Summary
निकटता जला चोटों के मोड की नकल करने के लिए पशु मॉडलों में नैदानिक अवलोकन और अध्ययन के बीच एक साथ खेलना आवश्यक है । इस अध्ययन में, गंभीर जला चोट के एक सूअर मॉडल शारीरिक और pathophysiological सेटिंग्स में एक प्रयोगात्मक ड्रेसिंग का आकलन करने के लिए स्थापित किया गया था ।
Abstract
घाव भरने एक गतिशील मरंमत की प्रक्रिया है और मानव जीवन में सबसे जटिल जैविक प्रक्रिया है । जवाब में चोट जला, जैविक रास्ते में परिवर्तन सूजन प्रतिक्रिया ख़राब, देरी घाव भरने में जिसके परिणामस्वरूप । बिगड़ा घाव हीलिंग अक्सर मधुमेह विच्छेदन के रूप में प्रतिकूल परिणामों के लिए अग्रणी के साथ रोगियों में होता है. इसलिए, ड्रेसिंग जला घाव मरंमत को बढ़ावा देने में लाभकारी प्रभाव होने की जरूरत है । हालांकि, जला घाव उपचार पर अध्ययन उचित पशु मॉडलों की कमी के कारण सीमित हैं । हमारे पिछले अध्ययन एक न्यूनतम इनवेसिव शल्य चिकित्सा तकनीक का उपयोग कर चूहे और सूअर मॉडल में घाव भरने के प्रदर्शन का प्रदर्शन किया । यह गंभीर चोट जला है कि घाव संकुचन और अधिक बारीकी से पुनः के मानव प्रक्रियाओं epithelialization और नए ऊतक गठन को समाप्त करने का एक सूअर मॉडल प्रदर्शित करने के उद्देश्य से अध्ययन । इस प्रोटोकॉल अनुरूप जला घाव बनाने और एक सूअर मॉडल में एक प्रयोगात्मक ड्रेसिंग के उपचार के तहत घाव चिकित्सा प्रदर्शन की जांच के लिए एक विस्तृत प्रक्रिया प्रदान करता है । छह जला घाव सममित dorsum, जो एक नैदानिक चार परतों से बना ड्रेसिंग के साथ कवर किया गया पर बनाए गए थे: प्रयोगात्मक सामग्री, निविड़ अंधकार फिल्म, धुंध की एक बाहरी मध्यवर्ती परत की एक भीतरी मध्यवर्ती परत के एक भीतरी संपर्क परत, और चिपकने वाला प्लास्टर की एक बाहरी परत । प्रयोगों के पूरा होने पर, घाव बंद करने, घाव क्षेत्र, और वैंकूवर निशान स्केल स्कोर की जांच की गई । प्रत्येक पशु पद-त्याग से संप्रदाय किए गए त्वचा के नमूनों को histologically तैयार किया गया और hematoxylin और eosin धुंधला का प्रयोग दाग दिया गया. घाव भरने के संदर्भ में प्रत्येक ड्रेसिंग के जीवाणुरोधी गतिविधि भी जांच की गई । स्वाइन मॉडल में घाव करने के लिए नैदानिक ड्रेसिंग के आवेदन epithelialization, सेलुलर प्रसार, और angiogenesis की प्रक्रियाओं के संबंध में मानव घाव भरने की जैविक प्रक्रियाओं की नकल । इसलिए, इस सूअर मॉडल गंभीर जला चोट में नैदानिक ड्रेसिंग के प्रभाव का आकलन करने के लिए एक आसान जानने के लिए, लागत प्रभावी और मजबूत विधि प्रदान करता है ।
Introduction
एक जला चोट भड़काऊ प्रक्रिया शुरू करता है और जटिल रोग प्रभाव, जो एक दुर्घटना के तुरंत बाद कई शरीर कार्यों को प्रभावित करता है, रोगियों के जीवन की गुणवत्ता पर नकारात्मक प्रभाव में जिसके परिणामस्वरूप । बिगड़ा घाव भरने मधुमेह1,2के साथ रोगियों के बीच महत्वपूर्ण रुग्णता और मृत्यु का कारण बनता है । बर्न चोटों के साथ अधिकांश रोगियों को घाव में दर्द का अनुभव, जो शक्तिशाली opioid एनाल्जेसिक3के उपयोग के बावजूद एक कष्टदाई प्रक्रिया के रूप में जाना जाता है ।
