Aqui, apresentamos um protocolo para projetar e fabricar um embrião de zebrafish põr modelo, seguido por um procedimento detalhado sobre a utilização de tal modelo para alto throughput zebrafish embrião põr em uma placa de 96 poços.
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Artigo de método
Aqui, apresentamos um protocolo para projetar e fabricar um embrião de zebrafish põr modelo, seguido por um procedimento detalhado sobre a utilização de tal modelo para alto throughput zebrafish embrião põr em uma placa de 96 poços.
O peixe-zebra é que um organismo reconhecido mundialmente água doce frequentemente usada em biologia do desenvolvimento, toxicologia ambiental e humana doença campos de investigação com ele relacionada. Graças a suas características únicas, incluindo a grande fecundidade, translucidez do embrião, evolução rápida e simultânea, etc., zebrafish embriões são frequentemente utilizados para avaliação de toxicidade em larga escala de produtos químicos e drogas/compostom triagem. Um procedimento de rastreio típico envolve adulto zebrafish desova, seleção de embriões e põr os embriões em placas multi bem. A partir daí, embriões sejam sujeitos a exposição e a toxicidade do produto químico, ou a eficácia dos medicamentos/compostos pode ser avaliada relativamente rápido com base em observações fenotípicas. Entre estes processos, põr de embriões é uma das etapas mais demoradas e trabalhosas que limita o nível de produtividade. Neste protocolo, apresentamos uma inovadora abordagem que faz uso de um modelo arraying 3D-impresso juntamente com vácuo manipulação para acelerar esta etapa trabalhosa. O protocolo neste documento descreve o projeto total do modelo arraying, uma instalação experimental detalhada e procedimento passo a passo, seguido por resultados representativos. Quando implementado, essa abordagem deve provar benéfica em uma variedade de aplicações de pesquisa usando zebrafish embriões como assuntos de teste.
Como um organismo modelo popular, o zebrafish é amplamente utilizado nos campos da medicina e toxicologia1,2,3,4. Em comparação com plataformas em vitro , zebrafish oferecem muito maior complexidade biológica que um ou dois tipos de células não podem oferecer. Além de ser um todo organismo modelo, do zebrafish grande fecundidade, rápido e simultâneo de desenvolvimento embrionário e órgão alta translucidez ter dado este vantagens exclusivas do modelo a ser usado para a toxicidade de grande escala ou drogas/composto5....
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1. projeto e fabricação de embriões um Zebrafish põr modelo
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A Figura 3 mostra um típico modelo de arraying 3D-impresso. Este modelo usa resina fotossensível como matéria-prima e foi feito por uma impressora 3D; uma camada de tinta preta, aplicou-se para fornecer um melhor contraste com a cor dos embriões. A posição de 96 poços (12 por 8) foi projetada para se encaixar com uma padrão placa de 96 poços. Da mesma forma, um modelo de bem 384 (24 por 16) também pode ser projetado e fabricado usando o mesmo método. O lado p.......
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Há duas etapas críticas neste protocolo que exigem muita atenção para uma implementação bem sucedida do modelo 3D-impresso para põr o zebrafish embriões.
O fator mais importante no design do modelo arraying é a armadilha bem. Para garante há apenas um embrião preso em cada poço, um deve prestar atenção para o diâmetro e a profundidade do poço uma armadilha e o diâmetro do furo. O diâmetro recomendado é dentro de 1,5 a 2 vezes o diâmetro de um embrião típico (incluindo o córion). A profundidade.......
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Os autores têm preenchido uma patente sobre o modelo 3D-impresso descrito.
Este trabalho foi financiado pelo programa "Juventude de 1000plan", os fundos de inicialização de Tongji University e NSFC Grant # 21607115 e 21777116 (Lin).
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| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Zebrafish Facility | Shanghai Haisheng Biotech Co., Ltd. | Z-A-S5 | |
| Caixa de acasalamento | Shanghai Haisheng Biotech Co., Ltd. | ||
| Frasco de Lavagem, 500 ml | Sangon Biotech | F505001-0001 | |
| Cloreto de Sódio | Vetec | V900058-500G | |
| Cloreto de Potássio | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd | 10016318 | |
| Cloreto de cálcio | Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd | 20011160 | |
| Bicarbonato de sódio | Vetec | v900182-500G | |
| Hidrato de Azul de Metileno | TCI | M0501 | |
| Ácido clorídrico | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd | 10011008 | |
| Sais Marinhos | Oceano Instantâneo | SS15-10 | |
| Pipetter | Fisherbrand | 13-675M | |
| Gota Controlada Pasteur Pipet | Fisherbrand | 13-678-30 | |
| OLYMPUS | SZ61 | microscópio | |
| Ltd. | LRH-250 | ||
| Impressora 3D | UnionTech | Lite600 | |
| Resina fotossensível | UnionTech | UTR9000 | |
| Bomba de vácuo | Shanghai Yukang Scientific Instrument Co., Ltd. | SHB-IIIA | |
| sela a | de Solarbio | YA0245 | |
| 96 Costar | 3599 | ||
| Multi pipeta de 8 canais 30 - 300 μ l | Eppendorf | 3122000.051 | |
| Espanador de Gás Comprimido | Shanghai Zhantu Chemical Co., Ltd. | ST1005 | |
| DI Água | Thermo | GenPure Pro UV/UF | |
| Forno de Secagem | Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd. | BPG-9106A | |
| Água | Água fora da instalação' s sistema de água | ||
| Água de ovo | diluída 60mg " Oceano instantâneo" sais marinhos e azul de metileno 0,25 mg/L em 1 L de água | ||
| DI Holtfreter» | dissolver 7,0 g de cloreto de sódio (NaCl), 0,4 g de bicarbonato de sódio (NaHCO3), 0,1 g de cloreto de potássio (KCl), 0,235 g de cloreto de cálcio (CaCl2,2H2O) em 1,9 L de água DI. Ajuste o pH para 7 usando HCl e ajuste o volume para 2 L usando água Di |
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