A preparação e a transplantação de lençóis de células-tronco (ASC) derivado de tecido adiposo para anastomoses Colorretais insuficientemente suturados em um modelo do rato é apresentado. Esta aplicação romance mostra que folhas ASC podem reduzir o vazamento de anastomose colorretal.
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Artigo de método
Transplante de células-tronco derivadas de tecido adiposo folha para reduzir o vazamento após colectomia parcial em um modelo do rato
Neste artigo
Resumo
Resumo
Anastomótica escapamento é uma complicação catastrófica após cirurgia colorectal. Embora os métodos atuais para prevenção de vazamento tem diferentes níveis de eficácia clínica, eles são até agora imperfeitas soluções. Terapia de células-tronco, usando folhas de ASC poderia fornecer uma solução para este problema. ASCs são considerados candidatos mais promissores para a promoção do tecido de cicatrização devido às suas propriedades tróficas e imunomoduladores. Aqui, nós fornecemos métodos para produzir folhas ASC de alta densidade, que são transplantadas para uma anastomose colorretal em um modelo do rato para reduzir o vazamento. ASCs formaram folhas de célula em pratos de cultura thermo-responsivo que poderiam facilmente ser desanexados. No dia do transplante, foi realizada uma colectomia parcial com uma anastomose colorretal 5-sutura. Os animais foram transplantados imediatamente com 1 folha ASC por rato. Folhas ASC aderiram espontaneamente para a anastomose sem qualquer cola, sutura ou qualquer biomaterial. Grupos de animais foram sacrificados 3 a 7 dias no pós-operatório. Em comparação com animais transplantados, a incidência de abscessos anastomótica e escapamento foi maior nos animais controle. Em nosso modelo, o transplante de folhas ASC após anastomose colorretal foi bem sucedida e associado uma menor taxa de fugas.
Introdução
Colectomia parcial com uma anastomose primária é comumente realizada cirurgia que pode ser feita para muitas doenças que afetam o cólon como câncer colorretal, doença de Crohn e diverticulite1,2. A mais temida complicação após anastomose colorretal é fuga anastomótica3. Embora tenham sido identificados vários factores de risco associados a vazamentos anastomótica, soluções para a prevenção de vazamento permanecem unkown4,5.
Tecido adiposo-derivado de células do estroma (ASCs) estão associadas com prop....
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Protocolo
Tecido adiposo abdominal subcutâneo foi obtido de doadores humanos com aprovação do Comité de ética médica (#MEC-2014-092), Erasmus MC University Medical Center, Rotterdam, Holanda. Todos os experimentos com animais foram aprovados pelo Comitê ético da experimentação Animal, Erasmus MC University Medical Center, Rotterdam, Países Baixos (133-14-01).
1. cultura e isolamento de ASCs humana
- Prepare-se 3 mL de meio de isolamento para 1 g de tecido adiposo. Mix baixa glicose Dulbecco está meio modificado águia (LG-DMEM) com 10 g/L bovina albumina de soro (BSA) e colagenase 1 g/L do tipo 1.
- Dissecar o tecido adiposo subcutâneo....
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Resultados
Um fluxograma deste estudo descrevendo tanto cultura folha ASC e o procedimento de ressecção do cólon e anastomose é mostrado na Figura 1. A Figura 2 mostra a morfologia microscópica de folha ASC e a aparência macroscópica da folha ASC durante e após o desprendimento. A Figura 3 mostra os diferentes passos do destacamento de folha ASC e transplante de órgãos. A Figura 4 .......
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Discussão
Escapamento anastomótica é o efeito adverso mais grave após a ressecção do cólon com uma anastomose primária. Técnicas ideais para impedir fugas e ruptura anastomótica ainda estão faltando. Aplicação local de uma matriz de biomateriais tem sido conduzida, com resultados variados25,26,27. O objetivo das terapias com células é facilitar o reparo do tecido por substituição de tecido ou a estimulação da cicatrização local através de.......
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Divulgações
Os autores declaram que a pesquisa foi realizada na ausência de qualquer relação comercial ou financeira que poderia ser interpretada como um potencial conflito de interesses.
Agradecimentos
Os autores agradecem ao Prof. Dr. S.E.R. Hovius, Dr. M.A.M. Mureau e todos os cirurgiões do departamento de cirurgia plástica para a coleção de tecido adiposo subcutâneo. P. Sukho é suportado por uma concessão do programa The Netherlands Fellowship (NFP-12/435), durante a realização do estudo. Y.M. Bastiaansen-Jenniskens é suportado por doações da Fundação holandesa de artrite (LP11).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| LG DMEM | Gibco, Life technologies | 22320022 | isolamento e cultura ASC |
| colagenase tipo I | Gibco, Life technologies | 17100-01 | ASC Isolamento |
| soro bovino Albumina | Sigma-Aldrich | A9418 | ASC Isolamento |
| Soro bovino fetal | Gibco, Life technologies | 10270-106 | FBS, isolamento ASC e cultura |
| 3% acético ácido com azul de metileno | Stemcell Technologies | 7060 | ASC Isolamento |
| Gentamicina | Gibco, Life technologies | 15750-037 | Isolamento e cultura ASC |
| Ancotericina B | Gibco, Life technologies | 15290-018 | Isolamento ASC e cultura |
| Shaker (Gallenkamp Environmental Shaker Modelo 10X 400) | Akribis Scientific | F240 | ASC Isolamento |
| Centrífuga | Hettichlab | Rotina380 | ASC isolamento e cultura |
| Tampão fosfato salino | Gibco, Life technologies | 14190-094 | PBS, ASC isolamento e cultura |
| Ácido ascórbico-2-fosfato | Sigma-Aldrich | A8960 | ASC isolamento e cultura |
| Fator de crescimento de fibroblastos recombinantes humanos 2 | AbD Serotec | AF-100-15 | FGF2, isolamento e cultura ASC |
| Tripsina EDTA | Gibco, Life technologies | 25200-056 | Cultura ASC |
| Dimetilsulfóxido | Sigma-Aldrich | D2650-5x | DMSO, ASC congelamento |
| Placas de cultura Termo-responsivas | Nunc Thermo scientific | 174904 | ASC preparação de folhas |
| Seda trançada não absorvível 4/0 | B Cirurgia | de 21151042 | |
| Monofilamento não absorvível poliamida 8/0 | B Braun | G1118170 | cirurgia |
| Ácido poliglicólico trançado absorvível 5/0 | B Braun | C1048207 | cirurgia |
Referências
- Kawahara, H., et al. Single-incision laparoscopic right colectomy for recurrent Crohn's disease. Hepatogastroenterology. 57 (102-103), 1170-1172 (2010).
- Saia, M., Buja, A., Mantoan, D., Agresta, F., Baldo, V. Colon Cancer Surger....
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Reimpressões e permissões