अंय स्तनधारियों के विपरीत, सूअर epithelialization, सेलुलर प्रसार, और angiogenesis की प्रक्रिया के बारे में मनुष्यों के साथ कई शारीरिक और शारीरिक विशेषताओं का हिस्सा । यह सूअर कुछ प्रक्रियाओं और अध्ययन के लिए एक संभावित बेहतर मॉडल बनाता है, और वे अक्सर बाद में अध्ययन है कि चूहों में आशाजनक परिणाम का प्रदर्शन किया जाता है । इन सुविधाओं के लिए नैदानिक परीक्षण में एक प्रमुख प्रजातियों के रूप में सूअर के बढ़ते उपयोग के लिए नेतृत्व किया है । हाल ही में, हृदय, मूत्र, integumentary के संबंध में जैव चिकित्सा अनुसंधान में तेजी से वृद्धि हुई है, और पाचन प्रणाली4,5,6मनाया गया है । इस अध्ययन के लिए गंभीर चोट जला कि घाव संकुचन समाप्त और मानव घाव भरने प्रक्रियाओं के एक करीब सन्निकटन प्रदान करता है और नए ऊतक के गठन के एक सूअर मॉडल का प्रदर्शन करना है । छह जला घाव dorsum पर सममित बनाया गया था, सूअर की रीढ़ की हर तरफ तीन । अगले, anexperimental ड्रेसिंग गंभीर चोट जला, जो मानव घाव हीलिंग (चित्रा 1) को दोहराने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है की एक सूअर मॉडल में जांच की थी । घाव एक नैदानिक ड्रेसिंग, जो चार परतों से बना है के साथ कवर किया गया: प्रयोगात्मक सामग्री, निविड़ अंधकार फिल्म, एक बाहरी मध्यवर्ती परत की धुंध की एक आंतरिक मध्यवर्ती परत, और चिपकने वाला प्लास्टर की एक बाहरी परत की भीतरी संपर्क परत । एक पनरोक फिल्म घाव पर्यावरण नम रहता है, जबकि बैक्टीरियल संक्रमण को रोकने और गैस ड्रेसिंग रिस करने की अनुमति । धुंध की बाहरी मध्यवर्ती परत निविड़ अंधकार फिल्मों पर लागू किया गया था और चिपकने वाला प्लास्टर की एक बाहरी परत द्वारा सुरक्षित । प्रयोगों के पूरा होने पर, घाव बंद करने, घाव क्षेत्र, और वैंकूवर निशान स्केल (VSS) स्कोर की जांच की गई । प्रत्येक जानवर के बाद बलि से संप्रदाय त्वचा के नमूने histologically तैयार किए गए थे और hematoxylin और eosin (वह) धुंधला का उपयोग दाग । घाव भरने के संदर्भ में प्रत्येक ड्रेसिंग के जीवाणुरोधी गतिविधि भी इस मॉडल में जांच की गई । हमारे पिछले अध्ययन में एक न्यूनतम इनवेसिव सर्जिकल तकनीक7का उपयोग कर चूहे और सूअर मॉडल में घाव-हीलिंग प्रदर्शन का प्रदर्शन किया है । के बाद से वहां छह प्रत्येक सूअर के भीतर dorsum पर घाव जला रहे थे, प्रत्येक प्रयोगात्मक ड्रेसिंग का परीक्षण किया और सभी पदों में मूल्यांकन के लिए सूअर dorsum पर विभिंन स्थानों में घाव भरने की प्रक्रिया से संबंधित पूर्वाग्रह को कम कर दिया गया । इसलिए, इस अध्ययन में स्थापित गंभीर जला चोट के सूअर मॉडल नैदानिक ड्रेसिंग के मूल्यांकन के लिए एक नया दृष्टिकोण प्रदान करता है और जला चोट के लिए एक उपंयास उपचार के विकास की सुविधा । इस अध्ययन के घाव भरने जला के pathophysiology को उजागर करने के लिए महत्वपूर्ण उपकरण प्रदान करता है ।
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Protocol
पशु विषयों को शामिल प्रक्रियाओं राष्ट्रीय रक्षा चिकित्सा केंद्र, ताइवान (आर. ओ. सी.) में पशु देखभाल समिति द्वारा अनुमोदित किया गया है । यह अध्ययन प्रयोगशाला पशु केंद्र में राष्ट्रीय रक्षा चिकित्सा केंद्र में आयोजित किया गया. 20 और 25 किलो के बीच वजन सूअर सफलतापूर्वक इस प्रोटोकॉल का उपयोग कर साधन किया गया है ।
1. मानव हैंडलिंग के लिए जानवरों के अनुकूलन
