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Artigo de método

Formação de biofilme oral em diferentes materiais para implantes dentários

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DOI:

10.3791/57756

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24 de junho de 2018

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Neste artigo

Resumo

Aqui, apresentamos um protocolo para avaliar a formação de biofilme oral em titânio e zircônio materiais para pilares de prótese dentária, incluindo a análise de viabilidade de células bacterianas e características morfológicas. Um modelo in situ associado com técnicas de microscopia poderoso é usado para a análise do biofilme oral.

Resumo

Implantes dentários e seus componentes protéticos são propensos a colonização bacteriana e formação de biofilmes. O uso de materiais que fornece baixa adesão microbiana pode reduzir a prevalência e a progressão das doenças peri-implante. Tendo em conta o ambiente oral complexidade e oral biofilme heterogeneidade, microscopia, são necessárias técnicas que pode permitir uma análise de biofilme das superfícies dos dentes e materiais dentários. Este artigo descreve uma série de protocolos implementados para comparar a formação de biofilme oral em titânio e materiais cerâmicos para pilares protéticos, bem como os métodos envolvidos em análises de biofilmes oral a nível morfológico e celular. O modelo in situ para avaliar a formação de biofilme oral em titânio e zircônio materiais para pilares de prótese dentária, conforme descrito neste estudo fornece uma boa conservação de biofilme a 48 h, mostrando assim a adequação metodológica. Microscopia do multiphoton permite a análise de um representante da área do biofilme formado sobre os materiais de teste. Além disso, o uso de fluorophores e o processamento das imagens usando microscopia do multiphoton permite a análise da viabilidade bacteriana em uma população muito heterogénea de microorganismos. A preparação de espécimes biológicos para microscopia eletrônica promove a preservação estrutural do biofilme, imagens com boa resolução e sem artefatos.

Introdução

Biofilmes bacterianos são complexas, funcionalmente e estruturalmente organizaram comunidades microbianas, caracterizam por uma diversidade de espécies microbianas que sintetizam uma matriz extracelular, biologicamente ativo polímero1,2. A aderência bacteriana às superfícies bióticas ou abióticas é precedida por uma formação da película adquirida, composta principalmente de glicoproteínas salivares1,3,4. Fracas físico-químicas interações entre os microrganismos e o pellicle são inicialmente estabelecidas e seguidas po....

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Protocolo

Este estudo foi aprovado pelo Conselho de revisão institucional da escola de Odontologia de Ribeirão Preto, e o participante voluntário assinou o termo de consentimento (processo 2011.1.371.583).

1. biofilme formação in Situ

  1. Seleção dos participantes
    1. Selecionar os pacientes com base nos seguintes critérios de inclusão: um indivíduo saudável, com uma dentição completa e sem sinais clínicos de doenças orais.
    2. Excluir os pacientes com base nos seguintes critérios de exclusão: gravidez, lactação, cárie dentária, doença periodontal ou tratamento com antibióticos nos últimos 3 meses, fumant....

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Resultados

A densidade de colonização do biofilme após 48 h de crescimento em situ foi representada neste estudo pela proporção da área colonizada sobre os discos de titânio e zircônio em relação à área total digitalizada da amostra usando microscopia do multiphoton ( 26.64 mm2). A Figura 2 representa a densidade de colonização bacteriana na superfície dos 3 materiais testados. Uma maior densidade de biofilme foi observada sobre as superfícies do ele.......

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Discussão

O protocolo descrito neste estudo foi desenvolvido para avaliar a formação de biofilme em titânio e zircônio materiais para pilares protéticos, incluindo a análise de viabilidade celular bacteriana e características morfológicas. Para realizar isso, foi desenhado um modelo in situ de formação de biofilmes, constituído por um dispositivo intraoral capaz de acomodar amostras dos materiais teste e mantê-los expostos ao ambiente oral dinâmico por 48 h. O dispositivo foi considerado confortável e fácil de inserir, re.......

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Divulgações

Os autores não têm nada para divulgar.

Agradecimentos

Os autores graças a José Augusto Maulin do laboratório multiusuário de microscopia (Faculdade de medicina de Ribeirão Preto) pela ajuda generosa com o EDS e SEM análises e Hermano Teixeira Machado, por sua generosa assistência técnica na edição de vídeo.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Hydrogum 5Zhermack DentalC302070
Durone IVDentsply17130500002
fio NiCr Morelli55.01.070
JET auto polimerização acrílicaClá ssico
Cera dental Clá ssico
Pote de pressão Essencedental
Lixas 600 grãoNORTONT216
Lixas 1200 grãoNORTONT401
Lixas 2000 grãoNORTONT402
Máquina de polimento metalográficoArotec
Álcool isopropílicoSIGMA-ALDRICHW292907
Adesivo hot meltTECSILPAH M20017
Filmtracer LIVE/DEAD Kit de Viabilidade de BiofilmeInvitrogenL10316
Pontas de Pipeta, 10 µ LKASVIK8-10   
Ponteiras de Pipeta, 1.000 µ LKASVIK8-1000B   
Placa de 24 poços KASVIK12-024
Thermo Scientific150680
Microscópio invertido AxioObserver Laser ZEISS
Chameleon Vision IIObjetivo Coerente
Plano EC-Neofluar 40x/1.30 Óleo Sensores SDD DICZEISS440452-9903-000
- X-Max 20mm²Solução de
SIGMA-ALDRICHG5882
Tampão de cacodilato de sódio SIGMA-ALDRICH97068 
Tetróxido de ósmioSIGMA-ALDRICH201030
Na2HPO4SIGMA-ALDRICHS9638Usado para preparação de solução salina tamponada com fosfato
KH2PO4SIGMA-ALDRICHP9791 
NaClMERK1.06404
KclSIGMA-ALDRICHP9333 
Etanol absoluto para análise EMSUREMERK1.00983
CPD 030 Secador de Ponto CríticoBAL-TEC
JSM-6610 Série Microscópio Eletrônico de VarreduraJEOL
SCD 050 Revestidor de pulverização catódicaBAL-TEC
Prato com Fundo de Vidro glutaraldeído da Oxford Instruments

Referências

  1. Do, T., Devine, D., Marsh, P. D. Oral biofilms: molecular analysis, challenges, and future prospects in dental diagnostics. Clinical, Cosmetic and Investigational Dentistry. 5, 11-19 (2013).
  2. Samaranayake, L., Matsubara, V. H.

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Reimpressões e permissões

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