Artigo de método

Avaliação do esperma de peixe utilizando Software e dispositivos de refrigeração

DOI:

10.3791/56823

⸱

28 de julho de 2018

 , 
1PROiSER R+D S.L., 2Department of Cellular Biology, Functional Biology and Physical Anthropology, University of Valencia

Neste artigo

Resumo

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O presente protocolo descreve um procedimento de avaliação do esperma de peixe usando análise de esperma assistida por computador e dispositivos de refrigeração. O software dá uma rápida, precisa e a análise quantitativa da qualidade do esperma de peixe com base na mobilidade do espermatozoide, que pode ser uma ferramenta útil na aquicultura para melhorar o sucesso da reprodução.

Resumo

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Para avaliação da qualidade de gametas, existem técnicas inovadoras, rápidas e quantitativas que podem fornecer dados úteis para a aquicultura. Sistemas informatizados para a análise de esperma foram desenvolvidos para medir vários parâmetros e dentre as mais comumente medido é a mobilidade do esperma.

Inicialmente, esta tecnologia de computador foi projetada para espécies de mamíferos, embora ele também pode ser usado para análise do esperma de peixe. Os peixes têm características específicas que podem afetar o esperma avaliação tais como um tempo curto de motilidade após a ativação e, em alguns casos, adaptação às temperaturas mais. Assim, é necessário modificar os componentes de software e hardware para fazer análise da motilidade mais eficiente para análise do esperma de peixe. Para espermatozoides de mamíferos, a placa de aquecimento é usada para manter a temperatura ideal de espermatozoides. No entanto, para algumas espécies de peixes, é vantajoso usar uma temperatura mais baixa para prolongar a duração da motilidade, uma vez que os espermatozoides permanecem ativos por menos de 2 min. Portanto, dispositivos de resfriamento são necessários para refrigerar amostras a temperatura constante ao longo do tempo de análise, incluindo no microscópio óptico. Este protocolo descreve a análise da mobilidade do esperma de peixe utilizando software para análise de esperma e resfriamento novos dispositivos para otimizar os resultados.

Introdução

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A eficácia de reprodução depende da qualidade de ambos os gâmetas (óvulos e espermatozoides)1,2. Este é o principal fator que contribui para uma fecundação bem sucedida, permitindo o desenvolvimento da prole viável3,4. Conveniente avaliação da qualidade do material genético é a melhor ferramenta para definir o potencial de fertilidade de um espécime.

Mistura de esperma de vários machos é uma prática comum na produção de muitas espécies aquáticas comercial4. No entanto, a variabilidade de esperma entre....

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Protocolo

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Procedimentos envolvendo assuntos animais tem sido aprovaram (2015/VSC/ervilha/00064) pela direção geral da produção agrícola e pecuária na Universitat Politécnica de València.

1. recolher o esperma maduro enguias europeias em cativeiro

Nota: Uso enguia europeia os machos mantidos em tanques com água do mar e um sistema de recirculação a uma temperatura constante (20 ° C). Tratar com hormônios através de injeção intraperitoneal semanal (gonadotrofina coriônica humana (hCG); 1,5 UI por g de peso corporal de peixes). Aclimatar gradualmente começando com 3 dias na água doce de peixe seguido de substituição com água do....

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Resultados

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Análise do efeito do tempo na mobilidade do esperma

No caso da enguia europeia, a percentagem de espermatozoides estáticos aumentou de 15 s para 120 s após sua ativação (de 24,4% para 40,7%) e a porcentagem de espermatozoides móveis de progressivas diminuição (de 36,9% para 20,9%) (Figura 1A e 1B). Com base na velocidade, células de espermatozoides mostraram uma dim.......

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Discussão

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O software de análise de esperma utilizado neste protocolo tem sido usado por pesquisadores em todo o mundo para diferentes espécies, incluindo peixe. No entanto, os peixes têm algumas características específicas que podem afetar a avaliação do esperma. Espermatozoides de peixes mostrou alta velocidade no momento da ativação que declina rapidamente e leva a um curto período de tempo de motilidade após a ativação. Além disso, a temperatura de reprodução é dependente da espécie e, em alguns casos, pode ser em torno de 4 ° .......

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Divulgações

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Os autores não têm nada para divulgar.

Agradecimentos

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Este projeto recebeu financiamento da Associação de custo (alimentação e agricultura custo ação FA1205: AQUAGAMETE e Horizonte 2020 inovação programa de investigação e da União Europeia sob o Marie Sklodowska-Curie projeto IMPRESS (GA n 642893). Gostaríamos de agradecer a equipe científica de PROiSER, especificamente para o aluno Alberto Vendrell Bernabéu, por sua participação ativa na gravação do video deste projecto.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Gonadotrofina Coriônica HumanaArgent Chemical Laboratorieshormônio hCG
BenzocaínaMerckE1501 SigmaAnestesia
bicarbonato de sódioMerckS5761 Sigma P1 médio
cloreto de sódioMerck1.06406 EMD MilliporeP1 cloreto
de magnésioMerck1374248 USPP1 cloreto
de potássioMerckP3911-500GP1
cloreto de cálcioMerckC7902-500GP1 sal comercial médio
Aqua Medic Solução MeersalzActivator 
Solução BSAMerck05470 SigmaActivator 
Tubos Falcon 15 mlMerckT1943-1000EA
Tubos Falcon suportamMerckR5651-5EA
EppendorfsMerckT9661-1000EA
Micropipet 20 µ lGilsonPIPETMAN®
10 µ lPontas MerckZ683787-1EA
para micropipets 20 µ lPontas MerckZ740030-1000EA
para micropipets 10 µ lMerckZ740028-2000EA
SpermtrackPROiSERCâmara
TruMorphPROiSERMicroscópio TruMorph
UB 200i SériePROiSERMicroscópio
Placa de resfriamentoPROiSERProtótipo
Bloco de resfriamentoPROiSERProtótipo
ISAS v1Software PROiSERISAS
médio médio médio Micropipeta Clássica de contagem

Referências

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  1. Kime, D. E., et al. Use of computer-assisted sperm analysis (CASA) for monitoring the effects of pollution on sperm quality of fish; application to the effects of heavy metals. Aquatic Toxicology. 36, 223-237 (1996).
  2. Kime, D. E., et al. Computer-assisted sperm analy....

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