- सुविधा में आने के बाद घर के जानवरों को solitarily लेकिन उन्हें एक-दूसरे से बातचीत करने दें ।
- भोजन और पानी के लिए जानवरों के विज्ञापन libitum पहुंच प्रदान करें ।
- पशु सुविधा से मानव की हैंडलिंग और ढुलाई को Acclimate सूअर को एक सप्ताह के लिए दिन में एक बार पशु संभालकर प्रायोगिक प्रयोगशाला में रखें ।
- मतली, उल्टी, और पेट के तरल पदार्थ की आकांक्षा को रोकने के लिए सर्जरी से पहले कम से कम 12 घंटे के लिए पशु फास्ट ।
2. बेहोशी की
- जला घाव बनाने से पहले, Zoletil ५० के साथ एक नसों में इंजेक्शन के माध्यम से बेहोश जानवरों (25 मिलीग्राम/
3. इंटुबैषेण और वेंटिलेशन
- एक मेज पर पशु प्लेस और स्टर्नल स्थिति में/
- एक मौखिक प्रसार के साथ पशु के मुंह खोलो ।
- जबड़े या निगलने सजगता, जो बाधा इंटुबैषेण, मुखौटा isoflurane के साथ सूअर की उपस्थिति की अपर्याप्त छूट के मामले में बेहोशी पैदा करने के लिए ।
- संभावित जटिलताओं को रोकने के लिए सर्जरी के दौरान शारीरिक सिग्नल मॉनिटर द्वारा रक्तचाप, हृदय गति, और शरीर के तापमान की निगरानी ।
4. संज्ञाहरण
- प्रेरित और संज्ञाहरण को बनाए रखने; अधिमानतः tiletamine और zolazepam के एक इंट्रामस्क्युलर इंजेक्शन के माध्यम से पशु anesthetize (25 मिलीग्राम/किग्रा + 25 मिलीग्राम/किग्रा) ।
- endotracheal ट्यूब के साथ पशु Intubate जब मांसपेशी छूट, जबड़े टोन और palpebral सजगता के नुकसान की विशेषता, मनाया गया था ।
- एक संवेदनाहारी राज्य में सभी सूअरों 0.5 की एक vaporizer सेटिंग में बनाए रखें-2.5% (v/v) isoflurane सर्जरी के अंत तक ।
- सर्जरी से पहले एक हिंद पैर पैर की अंगुली चुटकी के साथ दर्द सजगता परीक्षण द्वारा संज्ञाहरण की गहराई की जांच करें । जब आवश्यक हो, अतिरिक्त संज्ञाहरण जोड़ें या कुछ मिनट के लिए प्रतीक्षा करें । सर्जरी में नियमित रूप से दर्द सजगता की जांच करें ।
5. शल्य चिकित्सा स्थल की नसबंदी
- दाढ़ी और कशेरुका कॉलम से लगभग 25 सेमी चौड़ाई के एक क्षेत्र पर जानवर की त्वचा को साफ दोनों पक्षों पर axilla के लिए रास्ता ।
- हाथ धोने povidone-आयोडीन सफ़ाई के साथ moisturized त्वचा (७५ मिलीग्राम/एमएल) लगभग 5 मिनट के लिए ।
- गीले बाँझ धुंध का उपयोग कर त्वचा से povidone-आयोडीन साबुन निकालें ।
- povidone-आयोडीन लोशन (१०० मिलीग्राम/एमएल) के साथ त्वचा को निष्फल ।
- सर्जिकल साइट के जीवाणु हस्तांतरण और बाद में संदूषण को कम करने के लिए बाँझ सर्जिकल पर्दे के साथ पशु को कवर ।
6. घाव बनाना जला
- सूअर के dorsum पर सममित छह घावों के केंद्र चिह्नित करने के लिए एक शल्य अंकन कलम का प्रयोग करें । प्रत्येक जला घाव के बीच की दूरी घाव (आंकड़ा 1a) की त्रिज्या से कम से अधिक है कि यह सुनिश्चित करें ।
- ग्लिसरीन की ५० मिलीलीटर के साथ एक संशोधित टांका लगाने का लोहा भरें और तापमान पर नजर रखने के लिए इसे में एक इलेक्ट्रॉनिक थर्मामीटर डालें । गर्म लोहे के लगभग 9 सेमी2 (आंकड़ा 1b) के एक फ्लैट क्षेत्र के पास ।
- एक गर्म थाली (चित्रा 1C) के साथ 137-139 डिग्री सेल्सियस के लिए लोहे को गर्मी ।
- चिह्नित क्षेत्र पर लोहे को 30 सेकंड (फिगर 1C) के लिए कोई बल लागू किए बिना रखकर छह समान जला घाव बनाएँ.
