Um procedimento abrangente para avaliar o desempenho In Vitro da neovascularização de Hemangioblastoma putativo usando o Spheroid brotando do ensaio

Summary

Este trabalho apresenta um procedimento abrangente para avaliar em vitro se vasculogênese clássico existe em hemangioblastomas (HBs) e seu papel na HBs. Os resultados destacam a complexidade do HB-neovascularização e sugerem que esta forma comum de angiogênese é apenas um mecanismo complementar no HB-neovascularização.

Abstract

A inactivação do gene supressor de tumor da von Hippel-Lindau (BVS) desempenha um papel crucial no desenvolvimento da hemangioblastomas (HBs) dentro do sistema nervoso central humano (CNS). No entanto, tanto a origem citológica e o processo evolutivo da HBs (incluindo a neovascularização) permanecem controversas, e antiangiogênese para BVS-HBs, baseados no clássico HB angiogênese, têm produzido resultados decepcionantes em ensaios clínicos. Um grande obstáculo para o sucesso clínico tradução de tratamento anti-vascular é a falta de uma compreensão completa de neovascularização neste tumor vascular. Neste artigo, apresentamos um procedimento abrangente para avaliar em vitro se vasculogênese clássico existe em HBs, bem como seu papel na HBs. Com este procedimento, pesquisadores com precisão podem compreender a complexidade do HB neovascularização e identificar a função desta forma comum de angiogênese em HBs. Estes protocolos podem ser usados para avaliar a terapia anti-vascular mais promissor para os tumores, que tem alto potencial de translação para tratamento de tumores ou para ajudar na otimização do tratamento antiangiogênico para HBs, no futuro, traduções. Os resultados destacam a complexidade da HB neovascularização e sugerem que esta angiogênese formulário comum é apenas um mecanismo complementar em HB neovascularização.

Introduction

Hemangioblastomas (HBs) são tumores vasculares benignos encontrados exclusivamente dentro do sistema nervoso central humano (CNS). Eles desenvolvem em pacientes com doença de von Hippel-Lindau (BVS) ou lesões esporádicas. BVS-HBs são difíceis de curar através de tratamento cirúrgico devido a frequente recorrência e desordem de múltiplas lesões que resultam genética¹. Embora a inactivação do gene supressor de tumor da BVS tem sido considerada a causa de tumorigênese da BVS-HBs, a origem citológica (incluindo a neovascularização) e processo evolutivo de HBs permanecem em grande medida controversa². Portanto, uma melhor com....

Protocol

Esse método foi realizado em conformidade com as directrizes aprovadas e regulamentos da investigação ética Comissão de Huashan Hospital, Universidade de Fudan. Medidas de segurança padrão correspondente foram seguidas em cada etapa. Para uma apresentação esquemática, por favor consulte a Figura 1.

1. celular cultura e construção do plasmídeo

1. Rotineiramente, manter a veia umbilical humana endothelial da pilha (HUVEC) no Dulbecco modificada do suplementado Eagle (DMEM) com 10% de soro fetal bovino (FBS), 100 unidades/mL de penicilina e 100 µ g/mL de estreptomicina em um 5% umidificado incubadora de CO₂ a....

Results

Imagens originais são tomadas pelo microscópio invertido. As imagens típicas do grupo controle e o grupo BVS são mostradas na Figura 2-A1 e Figura 2-A2. O comprimento de germinação do grupo controle é mais curto que a do grupo BVS.

Depois de carregar as imagens, a plataforma on-line fornece resultados de análise diretamente. A saída con.......

Discussion

Recentemente, vários campos de pesquisa da biologia vascular foram estimulados pelo estudo do endotélio angiogênico¹⁵. Neste artigo, nós desenvolvemos um esferoide endotelial brotando técnica como modelo experimental para estudar a formação de vasos que se origina a perda do gene da BVS da função nas células endoteliais manipuladas para identificar moléculas candidato romance do angiogênico cascata. O melhor de nosso conhecimento, este é o primeiro relatório para examinar os efeitos de angiogênico.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
FDCC-HXN180		Fudan IBS	pilha da veia umbilical
s águia modificada' s médio	Gibco	11995040
soro fetal bovino	Gibco
PLKO.1-puro vector	Addgene	#8453
plasmídeo de empacotamento psPAX2	Addgene	#12260
envelope plasmídeo pMD2.G	Addgene	#12259
3D placas de fundo redondo de 96 poços	S-Bio	MS-9096M
matrigel	BD Biosciences	354234
Opti-MEM meio	Gibco	31985-070	meio de soro reduzido
Placa de 15 poços	Ibidi	81501	Bolhas de ar no gel podem ser reduzidas equilibrando o μ – Deslize a angiogênese antes do uso dentro da incubadora durante a noite
suplementos de crescimento de células endoteliais	Sciencell	#1052
Prato de cultura de 10 cm	Corning	Scipu000813
Puromicina	Gibco	A1113802
typsin-EDTA	Gibco	25200056
Sistema Automatizado de Contador de Células	BioTech
	Winmasis		http://mywim.wimasis.com