Entrega de drogas local para as glândulas submandibulares é de interesse em biologia de glândula salivar de entendimento e para o desenvolvimento de novas terapêuticas. Apresentamos um protocolo de injeção retroductal atualizadas e detalhadas, destinado a melhorar a precisão de entrega e reprodutibilidade experimental. O aplicativo aqui apresentado é a entrega de nanopartículas poliméricas.
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Artigo de método
Injeção de Retroductal de nanopartículas para a glândula Submandibular murino
Neste artigo
Resumo
Resumo
Dois objetivos comuns das glândulas salivares terapêutica são prevenção e cura da disfunção do tecido seguindo ou auto-imune ou radiação. Entregando localmente compostos bioativos para as glândulas salivares, maiores concentrações de tecido podem ser alcançadas com segurança contra administração sistémica. Além disso, fora o tecido-alvo os efeitos da acumulação extra glandular de material podem ser drasticamente reduzidos. A este respeito, injeção de retroductal é um método amplamente usado para investigar a biologia das glândulas salivares e a fisiopatologia. Retroductal administração de fatores de crescimento, as células primárias, vetores adenovírus e drogas pequena molécula mostrou para apoiar a função da glândula no cenário do ferimento. Nós anteriormente demonstraram a eficácia de uma estratégia de siRNA nanoparticle retroductally injetada para manter a função da glândula após irradiação. Aqui, um método altamente eficaz e reprodutível para administrar nanomateriais para a glândula submandibular murino através do ducto de Wharton é Detalhado (Figura 1). Descrevemos a acessar a cavidade oral e descrevem as etapas necessárias ao duto de cannulate da Wharton, com novas observações servindo como verificações de qualidade durante todo o procedimento.
Introdução
Disfunção da glândula salivar tem várias etiologias, incluindo a síndrome de Sjögren, uma auto-imune mediada por perda de tecido secretor funcional e radiação induzida hipossalivação (RIH), uma comum sequelas de cabeça e pescoço câncer radioterapia1. Perda da função salivar devido qualquer condição predispõe indivíduos a infecção oral e sistêmica, cárie dentária, disfunção digestiva e deglutição, Imparidade de discurso e depressão1,2,3. Como resultado, qualidade de vida significativamente sofre, com intervenções limitadas a paliação dos sintomas ao inv....
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Protocolo
Todos na vivo os procedimentos descritos abaixo foram aprovados pela Comissão Universidade recursos animais na Universidade de Rochester, Rochester, NY.
1. preparação
- Usando o tubo de cateter intracraniano 32G com inserir fio, corte 3 cm do tubo para formar uma ponta chanfrada, aproximadamente 45° ao eixo longo. Confirme que o fio é mais do que o tubo de pelo menos 1 cm.
- Carrega 50 µ l de solução de nanopartículas PSMA (Figura 1), ou outro material de injeção, em uma seringa de Hamilton. Para reduzir a probabilidade de barotrauma durante a injeção, fixe o tubo do cateter, com o esti....
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Resultados
Injeção de Retroductal pode ser usada para administrar o NPs para a SMG murino (Figura 1). Aqui, nós entregamos a 50 µ g PSMA NPs rotulado com vermelho Texas fluoróforo.
Colocação adequada do mouse permite fácil acesso e visualização do assoalho da boca (Fig. 2A-B). As papilas submandibulares são identificadas como duas saliências carnudas debaixo da lí.......
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Discussão
Retroductal injeção é fundamental para a entrega de drogas localizadas à glândula salivar. Essa técnica tem aplicações na triagem de agentes terapêuticos para condições, incluindo a síndrome de Sjogren e RIH9,10,28. Entrega da droga direto para a SMG através da injeção de retroductal fornece uma vantagem chave sobre administração sistémica no seu potencial para reduzir os efeitos fora do alvo, incluindo ativação imune
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Divulgações
Os autores não têm nada para divulgar.
Agradecimentos
Pesquisa reportada nesta publicação foi apoiada pelo Instituto Nacional de dentária e Craniofacial Research (NIDCR) e o National Cancer Institute (NCI) do institutos nacionais da saúde sob prêmio número R56 DE025098, DE027695 UG3 e CA206296 F30. O conteúdo é exclusivamente da responsabilidade dos autores e não representa necessariamente a opinião oficial do institutos nacionais da saúde. Este trabalho também foi apoiado pela NSF DMR 1206219 e a inovação IADR no prêmio de cuidado Oral (2016).
Gostaríamos de agradecer sua ajuda na realização de experimentos IVIS Jayne Gavrity. Gostaríamos de agradecer a Karen Bentley para sua entrada e assist....
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Cloridrato de pilocarpina | Sigma Aldrich | P6503 | Pilocarpina |
| Estudante Vannas Tesoura de mola | Fine Science Tools | 91500-9 | Tesoura de mola para traqueostomia |
| Solução salina estéril | Medline | RDI30296H | Solução salina |
| Dumont # 7 Fórceps | Fine Science Tools | 11274-20 | Fórceps curvo |
| Dumont # 5 Fórceps | Fine Science Tools | 11251-10 | Fórceps Reta |
| Padrão Fórceps | Ferramentas de Belas Ciências | 11000-12 | Fórceps Blunt |
| Tesoura Fina- Carboneto de Tungstênio | Ferramentas de Belas Ciências | 14568-09 | Tesoura de Dissecção |
| Microhematócrito Tubos Capilares Heparinizados | Fisher Scientific | 22362566 | Tubos Capilares |
| Lubrificante Pomada | para os OlhosRefresh | N/A | Refresh Lacri-Lube |
| Goat policlonal anti-Nkcc1 | Santa Cruz Biotech | SC-21545 | Nkcc1 Anticorpo |
| DAPI (4',6-Diamidino-2-Fenilindol, Dicloridrato) | Thermo Fisher Scientific | D1306 | DAPI |
| GraphPad Prism | GraphPad ver6.0 | Software Estatístico | |
| Aplicador com ponta de algodão | Medline | MDS202000 | Aplicador para pomada ocular |
| 0,5 cc Seringa de insulina, 29G x 1/2 " | BD | 7629 | Seringa para injeção intraperitoneal |
Referências
- Miranda-Rius, J., Brunet-Llobet, L., Lahor-Soler, E., Farre, M. Salivary Secretory Disorders, Inducing Drugs, and Clinical Management. International Journal Of Medical Sciences. 12 (10), 811-824 (2015).
- Acauan, M. D., Figueiredo, M. A. Z., Cherubini, K., Gomes, A. P. N., Salum, F. G.
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Reimpressões e permissões