- ०.९% खारा समाधान (चित्रा 1 डी) के साथ जला घाव धो लें ।
- घाव आयामों को मापने और photomicrography (चित्रा 1E) द्वारा घाव रिकॉर्ड ।
7. ड्रेसिंग की तैयारी
- प्रत्यक्ष संपर्क के माध्यम से चार परत नैदानिक ड्रेसिंग के भीतरी संपर्क परत के साथ प्रत्येक घाव को कवर । इस लेयर के लिए कैप्स युक्त ड्रेसिंग या वैकल्पिक सामग्री (फिगर 1F) का इस्तेमाल करें ।
- नैदानिक ड्रेसिंग पर एक पनरोक फिल्म लागू करने के लिए बैक्टीरियल प्रवेश (चित्रा 1F) के खिलाफ एक बाधा के रूप में सेवा ।
- एक धुंध के साथ प्रत्येक घाव को कवर (०.५ सेमी मोटी) और ड्रेसिंग के मध्य परत के रूप में सेवा करने के लिए कागज टेप के साथ फिक्स (चित्रा 1G) ।
- चिपकने वाला प्लास्टर की एक बाहरी परत के साथ धुंध सुरक्षित । ड्रेसिंग के विस्थापन से बचने के लिए इस परत को धड़ तक विस्तारित करें (चित्रा-1J) ।
8. देखभाल और माप के बाद जला
- buprenorphine के साथ सूअर सुई (०.१ मिलीग्राम/kg, IM) दर्द प्रबंधन के लिए हर 8-12 एच, संज्ञाहरण से वसूली से पहले शुरू करने के लिए, एक सप्ताह के लिए संभावित दर्द को कम करने के लिए ।
- सुअर मुफ्त का उपयोग करने के लिए फ़ीड और पानी की अनुमति दें ।
- नैदानिक ड्रेसिंग बदल पहले 10 दिनों के लिए हर 2 दिन और फिर 6 सप्ताह के अध्ययन के लिए एक सप्ताह में दो बार ।
- नैदानिक ड्रेसिंग को फिर से लागू करने से पहले घाव को साफ और मापने । ड्रेसिंग परिवर्तन के दौरान निश्चेतक प्रशासन ।
- घाव हीलिंग दर की तुलना के लिए photomicrography द्वारा रिकॉर्ड पहले 10 दिनों के लिए हर 2 दिन और फिर 6 सप्ताह के अध्ययन के लिए सप्ताह में दो बार ।
- एक पहले वर्णित विधि के अनुसार घाव re-epithelialization या संकुचन मूल घाव आकार के प्रतिशत के रूप में परिकलित करें । घाव बंद होने का विश्लेषण एक डबल अंधा तरीके से आयोजित किया गया था ।
- VSS, जो चार चर के होते है का उपयोग कर जला निशान उपाय: संवहनी, ऊंचाई (मोटाई), लचक, और पोस्ट जला दिन पर रंजकता 0, 7, 21, और ४२ । प्रत्येक चर चार से छह संभव स्कोर है । 0 से 14 तक कुल स्कोर पर्वतमाला, जिससे 0 का स्कोर सामान्य त्वचा को दर्शाता है ।
9. पोस्ट-बर्न ऊतकों के जीवाणु विकास प्रयोग
- झाड़ू पोस्ट पर जीवाणुरोधी परीक्षण के लिए घाव-जला दिन 0, 7, 21, और ४२ ।
- ०.९% बाँझ खारा समाधान और धीरे भंवर की १०० मिलीलीटर में झाड़ू प्लेस एक समरूप निलंबन प्राप्त करने के लिए ।
- प्रश्नपत्र पतला (10− 1– 10− 5) क्रमशः चयनात्मक और अचयनित मीडिया में प्रत्येक कमजोर पड़ने की homogenate और प्लेट १०० μL ।
- 24-72 घंटे के लिए ३७ ° c पर एरोबिक शर्तों के तहत सभी कमजोर पड़ने वाली मशीन ।
