Aqui nós apresentamos um protocolo de amostragem de sangue de cauda-dica para coleta de amostra frequente em camundongos desenfreados. Este método é útil para avaliar os padrões de secreção pulsátil de hormônio luteinizante e pode ser adaptado para a análise de outros fatores circulantes.
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Artigo de método
Frequente de amostra de sangue da cauda-ponta em camundongos para a avaliação da secreção pulsátil de hormônio luteinizante
Neste artigo
Resumo
Resumo
Em muitos sistemas endócrino, hormônios ou fatores circulantes não são liberados continuamente, mas são secretados como um pulso discreto em resposta a um fator liberador. Medidas de amostragem de ponto único são inadequadas para compreender plenamente o significado biológico do padrão secretora de hormônios pulsátil ou sob condições fisiológicas normais, ou nas condições de desregulação. Hormônio luteinizante (LH) é sintetizado pelas células gonadotróficas da hipófise anterior e secretado em um padrão pulsátil que requer coleta frequente de amostras de sangue para avaliação do pulso. Isto não foi possível, em camundongos, até recentemente, devido ao desenvolvimento de um ensaio de LH de alta sensibilidade e frequente de avanço em uma técnica para coleta de amostra de baixo volume, inicialmente descrita por Steyn e colegas. 1 aqui descrevemos um protocolo para a coleta de amostra de sangue periférico frequentes de ratos com aclimatação de manipulação suficiente para detectar a secreção pulsátil de LH. O atual protocolo detalha um período de aclimatação expandida que permite a avaliação de robustos e contínuas de pulsos de LH durante várias horas. Neste protocolo, a ponta da cauda é cortada e o sangue é colhido da cauda com uma pipeta à mão. Para avaliação do LH pulsátil em ratos gonadectomized, seriais amostras são coletadas a cada 5-6 min de 90-180 min. importante, a coleta de sangue e medição de robustas pulsos de LH podem ser realizados em ratos acordados, livremente comportamento, dados a adequada manipulação aclimatação e esforço para minimizar os estressores ambientais. Aclimatação suficiente pode ser alcançada dentro de 4-5 semanas antes da coleta de sangue. Este protocolo destaca avanços na metodologia para garantir a coleta de amostras de sangue total para a avaliação dos padrões de secreção de LH pulsátil durante várias horas no mouse, um poderoso modelo animal para pesquisa neuroendócrino.
Introdução
Função gonadal em mamíferos é dependente da secreção de gonadotrofinas, hormônio luteinizante (LH) e folículo estimulante hormônio, da glândula pituitária. As gonadotrofinas são secretadas em um padrão pulsátil ou aumento em resposta à secreção hipotalâmica do hormônio liberador de gonadotrofinas (GnRH). A síntese e secreção de LH e FSH são regulados através de ação endócrina, parácrina e autócrina de uma variedade de moléculas incluindo GnRH hipotalâmico, hormônios esteroides gonadais e o sistema de União-inibina-folistatina, bem como uma miríade de condições fisiológicas, incluindo equilíbrio de energia e estresse. 2
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Protocolo
O método descrito aqui é de acordo com o National institutos de saúde Cuidado Animal e diretrizes de uso e foram autorizados pelo Comitê de uso da Universidade da Califórnia, San Diego e institucional Cuidado Animal.
1. a aclimatação para manipulação
- Procedimento de tratamento
- Coloque gaiolas de rato na biossegurança do armário. Retire o primeiro rato da gaiola e coloque sobre uma superfície apropriada (por exemplo, uma tampa de gaiola limpa) dentro da armário de biossegurança.
- Contenha suavemente o mouse na superfície de trabalho, mantendo a base da cauda com o indicador e o polegar de uma mão. Então, ....
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Resultados
Padrões de pulso LH representativos de 4 ratos são mostrados na Figura 1 (dados reimpressos de Yang et al., 2017). LH foi medida em amostras de sangue frequentes para determinar a resposta a um desafio de estresse psicossocial agudo. Adultos camundongos C57/Bl6 fêmeas foram ovariectomia e manipulados conforme detalhado neste protocolo para coleta de sangue frequente. Foram coletadas amostras de sangue para o primeiro 90 min em todos os animais para e.......
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Discussão
Aqui descrevemos um protocolo para coleta de sangue frequentes toda a cauda-dica de amostras de sangue para avaliação da secreção pulsátil de LH em camundongos. Este protocolo permite a coleta de amostras para a deteção das alterações agudas na secreção pulsátil de LH após a exposição ao estresse psicossocial e é well-suited para avaliação dos pulsos de LH sob outras manipulações agudas ou crônicas.
Um componente crítico do presente protocolo para alcançar perfis confiáveis e robustos, de puls.......
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Divulgações
Os autores não têm nada para divulgar.
Agradecimentos
Os autores Obrigado DRS Jennifer Yang e Alexander (Sasha) Kauffman para assistência técnica com esta técnica, bem como numerosas discussões úteis e críticas. Soro hormônio ensaios foram realizados por Yang et al., 2017 do The University of Virginia centro de pesquisas em reprodução ligante ensaio e núcleo de análise, apoiado por Eunice Kennedy Shriver FORMULADORES/NIH (NCTRI) Grant P50-HD28934.
Fontes de apoio à pesquisa: R01 FORMULADORES 86100 (KMB), RBM foi apoiado por T32 FORMULADORES 007203.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Gabinete de biosegurança | Lab Products Inc | L / F-B | |
| Albumina de soro bovino | Sigma | A5403 | |
| Tween-20 | Sigma | P2287 | |
| KCl | Sigma | P9333 | |
| NaCl | Sigma | S7653 | |
| Na2HPO4 (anidro) | Sigma | S7907 | |
| KH2PO4 | Sigma | P5655 | |
| Água ultrapura | Millipore | Água purificada e filtrada | |
| Dispositivo de contenção de roedores Broome | Apparatus | 52-0460 | Não é necessário para coleta de sangue, mas foi usado na coleta de dados representativos. |
| DynPeak | n/a | n/a | http://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0039001 |
Referências
- Steyn, F. J., et al. Development of a methodology for and assessment of pulsatile luteinizing hormone secretion in juvenile and adult male mice. Endocrinology. 154 (12), 4939-4945 (2013).
- McArdle, C. A., Roberson, M. S. Knobil and Neill's Physio....
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Reimpressões e permissões
