Este artigo descreve um protocolo detalhado e altamente eficaz para gravações de único sensillum do basiconica de sensilas sobre os palpos de peças bucais de insetos.
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Artigo de método
Único Sensillum gravações para Locust palpo sensilas Basiconica
Neste artigo
Resumo
Resumo
Os palpos das peças bucais locust são considerados órgãos gustativos convencionais que desempenham um papel importante na seleção de alimentos de um gafanhoto, especialmente para a detecção de não-volátil sugestões químicas através de sensilas chaetica (anteriormente denominado terminais sensilas ou crista sensilas). Há crescente evidência de que estes palpos também têm uma função olfativa. Um receptor de odorante (LmigOR2) e uma proteína ligadora de odorante (LmigOBP1) foram localizadas nos neurônios e células de acessório, respectivamente, na basiconica de sensilas dos palpos. Sensillum única gravação (SSR) é usado para gravar as respostas dos neurônios receptores de odorante, que é um método eficaz para ligantes ativos sobre os receptores específicos odorante de triagem. SSR é usado em estudos funcionais de receptores de odorante no sensilas palpo. A estrutura do basiconica de sensilas localizado na cúpula dos palpos difere um pouco da estrutura das pessoas sobre as antenas. Portanto, ao realizar um SSR eliciado odorantes, alguns conselhos específicos podem ser útil para a obtenção de melhores resultados. Neste trabalho, é apresentado um protocolo detalhado e altamente eficaz para um SSR de inseto palpo sensilas basiconica.
Introdução
Animais têm evoluído de uma gama de órgãos chemosensory que detetam sugestões químicas exógenas. Em insetos, os mais importantes órgãos de chemosensory são as antenas e os palpos. Nestes órgãos, diversos tipos de cabelos chemosensory, chamados chemosensory sensilas, são inervados pelos neurônios chemosensory (CSNs) dentro os pelos. CSNs em chemosensory sensilas reconhecem sugestões químicas específicas através de transdução de sinal de estímulos químicos para potenciais eléctricos que posteriormente são transferidos até o sistema nervoso central1,2,3 .
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Protocolo
1. preparação dos instrumentos e inseto
-
Preparando o tungstênio soluções eletrodos e estímulos
- Fixar um novo fio de tungstênio (diâmetro de 0,125 mm, comprimento de 75 mm) em um micromanipulador e apontá-lo em uma solução de nitrito (NaNO2) de sódio 10% (p/v) em uma seringa de 10 V fornecida por uma fonte de alimentação por cerca de 1 min sob um estereomicroscópio (ampliação de 40 X).
- Mergulhe o fio de tungstênio afiada repetidamente em solução 10% NaNO2 , cerca de 4 mm em 5 V em < 1 min (figura 1A).
- Examine o diâmetro da ponta afiada tungstênio frequentemen....
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Resultados
Dois subtipos de sensilas (pb1 e pb2) sobre o palpo maxilar locust são identificados com base em dinâmica de resposta diferente de químicos odorantes (10% 1-nonanol e ácido nonanoico de 10%). Os neurônios no pb1 produzem significativamente mais picos de até 1-nonanol do ácido nonanoico enquanto os neurônios em pb2 são significativamente que menos ativado por 1-nonanol comparado com ácido nonanoico (Figura 4). Hexanal e E-2-Hexenal podem evocar um palpo locust.......
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Discussão
Insetos dependem de palpos para detectar odores de comida, e seus palpos são acreditados para jogar um papel importante na especiação13,27. Os palpos são simples órgãos olfativos e estão recebendo crescente atenção como um atraente modelo de exploração da neuromolecular redes subjacente chemosensation28.
Inseto labellar e palpo SSRs foram realizados com sucesso em Drosophila melanogaster, Anopheles .......
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Divulgações
Os autores não têm nada para divulgar.
Agradecimentos
Este trabalho é apoiado por uma concessão da Fundação Nacional de ciências naturais da China (No.31472037). Qualquer menção de nomes comerciais ou produtos comerciais neste artigo é exclusivamente com o propósito de fornecer informações específicas e não implica uma recomendação.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Fio de tungstênio | ADVENT | W559504 | Usado para fazer o eletrodo e fixar o palp |
| NaNO2 | Sigma-aldrich | 563218-25G | Usado para afiar o fio de tungstênio |
| Fonte de alimentação CA | Syntech | A2-70 | Fornecendo a tensão na afiação do fio de tungstênio |
| Estereoscópio | Motic | SMZ-163 | Usado para observar o afiação de fio de tungstênio |
| Microscópio | Olympus | W-51 | Usado para observar a sensila no palpo maxilar de gafanhotos |
| Controlador Inteligente de Aquisição de Dados | Syntech | IDAC-4 | Exibição na tela em tempo real de todos os sinais antes e durante a gravação |
| Controlador de estímulo | Syntech | CS-55 | Usado para controlar a aplicação de estímulo |
| Eletrônico micromanipulador | C.M.D.T | CFT-8301D | Usado para pequenos movimentos do eletrodo de gravação |
| Micromanipulador | Narishige | MN-151 | Usado para pequenos movimentos do eletrodo de referência |
| Alto-falante | EDIFIER | R101T06 | Conectado com IDAC-4 e fornecendo som para o sinal |
| Base magnética | PDOK | PD-101 | Usado para segurar o eletrodo e o tubo de entrega de estímulos |
| Mesa de isolamento de vibração | TianHe | HAP-100-1208 | Usado para isolar a vibração do equipamento |
| Corrediça de vidro | CITOGLAS | ZBP-407 | Usado para fazer a base para o MPH |
| Blu-tack | Bostik | Blu-tack-45g | Fixação do fio de tungstênio |
| Tubo de Pasteur | YARE | WITEG | Colocação do papel de filtro contendo soluções de estímulo de estímulos |
Referências
- Carey, A. F., Carlson, J. R. Insect olfaction from model systems to disease control. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (32), 12987-12995 (2011).
- Leal, W. S.
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Reimpressões e permissões