- प्लेट तपसिल aliquots के 10 μL प्रत्येक रक्त आगर प्लेट पर सभी कमजोर पड़ने से एरोबिक ग्राम पॉजिटिव जीवों को अलग करने के लिए 5% भेड़ रक्त के साथ पूरक ।
- प्रसार या कॉलोनी के गठन इकाइयों (CFUs) की संख्या निर्धारित करने के लिए रातोंरात एक आगर प्लेट की सतह पर नमूना समान रूप से डालने के द्वारा नमूना मशीन ।
- रात भर की मशीन के बाद प्लेटें पढ़ें । भेड़ रक्त आगर प्लेट पलटना और एक मार्कर और छोटे शासक का उपयोग चार बराबर चक्रों में पकवान के नीचे विभाजित ।
- एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप के मंच पर थाली प्लेस और प्रत्येक थाली पर कालोनियों गिनती । परिभाषा के अनुसार, एक कॉलोनी ३०० CFU की एक ंयूनतम होना चाहिए गणना की है ।
- प्रत्येक तीन प्रतिकृति में बैक्टीरियल कालोनियों गिनती । तीन प्रतिकृति के औसत मान की गणना करें । अंतिम कमजोर पड़ने कारक द्वारा औसत मूल्य गुणा करके प्रति प्लेट CFU निर्धारित करते हैं ।
10. इच्छामृत्यु और ऊतक निर्धारण
- नसों में सोडियम pentobarbital इच्छामृत्यु समाधान की अधिक मात्रा सुई (80-120 मिलीग्राम/
- अंतर्निहित पेशियां और आसपास के जख्मी ऊतकों को शामिल करने के लिए जला घाव ऊतक के एन ब्लॉक उत्पाद प्रदर्शन ।
- 10% तटस्थ बफर formalin के साथ ऊतकों को ठीक करें ।
- फॉस्फेट बफर समाधान (पंजाब) के ९० मिलीलीटर में formaldehyde (३७%) के 10 मिलीलीटर मिश्रण और 4 डिग्री सेल्सियस में स्टोर ।
- स्थानांतरण ऊतकों को निर्धारण करने के लिए और कंटेनर भंवर सभी ऊतकों को सुनिश्चित करने के लिए पूरी तरह से निर्धारण में डूबे हुए हैं । निर्धारण की मात्रा ऊतक की मात्रा के 30 गुना होना चाहिए ।
- 4 ˚ सी पर रातोंरात ऊतकों को ठीक करें ।
- इथेनॉल और आयल ब्लॉकों में एंबेड के साथ निर्जलीकरण के ऊतकों । एक शेखर पर 4 ˚ C पर निम्न चरणों का पालन करें ।
- 30 मिनट के लिए पंजाबियों के साथ दो बार धो लें ।
- निर्जलीकरण 8 घंटे के लिए ७०% इथेनॉल, ८०% रात भर इथेनॉल, 8 घंटे के लिए ९५% इथेनॉल के साथ ऊतकों, और फिर १००% इथेनॉल में रातोंरात ।
- एक और 8 घंटे के लिए १००% इथेनॉल में ऊतकों की मशीन ।
- 30 मिनट के लिए प्रत्येक xylene के तीन परिवर्तन में ऊतकों की मशीन ।
- ताजा पिघल (५२ डिग्री सेल्सियस) मोम, और 1 घंटे के लिए एक ओवन में ५२ डिग्री सेल्सियस पर मशीन के साथ xylene बदलें ।
- ताजा मोम के साथ मोम की जगह और ५२ डिग्री सेल्सियस पर 3 घंटे के लिए एक ओवन में मशीन, और फिर एक बार और अधिक की जगह ५२ डिग्री सेल्सियस पर रात भर ।
- 1 घंटे के लिए प्रत्येक मोम के दो और अधिक परिवर्तन के साथ ऊतक गर्मी, और फिर 4 डिग्री सेल्सियस पर ऊतक और दुकान एंबेड ।
- कट और दाग वह के साथ तेल एंबेडेड वर्गों, और १००× आवर्धनके साथ एक प्रकाश माइक्रोस्कोप के माध्यम से कल्पना ।
