Explorando o potencial das células-tronco mesenquimais folha sobre o desenvolvimento do Carcinoma hepatocelular na Vivo

Summary

Aqui, apresentamos um protocolo para desenvolver um modelo câncer in vivo usando a tecnologia de célula de folha. Tal modelo poderia ser muito útil para a avaliação da terapêutica antineoplásica.

Abstract

Em vivo modelo animal que imita o câncer humano poderia ter vários aplicativos que oferecem informação clínica significativa. As técnicas atualmente utilizadas para o desenvolvimento de modelos de câncer na vivo tem limitações consideráveis. Portanto, neste estudo, pretendemos implementar tecnologia de folha de célula para desenvolver um modelo de câncer na vivo . Carcinoma hepatocelular (HCC) é desenvolvido com sucesso em ratos nus usando folhas de célula criadas a partir de células de linha celular HCC. Os lençóis de células de câncer são gerados através de adesão intracelular e a formação de uma estrutura estratificada, controlada pela matriz extracelular. Isto permite o transplante de folha do HCC para o fígado e a criação de um modelo animal de tumor-rolamento dentro de um mês. Além disso, o papel das células-tronco mesenquimais (MSC) no desenvolvimento deste modelo de câncer é investigado. Além da folha de linha celular HCC, outro folhas de duas células são criadas: uma folha de células HCC e medula óssea MSCs (BMMSCs) e uma folha de células HCC e cordão umbilical MSCs (UCMSCs). Folhas com uma combinação de células HCC e MSCs também são capazes de produzir um animal de tumor-rolamento. No entanto, a adição de MSCs reduz o tamanho do tumor formado, e esse efeito adverso sobre o desenvolvimento do tumor varia de acordo com fonte do MSCs usados. Isto indica que uma folha de células de determinados subtipos MSC poderia ser utilizada no controle e gerenciamento do tumor.

Introduction

HCC é um câncer primário do fígado que está significativamente associado um mau prognóstico. Anualmente, quase meio milhão novos pacientes são diagnosticados com HCC, representando 85% dos pacientes de câncer de fígado em todo o mundo¹. Hepatocarcinogenesis não é uma doença de forma única; pelo contrário, é uma coleção de doenças que têm diferentes características histopatológicas e variabilidade genética e genômica, além de variados prognóstico resultados¹. Portanto, os principais desafios no desenvolvimento de uma estratégia terapêutica eficaz para HCC são o limitado conhecimento da biologia HCC e a falta de um modelo ....

Protocol

O protocolo segue as diretrizes de cuidados com animais do Comité de ética da Universidade Rei Saud. Procedimentos cirúrgicos, anestésicos e outros medicamentos utilizados em animais são aprovados pelo Comitê de ética da Universidade Rei Saud. Todo o trabalho experimental é executado por pessoal adequadamente treinado.

1. célula folha construção

1. Revestir os pratos de cultura (pratos de cultura responsiva a temperatura de 3,5 cm) com soro bovino fetal não diluído (FBS) e certifique-se de cobrir toda a superfície do prato.
   Nota: Este passo é importante para o destacamento da camada de células, uma vez que suporta o crescimento da....

Results

Tumorigenicidade de lençóis de células transplantadas em ratos:

Um mês após o transplante, todas as folhas de célula transplantado em fígados de ratos desenvolveram tumores (Figura 3). O tamanho médio dos tumores desenvolvidos de HepG2, HepG2/BMMSC e folhas de célula HepG2/UCMSC foram 4,5 cm, 4 cm e 2,5 cm, respectivamente,¹⁰.

Discussion

Uma extensa quantidade de pesquisa é dedicada ao desenvolvimento de um adequada na vivo pré-clínicos modelo animal que se assemelha a cânceres humanos. Atualmente, as principais abordagens usadas para criar modelos animais câncer envolvem engenharia genética e células de transplantação¹¹. Modelos de animais geneticamente modificados são boas ferramentas para a identificação e validação de genes-alvo, bem como compreender os mecanismos moleculares subjacentes a toxicidade induzida por drog.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Reagentes
FBS	Gibco/Invitrogen	10270106
DMEM glicose alta	Sigma	D5671-500ML
	Life Technology	15070063
Solução salina fisiológica estéril	Sigma	S0817-1GA
Linha celular HepG2 humana	ATCC, EUA	HB-8065
Linha celular MSCs de medula óssea humana	PromoCell, EUA	C-12974
MSCs de tecido do cordão umbilical humano	PromoCell, EUA	C-12971
Cetamina 50%	Rompun, Bayer
Xylazine 2%	Rompun	23076-35-9
Alphadine®   solução.	Riyadh Pharma	LBL0816
Descartáveis:
15mL Polipropileno Alta Clareza PP Tubo de Centrífuga	Falcon
placas de cultura UpCell estéreis de 3,5 cm com o papel de filtro (membrana)	Sigma	174904-1CS
100-1000 µ l   Ponteiras de pipeta	Sigma	CLS4868-1000EA
Campo de Procedimento Básico	Thermofisher	PMD5293.0
Equipment  Pipeta
Plus, volume variável	Eppendorf®   Pesquisa®	Z683779-1EA
Incubadora de cultura de tecidos 37 ° C, 5% CO2	Qualquer marca
Armário de segurança biológica	Qualquer marca
Incubadora de cultura de tecidos 20 ° C, 5% CO2	Qualquer marca
Ferramentas cirúrgicas estéreis e ratos nus:
Pinça
Tesoura
bisturi
Sutura de Nylon  5-0	Accutome	AB-3854S	Monofilamento, Lanceta
1 ml Seringas de Tuberculina	Fisher Scientific	14-826-88
Ratos nus	Rio