Artigo de método

Hepatectomy parcial de Lobular: Um modelo cirúrgico para regeneração hepática morfológica

DOI:

10.3791/57302

⸱

31 de maio de 2018

 ,  , 
1Institute for Stem Cell Biology and Regenerative Medicine, Stanford University School of Medicine, 2Department of Developmental Biology, Stanford University School of Medicine, 3Comprehensive Pneumology Center, Institute of Lung Biology and Disease, Helmholtz Zentrum München, 4German Center for Lung Research (DZL)

Neste artigo

Resumo

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Aqui, apresentamos um novo método para ressecção parcial do lobo esquerdo hepático em camundongos neonatais (dia 0). Este novo protocolo é apropriado para estudar a resposta de lesão no cenário neonatal e lesão hepática aguda.

Resumo

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Regeneração morfológica do órgão após perda de tecido aguda é comum entre vertebrados inferiores, mas é raramente observada em mamíferos vida pós-natal. Regeneração hepática adulta após hepatectomy parcial 70% resulta em hipertrofia do hepatócito com alguns replicação em lóbulos remanescentes com a restauração da atividade metabólica, mas com perda permanente de lóbulo ferido morfologia e arquitetura. Aqui, detalhamos um novo método cirúrgico no recém-nascido que deixa um ambiente fisiológico conducente à regeneração. Este modelo envolve a amputação do ápice do lobo esquerdo e um regime de tratamento conservador subsequentes e não possui a necessidade de ligadura dos vasos sanguíneos do fígado ou lesão química, deixando um ambiente fisiológico onde regeneração pode ocorrer. Estendemos este protocolo para amputações no juvenis ratos (P7-14), durante o qual o fígado lesionado transita de regeneração do órgão para crescimento compensatório por hipertrofia. O protocolo apresentado, breve 30 min fornece uma estrutura para estudar os mecanismos de regeneração, seu declínio idade-associadas em mamíferos e a caracterização dos putativo hepático tronco ou progenitoras.

Introdução

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A capacidade de regenerar um órgão, ou para restaurar a forma e função, foi pensada para ser principalmente perdido ao longo do tempo evolutivo. O potencial regenerativo do fígado dos mamíferos adulto após lesão aguda de química ou física foi encontrado para envolver a mobilização de todos os hepatócitos restantes, resultando em ondas de hipertrofia e algumas rodadas de divisão celular, resultando em um funcional, mas arquitetonicamente diferente órgão1,2,3,4,5. Recentemente, estudos começaram a caracteriza....

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Protocolo

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Todos os animais foram realizados experimentos em estrita conformidade com as directrizes estabelecidas pela Associação de avaliação e acreditação do laboratório Animal conta internacional (AAALAC) e da Universidade de Stanford painel administrativo em animais de laboratório Cuidados (APLAC), (número de protocolo #10266) e nos Estados Unidos, ou o Europeu Animal Welfare Act, Directiva 2010/63/UE. O protocolo foi aprovado pelo Comité de ética de experimentos Animal do governo da Baviera, Alemanha e recebeu a permissão não: 55.2-1-54-2532-150-2015.

1. preparação animal

  1. Prepare uma gaiola vazia com roupa de cama adequada sobre uma al....

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Resultados

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Figura 1A detalha um cronograma geral da hepatectomy lobular parcial neonatal (esquemática na figura 1B) e a duração prevista do tempo de espera até a regeneração é observada. Regeneração sutil do lobo esquerdo pode ser observada 7-14 dias pós-cirurgia. Regeneração total observou-se muitas vezes após 56 dias pós cirurgia. Os ratos devem não mostra sinais de anormalidade fisiológica após a cirurgia.

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Discussão

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Lesão hepática aguda tem sido tradicionalmente estudado usando química (paracetamol, etanol, tetracloreto de carbono), ou modelos cirúrgicos (70% hepatectomy parcial). A resposta regenerativa após hepatectomy parcial 70% tem sido caracterizada a participação global hepatócito hipertrofia e várias rodadas de divisão celular4,5. Para parar a hemorragia, no entanto, este modelo é limitado, como os principais vasos devem ser ligados, deixando um ambiente anormal para.......

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Divulgações

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Os autores têm sem divulgações.

Agradecimentos

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Agradecemos Chu P. para a realização de H & E e histologia; e C. Wang e r. McCarty para debates úteis. Pesquisa foi apoiada através de financiamento da Virgínia e D. K. Ludwig fundos para pesquisa do câncer; Nacional coração, pulmão e Instituto de sangue (R01HL058770 e U01HL099999); e o Instituto de Califórnia a medicina regenerativa (RC1 00354) subvenções I.W. Y.R. foi apoiado pelo humano Frontier Science programa carreira desenvolvimento Award (CDA00017), Fundação alemã de pesquisa (RI 2787/1), o Instituto de células-tronco de Siebel e o Thomas e Stacey Siebel Foundation (GHBJI-1119368-104). JMT foi apoiado pelo NIH (T32GM007365), o Prêmio Nacional de serviço de pes....

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Animais
Mãe com ninhada de filhotes recém-nascidos do dia 0 (qualquer cepa)
Mãe de aluguel e ninhada de aluguel (opcional)
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Reagentes padrão
Soro tamponada com fosfato (PBS)
Providina-iodo ou solução
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Equipamento Cirúrgico
Microscópio de dissecaçãoZeissZEMSDV4L MFR # 435421-9901-000
Micro tesoura reta da mola de 3mmVannas72932-01
fórceps 5SFDumont11252-00
fórceps reta de KellyGrainger17-050G
Almofada de aquecimentoSunbeam000771-810-000
IsofluranoAbbott Labs0044-5260-05
Sistema de anestesia para roedoresKent Scientific1205S
Gaze, 10.16 x 10.16cmFisher Scientific13-761-52
NomeEmpresaNúmero do catálogoComentários
Equipamento padrão
tubo de microcentrífuga de 1,5mlSuturasEppendorf 22363204
6-0EthiconMCP489G
Fisher ScientificS35839
Pipet-Aid, Simples, 110VDrummond4-000-110
Balanças Analíticas NewClassic ME da Mettler ToledoFisher Scientific01-912-402
Câmara de Indução de Baixo CustoKent ScientificSOMNO-0730
anti-séptica equivalente monocryl Placa de Petri

Referências

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  1. Michalopoulos, G. K., DeFrances, M. C. Liver Regeneration. Science. 276 (80), 60-66 (1997).
  2. Ponfick, V. A. Surgery of the Liver. Lancet. 1, 881(1890).
  3. Higgins, G., Anderson, R. M. Experimental Pathology of the liver. Restoration of the liver of the white rat following partial surgical removal. Arch. Pathol. 12, 186-202 (1931).
  4. Miyaoka, Y., et al.

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