- एक रोटरी microtome का उपयोग कर आयल वर्गों बनाएँ ।
- 3 मिनट के लिए प्रत्येक xylene के तीन परिवर्तन के साथ Dewax वर्गों ।
- १००%, ९५%, ८०%, और ७०% इथेनॉल प्रत्येक 3 मिनट के लिए, और फिर आसुत जल में विसर्जित के साथ ऊतकों हाइड्रेट ।
- 10 मिनट के लिए hematoxylin के साथ दाग, और फिर नल का पानी चलाने में कुल्ला ।
- 5 मिनट के लिए ०.१% हाइड्रोक्लोरिक एसिड इथेनॉल के साथ अंतर है, और नल के पानी में कुल्ला ।
- 1 मिनट के लिए ०.५% eosin के साथ दाग ।
- ७०%, ८०%, ९५% के साथ निर्जलीकरण ऊतकों, और १००% इथेनॉल प्रत्येक 2 मिनट के लिए ।
- xylene के साथ धुंधला स्पष्ट है, और धुएं हूड में सूखी ।
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Representative Results
गर्म लोहे द्वारा 30 सेकंड की अवधि जला घाव है कि एक अच्छी तरह से परिभाषित मार्जिन के साथ परिपत्र थे और समान रूप से पर्विल के एक रिम के साथ पीला (चित्रा 1 d) । प्रत्येक जानवर के भीतर, वहां dorsum पर छह जला घाव थे । जला दए जाने की व्यवस्था चित्रा १में दर्शाई गई थी. घाव जला पूरी तरह से टोपियां युक्त ड्रेसिंग के साथ कवर किया गया और पोस्ट पर निशान गठन की गहराई का मूल्यांकन करते थे जला दिन 0, 7, 21, और ४२ और पुनः epithelialization, के रूप में सकल निरीक्षण द्वारा निर्धारित । जला दए गए पोस्ट-जला दिवस ४२ पर सकल निरीक्षण के आधार पर पुनः epithelialized गए. इन पशुओं में घाव का आकार घाव भरने की दर (चित्रा 2a) का निर्धारण करने के लिए मूल्यांकन किया गया था । घाव क्षेत्रों 9, 10, 8, और 3 सेमी2 पोस्ट पर जला दिन थे 0, 7, 21, और ४२, क्रमशः । घाव क्षेत्र में एक महत्वपूर्ण कमी के बाद जला दिवस 0 दिन के साथ तुलना में ४२ पर मनाया गया । चिकित्सा दर घाव बंद पूरा करने के लिए समय से विभाजित घायल केंद्र से सबसे बड़ा औसत घाव मार्जिन दूरी के रूप में परिभाषित किया गया था । टोपियां युक्त ड्रेसिंग के साथ इलाज घाव एक 73.43 ± 6.33% के बाद जला दिवस ४२ (चित्रा बी) पर घाव बंद दिखाया ।
चित्रा 3 के बाद जला दिन 0, 7, 21, और ४२ पर निशान नाड़ी, लचक, रंजकता, और ऊंचाई के संबंध में VSS स्कोर से पता चलता है । VSS स्कोर के बाद जला दिवस 21 पर 7.4 ± 0.5 पर नुकीला और बाद जला दिन ४२ पर 3.33 ± 0.58 की कमी हुई ।
सभी पशुओं के बाद जला दिवस ४२ पर बलिदान किया गया । प्रत्येक पशु पद से संप्रदाय की त्वचा के नमूने-बलिदान तैयार histologically और एच एंड ई द्वारा दाग थे नमूनों की Histologic परीक्षा की पुष्टि की है कि पूर्ण मोटाई जलता प्राप्त किया गया था, और घाव पूरी तरह चंगा (4 चित्रा) दिखाई दिया । जलता से उत्पन्न परिगलन एपिडर्मिस में देखा जा सकता है, dermis, और घाव के चमड़े के घटकों में महत्वपूर्ण अंतर्निहित मांसपेशी को प्रभावित किए बिना (4 चित्रा). प्रायोगिक ड्रेसिंग के नीचे dermis मोटाई ५.४ mm (चित्रा 4a) था । इसके अलावा, dermis और लिम्फोसाईटिक घुसपैठ के sloughing में मनाया जाता है, के रूप में चित्रा 4Bमें लाल तीर से संकेत दिया ।
