/products/top-products/make-selection-ump3-ultramicropump/#tabs-1
Quadro estereotáxicoKopf902Modelo 902 Dual Small Animal Quadro estereotáxico
broca diamantVellemanVTHD02https://www.velleman.eu/products/view/?id=370450
Cera ósseaAesculap1029754https://www.aesculapusa.com/products/wound-closure/hemostatic-bone-wax
Seringa de insulina MicrofineBeckton-Dickinson3209241 mL, 29G
Lâmpada infraPhil IRPhilipsHP3616/01
EthilonEthicon662G/662HFS-2, 4-0, 3/8, 19 mm
NomeEmpresa Número de catálogoComentários
Cultura de células
DMEMInvitrogen14040-091
Penicilina-estreptomicinaInvitrogen15140-148
L-glutaminaInvitrogen25030-032
FungizoneInvitrogen15290-018
Tripsina-EDTAInvitrogen25300-062
PBSInvitrogen14040-224
FalconsThermo Scientific178883175 cm2 superfície nunclon, descartáveis para cultura de células com tampas de filtro
Meio de congelamento de célulasSigma-aldrichC6164Meio de congelamento de células-DMSO, filtrado estéril, adequado para cultura celular, endotoxina testada
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Irradiação animal
MicroirradiadorX-strahlSARRP
software para irradiaçãoX-strahlSistemade planejamento de tratamento pré-clínico MuriPlan (PCTPS), versão 2.0.5.
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Possibilidade de sistema PET para animais de pequeno porte
microPETPossibilidade de sistema MolecubesB-Cubehttp://www.molecubes.com/b-cube/
microPET 2TriFoil Imagem, Northridge CAFLEX Triumph IIhttp://www.trifoilimaging.com
Traçadores PETFabricados18F-FDG, 18F-FET, 18F-FAZA, 18F-Colina
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
>Ressonância magnética de pequenos animais
sistema de microRMBruker BiospinPharmascan 70/16https://www.bruker.com/products/mr/preclinical-mri/pharmascan/overview.html Agente de
contraste DotaremGuerbet, Dotarem 0,5 mmol / ml
bobina transmissora de corpo inteiro de ratoRapid BiomedicalV-HLS-070
bobina de superfície cerebral de ratoRapid BiomedicalP-H02LE-070
Unidade de aquecimento à base de águaBruker BiospinMT0125
30 G Agulha para injeção IVBeckton-Dickinson30512830 G
PE 10 tubulação (60 cm/injeção)Instech laboratories, IncBTPE-10BTPE-10, tubulação de polietileno 0,011 x 0,024 pol (0,28 x 60 mm), não estéril, carretel de 30 m (98 pés), Instech laboratories, Inc Plymouth reunião PA EUA- (800) 443-4227- http://www.instechlabs.com
microcapilares de hematócrito não heparinizadosGMBH7493 21esses capilares são preenchidos com água para criar marcadores visíveis na ressonância magnética e na tomografia computadorizada
strong>NomeCompanyNúmero de catálogoComentários
Consumíveis
isoflurano: IsofloZoetisB506Anestesia
cetamina: CetamidorEcupharAnestesia
xilazina: SedaxylCodifar NVde anestesia
TerumoVersatus-W26G
TemozolomidaSigma-aldrichT2577-100MGquimioterapia
DMSOSeringa de insulina Sigma-aldrich276855-100ML
MicrofineBeckton-Dickinson3209241 mL, 29G
NomeEmpresaNúmero de catálogo<strong>Comentários
Análise de imagem
Software PMODPMOD technologies LLCPFUS (ferramenta de fusão)software de quantificação de imagens biomédicas (BIQS), versão 3.405, https://www.pmod.com/web/?portfolio=22-image-processing-pfus
NomeEmpresa<strong>Número de catálogoComentários
Anesthesia-equipment
unidade movebé anestésicaASA LTDASA 0039ASA LTD, 5 valley road, Keighley, BD21 4LZ
Gerador de oxigênioTécnicas veterinárias Int.7F-3BDO-Medipass, Ijmuiden
http://www.criver.com/products-services/basic-research/find-a-model/fischer-344-rat 1 internamente Agente de contraste de ressonância magnética < Cateter

Referências

  1. Stupp, R., et al. Promising survival for patients with newly diagnosed glioblastoma multiforme treated with concomitant radiation plus temozolomide followed by adjuvant temozolomide. J Clin Oncol. 20 (5), 1375-1382 (2002).
  2. Dhermain, F.

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Reimpressões e permissões

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