Análise quantitativa de Micro-CT de Aortopathy em um modelo do rato de β-aminopropionitrile-induzida de aneurisma da aorta e dissecação

Summary

Este artigo descreve uma metodologia detalhada de usando uma borracha de silicone radiopaco à base de chumbo para perfundir vasculatura murino para quantificação do diâmetro da aorta em um modelo do rato de aneurisma da aorta e dissecação.

Abstract

Dissecção e aneurisma da aorta está associadas com significativa morbi -mortalidade na população e pode ser altamente letais. Enquanto existem modelos animais de doenças da aorta, na vivo imagens da vasculatura tem sido limitada. Nos últimos anos, a tomografia micro-computadorizada (micro-CT) surgiu como uma modalidade preferencial para grandes e pequenos vasos de imagem in vivo e ex vivo. Em conjunto com um método de fundição vascular, com sucesso usamos micro-CT para caracterizar a frequência e a distribuição de patologia da aorta no β-aminopropionitrile-tratada C57/Bl6 ratos. Limitações técnicas deste método incluem variações na qualidade da perfusão introduzida por má preparação de animais, a aplicação de metodologias adequadas para quantificação de tamanho de navio e a não-capacidade de sobrevivência deste procedimento. Este artigo detalha uma metodologia para a perfusão intravascular de uma borracha de silicone radiopaco à base de chumbo para a caracterização quantitativa da aortopathy em um modelo do rato do aneurisma e dissecação. Além de visualizar a patologia da aorta, esse método pode ser usado para examinar outros leitos vasculares na vivo ou camas vascular removidas post-mortem.

Introduction

A incidência da dissecção da aorta é 3 casos por 100.000 por ano¹. Dissecção aórtica e doenças aneurismática conta para mais de 10.000 mortes nos Estados Unidos a cada ano, respondendo por 1-2% de todas as mortes em países ocidentais². Dissecação da aorta é iniciada por uma lágrima na camada da íntima do vaso com a propagação de sangue através das camadas da parede da aorta sob pressões fisiológicas. As pressões de pulso elevada do paciente estão associadas com um aumento da incidência de dissecção e complicações. Tensão de cisalhamento da parede aumentado está associado com a expansão da parede da aorta conduz a uma for....

Protocol

Protocolos para manuseio de animal foram aprovados pelo Comitê de uso da Universidade de Maryland, Baltimore (número de animais protocolo 0116024) e institucionais Cuidado Animal e conduzidos de acordo com as normas internacionais de AAALAC.

1. preparação dos reagentes

1. Heparina
   1. Diluir 250 µ l de 1000 sulfato de heparina U/mL em 50 mL de fosfato tampão salino tornar-se uma concentração final de 5 U/mL.
   2. Aquecer o heparinizado (5 U/mL) tampão fosfato-salino, que irá substituir o sangue na vasculatura num banho de água situado a 37 ° C.
   3. Preparar a bomba de pressão controlada, conectand....

Results

Para avaliar este protocolo, 20 ratos adultos masculinos, de fundo misto como descrito anteriormente,¹⁹ e 20-30 semanas de idade, com ou sem tratamento de BAPN, foram pintados com uma borracha de silicone radiopaco à base de chumbo (veja a tabela de materiais ) usando o protocolo detalhado acima. Eles foram submetidos a micro-CT varredura no dia seguinte (Figura 1 e Figura 2

Discussion

Imagem de micro-CT pode ser usada para fornecer reconstruções altamente detalhadas e tridimensionais de patologia vascular em modelos animais. Através da utilização de meios de contraste aprimorado intravasculares, tecidos moles não-avançado, tais como o lúmen de um vaso sanguíneo, podem ser diferenciados daqueles que estão aumentando. Enquanto o laser Doppler, microangiography, ressonância magnética, angiografia, histologia com microscopia confocal, ou dois fotões pode ser utilizada para avaliar leitos vasculares, eles .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Microfil	Flow Tech, Inc	MV-122	Usamos amarelo, uma cor diferente pode ser encomendada conforme desejado. O kit inclui composto MV, diluente MV e agente de cura MV.
Heparina (1000 U/mL)	Sagent Pharmaceuticals	25021-400-10
Solução salina tamponada com fosfato	Corning	21-031-CV
Isoflurano	Vet One, MWI	502017
3-Aminopropionitrile fumarato sal	Sigma-Aldrich	A3134
Bomba de seringa única	Fisher Scientific	14-831-200
27-gauge agulha de conjunto de veias do couro cabeludo	Exel Int	26709	27G x 3/4", tubo de 12"
Inveon Micro-CT scanner	Siemens Medical Solutions
Osirix MD	Pimxmeo SARL		Versão 8.0.2
Inveon Research Workplace	Siemens Medical Solutions		Versão 4.2
Roedor Chow	Harlan Teklad	2018sx