O objetivo geral deste procedimento é fornecer uma técnica altamente reprodutível para avaliação na vivo do rompimento da barreira hemato - encefálica em modelos do rato de acidente vascular cerebral isquêmico.
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Artigo de método
Uma avaliação In Vivo do rompimento da barreira hemato - encefálica em um modelo do rato de acidente vascular cerebral isquêmico
Neste artigo
Resumo
Resumo
Acidente vascular cerebral isquêmico leva a edema cerebral vasogénico e lesões cerebrais primários posteriores, que é mediada através da destruição da barreira hemato - encefálica (BBB). Ratos com isquemia induzida foram estabelecidos e usados como modelos na vivo para investigar a integridade funcional do BBB. Detecção espectrofotométrica de azul de Evans (EB) em amostras de cérebro com lesão isquêmica poderia fornecer uma justificação confiável para pesquisa e desenvolvimento de novas modalidades terapêuticas. Esse método gera resultados reprodutíveis e é aplicável em qualquer laboratório sem a necessidade de equipamento especial. Aqui, apresentamos uma orientação técnica e visualizada na detecção do extravasamento de EB após indução de acidente vascular cerebral isquêmico em ratos.
Introdução
Edema cerebral de vasogénico devido ao rompimento da barreira hemato - encefálica (BBB) continua a ser uma complicação importante do acidente vascular cerebral isquêmico e um importante determinante da taxa de sobrevivência no curso pacientes1,2. A barreira hemato - encefálica (BBB), que é formada por células endoteliais capilares do cérebro (BCECs) e composta por componentes neurovascular distintas (por exemplo, apertado junções entre células neuronais3, pericitos, Ralevic e BCECs), fornece uma especializados e dinâmica interface entre o sistema nervoso central (SNC) e a circu....
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Protocolo
Todos os procedimentos foram realizados em conformidade com as diretrizes da Ardabil University of Medical Sciences Research Council, para a realização de estudos com animais (número de identificação ética: ir JARROS. REC.1394.08). neste estudo visualizado, usamos ratos macho adulto Sprague-Dawley (300-350 g) obtidos de pastagem Institute (Teerã, Irã).
1. anestesia e Flowmetry
- Induzir a anestesia usando 4% de isoflurano e mantê-lo com isoflurano (1-1,5%) em uma mistura de óxido nitroso (70% v/v) e oxigênio (30% v/v) para a duração da cirurgia.
- Coloque o animal anestesiado na postura inclinada sobre uma manta de aquecimen....
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Resultados
Não houve diferença significativa nos níveis EB no hemisfério direito vs hemisfério esquerdo dos ratos operação (1,06 ± 0,1 µ g/g e 1,1 ± 0,09 µ g/g, respectivamente). Conforme mostrado nas figuras 2A-2B, indução de isquemia transitória (90 min isquemia / reperfusão 24h) causou uma diferença significativa nos níveis de EB (10,41 ± 0,84 µ g/g, p < 0,001) no hemisfério esquerdo de ratos isquêmicos, em comparação com os respectivos Hemisfério nos ratos de operaçã.......
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Discussão
Até agora, vários métodos como autoradiografia e detecção dos traçadores radioativos24,25, microscopia de imunofluorescência26,27, EB extravasamento técnica20, e 23 têm sido utilizados para avaliar o dano da barreira hemato - encefálica. Tintura EB é fortemente podem ligar para a albumina e é usada como um marcador para detectar vazamento vascular.......
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Divulgações
Os autores não têm nada para divulgar.
Agradecimentos
Os autores agradecem ao Chanceler Vice de investigação das Ciências da Universidade de Ardabil médica (Ardabil, Irã) para o apoio financeiro (conceder n: 9607).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Isoflurano | Piramal | AWN 34041100 | 20 - 25 ° C |
| 2,3,5-Cloreto de trifeniltetrazólio (TTC) | Molekula | 31216368 | 4 anos |
| Sprague– Ratos Dawley | Pasture Institute (Teerã, Irã) | 300-350g | |
| Evans Blue | Sigma-Aldrich | 314-13-6 | |
| Ácido tricloroacético | Sigma-Aldrich | 76-03-9 | 2 anos |
| Bupivacaína HCl (0,5%) | Delpharm Tours | abaixo 25 ° C | |
| Bupernorfina | Exir (Irã) | ||
| Carbonato de Sódio | Sigma-Aldrich | 497-19-8 | |
| Cloreto de sódio | Sigma-Aldrich | 7647-14-5 | |
| Di-Hidrogenofosfato de sódio | EMD Millipore | 231-448-7 | |
| Cloreto de potássio | Sigma-Aldrich | 7447-40-7 | |
| Etanol | Sigma-Aldrich | 64-17-5 | |
| silicone(Xantopren) | Heraeus | EN ISO 4823 | |
| Ativador universal mais | Heraeus | ||
| Stoelting | 52100-41 | ||
| Spring Scisors | Stoelting | 52130-00 | |
| Operacional Tesoura | Roboz | 52140-70 | |
| Matriz cerebral | Máquina de anestesia Stoelting | 51390 | |
| para pequenos animais | | Kent Scientific | SS-01 | |
| Power Lab system | AD Instruments | ML880 | |
| Medidor de vazão Doppler a laser | AD Instruments | ML191 | |
| Sistema de alimentação de aquecimento | Harvard Appratus | 72-7560 | |
| Micro braçadeira vascular | FineScience Tools | 18055-03 | |
| Fio de sutura de seda 5-0 | Ethicon | 682G | |
| Fio de sutura Ethilon 4-0 | Ethicon | EH6740G |
Referências
- Jin, G., et al. Protecting against cerebrovascular injury: contributions of 12/15-lipoxygenase to edema formation after transient focal ischemia. Stroke. 39 (9), 2538-2543 (2008).
- Lo, E. H., Dalkara, T., Moskowitz, M. A. Mecha....
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Reimpressões e permissões
