Este artigo descreve uma metodologia detalhada para obter secções tangenciais achatadas de mamíferos córtices e Visualizar módulos corticais usando histochemical e métodos de imuno-histoquímica.
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Artigo de método
Visualização de módulos corticais em córtices mamíferos achatadas
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Neste artigo
Resumo
Resumo
O córtex do cérebro dos mamíferos é parcellated em subestruturas distintas ou módulos. Módulos corticais normalmente mentem paralelos à folha cortical e podem ser delineados por certos métodos histoquímicos e imuno-histoquímica. Neste estudo, destaca-se um método para isolar o córtex do cérebro de mamíferos e achate-os para obter paralelo de seções para a folha de cortical. Nós ainda mais destaque selecionado histochemical e métodos de imuno-histoquímica para processar estas achatada tangenciais seções para visualizar módulos corticais. No córtex somatossensorial de vários mamíferos, realizamos a citocromo oxidase histoquímica para revelar o corpo mapas ou módulos corticais que representam diferentes partes do corpo do animal. No córtex entorhinal medial, uma área onde as células da grade são geradas, utilizamos métodos de imuno-histoquímica para destacar os módulos de neurônios geneticamente determinados, que estão dispostos em um padrão de grade na planilha de cortical através de várias espécies. No geral, nós fornecemos um quadro para isolar e preparar layer-wise achatado seções corticais e visualize corticais módulos usando histochemical e métodos de imuno-histoquímica em uma ampla variedade de cérebros de mamíferos.
Introdução
Algumas das alterações mais significativas na estrutura do cérebro através de filogenia podem ser observadas no córtex cerebral. Apesar de diferenças significativas, o córtex dos animais segue um padrão comum e pode ser dividido em duas maneiras distintas, por camadas e áreas1. Camadas corticais mentem paralelas à superfície do cérebro e variam em número de 3 camadas em reptiliano córtices2 a 6 camadas em mamíferos córtices1. Áreas corticais, por outro lado, são regiões distintas do córtex, que em grande parte correspondem às funcionalidades distintas, por exemplo, o córtex somatossensori....
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Protocolo
Todos os procedimentos experimentais foram realizados de acordo com as diretrizes alemãs sobre o bem-estar animal, sob a supervisão das comissões de ética locais (LaGeSo). Humano e morcego cérebro dados foram derivados de Naumann et al 5 o procedimento a seguir é realizado em um rato de Wistar adulto macho (estirpe: RJHan:WI).
1. perfusão e extração do cérebro
Nota: A fim de obter um cérebro homogênea fixo e livre de sangue, transcardial perfusão do animal é altamente incentivado, como sangue residual aumenta o sinal de fundo inespecíficos durante coloração. No entanto, também é pos....
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Resultados
Nós obtidos achatadas seções corticais do córtex somatossensorial em uma variedade de cérebros e processadas para citocromo oxidase histoquímica Visualizar os módulos de somatotopic que representam diferentes partes do corpo. Esta abordagem comparativa permite estudar as forças evolutivas que córtex de forma, por exemplo, mostrando a representação altamente conservada de vibrissae mystacial em roedores e lagomorfos como barris21 (Figur.......
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Discussão
Modularidade no córtex cerebral foi identificada usando uma variedade de técnicas. Os primeiros estudos normalmente identificados cortical módulos ou visualizando célula regiões densas, ou uma ausência de fibras1. Utilizaram-se métodos subsequentes a presença de feixes dendríticas24, afferents de uma determinada região25, ou enriquecimento de neurotransmissores26. Aqui vamos demonstrar duas técnicas, coloração (ii) imuno-histo.......
