Neste trabalho, descrevemos um bioensaio agudo, crônico e várias gerações para estudar os efeitos dos estressores único e combinadas sobre o turquesa killies Nothobranchius furzeri. Este protocolo é projetado para estudar traços de história de vida (mortalidade, crescimento, fecundidade, peso) e crítico máximo térmico.
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Artigo de método
Protocolo para aguda e crônica de ensaios toxicológicos do turquesa Killifish Nothobranchius furzeri
Neste artigo
Resumo
Resumo
O Nothobranchius furzeri killies é um organismo modelo emergente no campo da ecotoxicologia e demonstrou-se sua aplicabilidade em ensaios de ecotoxicidade aguda e crônica. Em geral, a sensibilidade da espécie de compostos tóxicos está no intervalo com, ou superior, de outras espécies de modelo.
Este trabalho descreve os protocolos para os bioensaios agudos, crônicos e várias gerações dos efeitos combinados e único estressor na furzeri s.. Devido ao seu tempo de maturação curto e o ciclo de vida, este modelo de vertebrados permite o estudo de pontos de extremidade como tempo de maturação e fecundidade no prazo de quatro meses. Ensaios de exposição de ciclo de vida completo transgeracional podem ser executados em menos de 8 meses. Desde que esta espécie produz ovos que são resistentes à seca e permanecem viável durante anos, a cultura no local das espécies não é necessária, mas os indivíduos podem ser recrutados quando necessário. Os protocolos destinam-se a medida traços de história de vida (mortalidade, crescimento, fecundidade, peso) e crítico máximo térmico.
Introdução
Perfis de sensibilidade de uma matriz de espécies tóxicas para estrategicamente selecionadas foram descritos1 para a legislação europeia chegar (registo, avaliação, autorização e restrição de produtos químicos). Testes de toxicidade aguda ou a curto prazo foram usados principalmente para esta finalidade como eles dão uma indicação rápida de sensibilidade da espécie. No entanto, em seu ambiente natural, os organismos são expostos por períodos muito mais longos e ciclos de vida completo ou até mesmo várias gerações podem ser afetada2. Além disso, organismos em ambientes poluídos normalmente estão expostos a mais de um fato....
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Protocolo
Todos os métodos descritos aqui foram aprovados pelo Comitê de ética da Kortenberg.
1. incubação e manutenção geral de furzeri s.
- Preparar peixe médio (pH 7), a uma temperatura de 14 ° C e adicionar água purificada do tipo II, com adicionado sais padronizadas, com uma condutividade de 600 µS/cm (24 ° C).
- Selecione a linha de laboratório GRZ (Gona-Rhe-Zhou) que foram armazenados sob condições padronizadas13ovos. Selecione os ovos na fase DIII (ou seja, prontos para eclodir), reconhecíveis pela presença de olhos de ouro9 e suavemente transferi-los com um mac....
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Resultados
Os resultados da exposição aguda do furzeri s. para diferentes concentrações de cobre, calculado como em 2.5.2, mostrar relações cleardose-resposta (Figura 1). Há um aumento da mortalidade, com o aumento da concentração tóxica. Valores de LC50 diminuem ao longo do tempo, significando que, com a diminuição de concentrações, mais o tempo passa antes 50% do Replica morrer. Para resultados detalhados sobre a exposição aguda e crônica dos s.......
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Discussão
Este trabalho descreve um bioensaio novo usando Nothobranchius furzeri, um organismo modelo emergente, para estudar o indivíduo e combinados a longo prazo efeitos de substâncias tóxicas e outros estressores. Os protocolos apresentados foram aplicados com êxito para medir a sensibilidade da espécie para uma matriz de substâncias tóxicas (cobre, cádmio, 3,4-dicloroanilina e Clorpirifós). Devido ao seu ciclo de vida rápido, este modelo de vertebrados permite a avaliação da subletais e transgeracional efeitos no pra.......
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Divulgações
Os autores não têm nada para divulgar.
Agradecimentos
Estamos gratos ao grupo esfera do UAntwerpen e o departamento de proteção de cultivos da UGT para análise de amostras de água. Suporte durante esse projeto foi fornecido pelo centro de excelência ' Eco e dinâmica sócio-evolutiva (PF/10/007) do fundo de investigação KU Leuven. AFG (11Q0516N) e ESJT (FWO-SB151323) foram financiados como doutorado e TP (12F0716N) como companheiro de pós-doutorado pela FWO Flandres (Fonds Wetenschappelijk Onderzoek).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| água purificada Tipo 1 (mili Q) | Millipore | ||
| Sea Salt | Instant Ocean | ||
| 2L tanque de plástico | SAVIC | Sempre separe o material para controle e tratamentos de toxicidade | |
| Tanque de plástico 1L (desova) | Avamoplast | Sempre separe o material para redes de controle e tratamentos | |
| de | Aqua bilzen | Sempre separe o material para tratamentos de controle e toxicidade | |
| Frascos de vidro de 2L | Sepac-Flacover | Sempre separe o material para tratamentos de controle e toxicidade | |
| Frascos de vidro de 0,5L | Sepac-Flacover | Sempre separe o material para tratamentos de controle e toxicidade | |
| Ovos de Artemia | Ocean Nutrition | ||
| chironomus | Ocean Nutrition | congelado | |
| placas de tricaine | Sigma aldrich | ||
| petri | VWR | ||
| Parafilm | VWR | ||
| pinças | MLS | ||
| FST | |||
| 500 µ peneira de malha m | / | ||
| microcentrífuga de fabricação própria (2ml) | MARCA | Para armazenar peixes em | |
| frascos de vidro | Sigma aldrich | Para análise de água | |
| barco de pesagem | MLS | ||
| Jiffy 7c pellets | Jiffy | ||
| banho-maria | Gilac | para nitrogênio líquido Ctmax | |
| Termômetro digital Air liquide | |||
| Testo AG | testo 926 | ||
| HETO aquecedor térmico | Anker Schmitt | ||
| balança calibrada | Mettler-Toledo AG | ||
| câmera | / | ||
| plataforma para câmera | / | ||
| kit multiparâmetro | HACH | ||
| Congelador (-80° C) | de temperatura ultrabaixa Panasonic | ||
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
| Fysio | |||
| 0.1 M TRIS– HCl, pH 8,5, 15% polivinilpirrolidona, 153% µ M MgSO4 e 0,2% Triton X-100 | |||
| clorofórmio: metanol | Sigma Aldrich | ||
| amiloglucosidase | Sigma Aldrich | A7420 | |
| reagente de ensaio de glicose | Sigma Aldrich | G3293 | |
| Biorad corante proteico | VWR | ||
| placa de microtitulação de 96 poços | Greiner Bio-one | ||
| 384 | Greiner Bio-one | ||
| de 2 ml | Fiers | Para análise de gordura | |
| Tubos eppendorf de 2,5 ml Homogeneizador | VWR | ||
| Ultra-turrax TP 18/10 | |||
| Aquecedor TECAN | |||
| tubos de vidro | Centrífuga Hach COD REACTOR | ||
| Eppendorf Centrifuge 5415 R | |||
| Incubadora | Bumako |
Referências
- European-Chemicals-Bureau. TAPIR Three point three-A Project for the Information Requirements of REACH. Final Report-2 August 2005. Scoping study on the development of a Technical Guidance Document on information requirements on intrinsic properties of substances (RIP 3.3-1). , (2005).
- Philippe, C., et al.
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Reimpressões e permissões
