Um método de preparação de amostra eficiente para melhorar os sinais de íon carboidrato em espectrometria de massa de ionização/dessorção de Matrix-assisted Laser

Summary

Um protocolo para melhorar os sinais de íon de carboidrato em espectrometria de massa MALDI por reformas estruturas cristalinas durante os processos de preparação de amostra é demonstrado.

Abstract

Preparação da amostra é um processo crítico na análise de espectrometria de massa (MS) de hidratos de carbono. Apesar de dessorção/ionização de laser assistida por matriz (MALDI) MS é o método de escolha na análise de hidrato de carbono, reprodutibilidade de dados e sinal pobre do íon de amostras de hidrato de carbono continuam a ser problemas graves. Para análise quantitativa de hidratos de carbono, um protocolo eficaz analítico, oferecendo qualidade superior dos dados é necessário. Este vídeo demonstra os protocolos de preparação de amostra para melhorar a intensidade do sinal e minimizar a variação de dados de carboidratos em MALDI-MS. Após a secagem e cristalização de gotas da amostra, a morfologia do cristal é reformada por metanol antes da análise de espectrometria de massa. A melhoria no sinal de hidrato de carbono é examinada com espectrometria de massa MALDI imagem (IMS). Resultados experimentais mostram que a reforma de cristal ajusta estruturas cristalinas e redistribui os analitos de hidrato de carbono. Em comparação com o método de preparação de gotas secas em convencional MALDI-MS, reforma morfologias de cristal de hidrato de carbono com metanol mostra significativamente melhor intensidade de sinal, distribuição de imagem de íon e estabilidade de dados. Desde os protocolos demonstrados neste documento não implicam mudanças na composição da amostra, eles são geralmente aplicáveis aos vários hidratos de carbono e matrizes.

Introduction

Análise de carboidratos é um assunto importante e desafiador. Carboidratos e seus derivados desempenham importantes funções no vivendo organismos^1,2,3. Estas moléculas têm complicado estruturas e são propensas a se decompor. Muitos deles não podem ser claramente caracterizados devido às dificuldades de separação e deteção. Apesar do laser assistida por matriz (MALDI) de dessorção/ionização espectrometria (MS) foi aplicada a análise de uma ampla gama de biomoléculas, devido à sua sensibilidade e resultados compreensíveis⁴, analisar carboidratos usando M....

Protocol

1. placa pré-condicionamento da amostra

1. Limpeza da placa de amostra
   1. Use luvas de nitrilo para evitar a contaminação da placa da amostra durante a limpeza.
   2. Lave a placa da amostra com 100,0 mL de solução de detergente (1,0 mg/mL).
   3. Lave a placa da amostra com água destilada-deionizada (DDW).
   4. Enxague a superfície da placa de amostra com 30,0 mL de MeOH.
   5. Colocar a placa de amostra em um béquer de 600 mL e preenchimento com DDW até a placa da amostra está totalmente imerso em água.
   6. Coloque o copo em um ultra-som do banho (ver tabela de materiais) e....

Results

Imagens SEM representante de SLe^A misturado com DHB preparado usando DD e métodos de recristalização são mostrados na Figura 1. Uma morfologia típica de DHB como preparado pelo método DD é grandes cristais em forma de agulha na borda e estruturas cristalinas bem no centro dos pontos de amostra. Os comprimentos típicos de tais cristais em forma de agulha são ~ 100 µm. Após a recristalização por MeOH, a amostra tem uma maior área coberta uniformement.......

Discussion

Heterogeneidade da amostra é que um problema crucial no DD MALDI-MS. é o mais usado método de preparação de amostra, mas os cristais resultantes são altamente heterogêneos. Tais exemplos mostram reprodutibilidade pobre sinal de tiro-ao-shot e amostra-para-amostra. Portanto, procurando por "sweet spots" em áreas de amostra durante a aquisição de dados é um procedimento comum em experimentos MALDI. Tais amostras heterogêneas são impróprias para quantificação em análises de rotina.

No estudo atua.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Reagente
Detergente em pó	Alconox	242985
Metanol	Merck	106009
Acetonitrila	Merck	100003
Ácido 2,5-di-hidroxibenzóico (DHB)	Alfa Aesar	A11459
sialil-lewis A (SLeA)	Sigma-Aldrich	S1782
Maltoheptaose	Sigma-Aldrich	M7753
	Mettler Toledo	17005091
Tubo de microcentrífuga	Axygen	MCT-150-C
Equipamento
Milli-Q sistema de purificação de água	Millipore	ZMQS6VFT1
Luvas de nitrilo sem pó	Microflex	SU-690
Copo de 600 mL	Duran	2110648
Limpador ultrassônico	Delta	DC300H
Higrômetro	Wisewind	5330
Medidor de vazão de gás nitrogênio	Dwyer	RMA-6-SSV
Termopares tipo K	Digitron	311-1670
Misturador de vórtice	Scientific Industries	SI-0236
Mini centrífuga	Select BioProducts	Force Mini
Pipeta	Rainin	pipet-lite XLS
Estereomicroscópio	Olympus	SZX16
Câmara de secagem com temperatura controlável	Este espectrômetro
	Bruker Daltonics
MTP 384 placa alvo aço polido BC	Bruker Daltonics 8280781
Flexcontrol Versão 3.4	Bruker Daltonics		Software de controle
Fleximaging Versão 2.1	Bruker Daltonics		Software de imagem
Flexanalysis Versão 3.4	Bruker Daltonics		Software de análise