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Divulgações
Os autores declaram que a pesquisa foi realizada na ausência de quaisquer relações comerciais ou financeiras que poderia ser interpretado como um potencial conflito de interesses.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado pela Humboldt-Universität zu Berlin, o centro de Bernstein para Berlim de neurociência computacional, o centro alemão para doenças neurodegenerativas (DZNE), o Ministério Federal alemão de educação e pesquisa (BMBF, Förderkennzeichen 01GQ1001A), NeuroCure e a Gottfried Wilhelm Leibniz prêmio da DFG. Agradecemos Shimpei Ishiyama para design gráfico excelente e Juliane Diederichs para assistência técnica excelente.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Coloração de citocromo oxidase | |||
| Citocromo c do coração equino | Sigma-Aldrich | C2506 | |
| 3,3'Diaminobenzidina tetracloridrato hidrato | Sigma-Aldrich | D5637 | |
| D(+)-Sacarose | Carl Roth | 4621.1 | |
| Sulfato de níquel(II) amônio hexahidratado | Sigma-Aldrich | A1827 | |
| HEPES | Carl Roth | 9105.4 | |
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
| Recuperação de antígeno | |||
| Citrato trissódico di-hidratado | Sigma-Aldrich | S1804 | |
| Ácido cítrico monohidratado | Sigma-Aldrich | C1909 | |
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
| Tampão fosfato/solução salina tamponada com fosfato/prefixo/PFA | |||
| Fosfato de dihidrogenofosfato de potássio | Carl Roth | 3904.2 | |
| Cloreto de sódio | Carl Roth | 9265.1 | |
| Hidrogenofosfato dissódico di-hidratado | Carl Roth | 4984.3 | |
| Paraformaldeído | Carl Roth | 0335.3 | |
| TRITON-X 100 | Carl Roth | 3051.3 | |
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
| Imuno-histoquímica | |||
| Calbindina D-28k purificada do intestino de galinha, Swant RRID monoclonal de camundongo | AB_10000347 Calbindina | ||
| D-28k de calbindina D-28k de rato recombinante Calbindina D-28k, Coelho policlonal | Swant | RRID: Fração de | |
| sem biotina | Roth | 0163.4 | |
| Nome | Empresa | Número de Catálogo | Comentários |
| Meios de montagem ou congelamento | |||
| Fluoromount (imunofluorescência) | Sigma-Aldrich | F4680 | |
| Eukitt ( histoquímica) | Sigma-Aldrich | 03989 | |
| Meio de congelamento de tecidos | Leica Biosystems | NC0696746 | |
| Nome | Empresa< | strong>Número de catálogo< | strong>Comentários |
| Desidratação alcoólica | |||
| Etanol 100% | Carl Roth | 9065.3 | |
| Etanol 96% | Carl Roth | P075.3 | |
| 2-Propanol | Carl Roth | 6752.4 | |
| Substituto de xileno | Fluka | 78475 | |
| < strong > Nome< / strong > | < strong > Empresa < / strong > | < strong > Número de catálogo < / strong > | < strong > Comentários |
| Dispositivos/ferramentas | |||
| Microm HM 650V | Thermo Scientific | ||
| Jung RM2035 | Leica Biosystems | ||
| Dumont #55 Fórceps - Inox | Fine Science Tools | 11255-20 | |
| Dumont #5 Fórceps - Ponta de Biologia Inox | Fine Science Tools | 11252-30 | |
| Pinça #5SF Dumont - Ponta Super Fina Inox | de Ciência Fina | 11252-00 | |
| Tesoura de Osso - 24 cm | Ferramentas de Ciência Fina | 16150-24 | |
| Ciência Fina | Friedman Rongeur | 16000-14 | |
| Tesoura Sem Corte | Ferramentas de Ciência Fina | 14000-18 | |
| Tesoura Cirúrgica - Alças Grandes | Ferramentas de Ciência Fina | 14101-14 | |
| Tesoura Cirúrgica - Ferramentas de | Ciência Fina | 14001-13 | |
| Tesoura de Íris Fina | Ciência Fina | 14094-11 |
Referências
- Brodmann, K. Vergleichende Lokalisationslehre der Grosshirnrinde in ihren Prinzipien dargestellt auf Grund des Zellenbaues. , Barth. (1909).
- Naumann, R. K., et al. The reptilian brain. Curr Biol. 25 (8), R317-R321 (2015).
- Kaas, J. H.
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Reimpressões e permissões
