Dois métodos para Decellularization de tecidos vegetais para aplicações de engenharia de tecidos

Summary

Aqui apresentamos, e contraste dois protocolos usados para decellularize de tecidos vegetais: uma abordagem baseada em detergente e uma abordagem livre de detergente. Ambos os métodos deixam a matriz extracelular dos tecidos da planta utilizada, que pode então ser utilizada como andaimes para aplicações de engenharia de tecidos.

Abstract

Os enxertos autólogos, sintéticos e derivados de animais usados atualmente como andaimes para substituição de tecido têm limitações devido à baixa disponibilidade, pobre biocompatibilidade e custo. Tecidos vegetais têm características favoráveis que as tornam excepcionalmente adequado para usar como andaimes, tais como elevada área superficial, transporte de água excelente e retenção, porosidade interconectada, preexistente redes vasculares e uma vasta gama de mecânica Propriedades. Dois métodos bem sucedidos de decellularization planta para aplicações de engenharia de tecido são descritos aqui. O primeiro método é baseado em banhos de detergente para remover matéria celular, que é semelhante aos métodos estabelecidos anteriormente usados para limpar tecidos de mamíferos. O segundo é um método livre de detergente, adaptado de um protocolo que isola a vasculatura de folha e envolve o uso de uma lixívia aquecida e o banho de sal para limpar as folhas e caules. Ambos os métodos produzem andaimes com propriedades mecânicas comparáveis e baixo impacto metabólico celular, permitindo que o usuário selecione o protocolo que melhor se adapte às sua aplicação pretendida.

Introduction

Engenharia de tecidos surgiu na década de 1980 para criar tecidos vivos substitutos e potencialmente endereço importantes órgãos e tecidos escassez¹. Uma estratégia tem andaimes usados para estimular e orientar o corpo para regenerar tecidos ou órgãos. Embora avançado abordagens de fabricação, tais como impressão 3-d produziram andaimes com propriedades físicas originais, a capacidade de fabricar andaimes com uma variada gama de propriedades físicas e biológicas realizáveis permanece um desafio^{2 , 3}. Além disso, devido à falta de uma rede vascular funcional, estas técnicas têm sido limi....

Protocol

1. decellularization do tecido de planta usando a abordagem baseada em detergente

1. Use o fresco ou congelado F. hispida, amostras de folha. Congele não utilizadas amostras frescas em uma loja para uso futuro (até um ano) e congelador-20 ° C.
   Nota: Use tecido de tronco ou folha de quase qualquer planta desejada. Tempos de armazenagem prolongada podem causar danos aos tecidos.
   1. Determinar o tamanho e a forma de amostras a ser processados com base na utilização do exemplo (ou seja, amostras cortadas em tiras são adequadas para aplicações de testes mecânicas, entretanto, amostras de disco de 8 mm são úteis em aplicaçõ....

Results

Ambos os métodos renderam andaimes que foram adequados para a cultura de células e tecidos, aplicações de engenharia. A Figura 1 mostra o fluxo de trabalho geral do processo de decellularization, usando uma folha intacta para o método baseado em detergente e cortadas amostras (8 mm de diâmetro) para o método livre de detergente. Decellularization bem sucedido dos tecidos Ficus hispida , ambos os métodos a seguir rendeu amostras claras e intactas (

Discussion

Aqui, dois métodos de decellularize de tecidos vegetais são descritos. Os resultados apresentados aqui, juntamente com os resultados de estudos prévios²⁵, sugerem que os protocolos apresentados são prováveis aplicável a um amplo espectro de espécies de plantas e podem ser executadas em ambos os caules e folhas. Estes procedimentos são simples e não requer equipamento especializado, então decellularization de planta pode ser realizada na maioria dos laboratórios. Vale ressaltar que, após a decellul.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Dodecil sulfato de sódio	Sigma Life Science	75746-1KG
Triton X-100	MP Biomedicals, LLC	807426	Surfactante não iônico referenciado em papel. Reagente muito viscoso, pode ajudar a cortar a ponta da pipeta ao retirá-la.
Alvejante concentrado (hipoclorito de sódio a 8,25%)	Clorox	Item #: 31009	Alvejante concentrado padrão.
Bicarbonato de sódio	Acros Organics	217120010	Pode ser substituído por hidróxido de sódio ou carbonato de sódio.
8 mm Biopunch	HealthLink	15111-80	Corta amostras que se encaixam bem em placa de 24 poços
Mesa Belly Dancer-Shake	Stovall Life Sciences	BDRAA115S	Use baixas velocidades para não danificar os tecidos. Pode usar qualquer modelo/marca de mesa vibratória.
Placa quente/agitadora Isotemp	Fisher Scientific		Pode usar qualquer estilo/marca de placa quente/agitada.
Copo	Qualquer		Pode usar qualquer tamanho de copo, desde que caiba em suas amostras e não as superlote.
Hidrocloro Tris	Fisher Scientific	BP153-500
DMEM	Corning	MT50003PC
Quant-iT Picogreen dsDNA ensaio	Life Technologies	P11496	Pode usar qualquer método de quantificação de dsDNA disponível.