प्रयोगात्मक ड्रेसिंग के जीवाणुरोधी संपत्ति के बाद जला दिन 0, 7, 21, और ४२ पर एक CFU परख का उपयोग कर निर्धारित किया गया था । परिणाम के बाद के बीच में मनाया बैक्टीरियल सेल संख्या में एक मामूली वृद्धि दिखाई-जला दिन 0 और 21 के बाद जला दिवस ४२ (चित्रा 5) पर एक महत्वपूर्ण वृद्धि के बाद । इस परिणाम से पता चलता है कि इस अध्ययन में स्थापित गंभीर जला चोट के सूअर मॉडल, जीवाणुरोधी संपत्ति सहित प्रयोगात्मक ड्रेसिंग के नैदानिक प्रदर्शन पर नजर रखने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है ।
चित्र 1. घाव बनाने और एक टोपियां युक्त नैदानिक ड्रेसिंग के आवेदन जला । बाल हटाने और आयोडीन और अल्कोहल के साथ त्वचा की तैयारी के बाद, (एक) शल्य अंकन कलम dorsum पर छह हलकों, midline के दोनों ओर की रूपरेखा के लिए इस्तेमाल किया गया था । (ख) संशोधित आयरन ग्लिसरीन और तापमान को दिखाने के लिए ग्लिसरीन में डाला गया एक इलेक्ट्रॉनिक थर्मामीटर से भरा हुआ था । (ग) लोहे को गरम प्लेट के साथ 137-139 ° c तक गरम किया जाता है, और त्वचा के निशानों पर छह समान जलने के घाव बनाए जाते थे । जला घाव बनाने के लिए, सूअर की पीठ त्वचा (30 सेकंड) पर कोई बाहरी बल के साथ गर्म लोहे की जगह दो पूर्ण मोटाई घाव बनाने के लिए । (घ) सभी घावों के पैदा होने के बाद, घाव ०.९% खारा समाधान के साथ धोया गया । (ङ) तराजू को चित्र लेने के लिए घावों के बगल में रखा गया. (च) पहली परत एक टेस्ट ड्रेसिंग और एक निविड़ अंधकार फिल्म के साथ दूसरी परत के साथ कवर किया जाता है । (छ) तीसरी परत के बारे में ०.५ सेमी मोटाई की धुंध के साथ कवर किया और कागज टेप के साथ तय की है । (H-J) चिपकने वाला प्लास्टर की एक बाहरी परत के साथ धुंध सुरक्षित । इस परत को ड्रेसिंग के विस्थापन से बचने के लिए धड़ तक फैली हुई है । (K) जला घाव वितरण की योजनाबद्ध आरेख । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 2. एक सूअर मॉडल में घाव का आकार बदलें । (क) घाव बंद करने की दर 0 दिन पर मूल घाव के एक प्रतिशत के रूप में निर्धारित किया गया था । घाव लगभग पूरी तरह से पोस्ट पर अनुबंध-जला ४२ दिन था, और (ख) घाव क्षेत्र के परिवर्तन के बीच मनाया गया 0 से ४२ दिन के बाद जला पशु मॉडल । यह पोस्ट जला दिन ४२ पर सबसे बड़ी कमी से पता चलता है, ९० ± 4% घाव क्षेत्र बंद करने का प्रदर्शन । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 3. वैंकूवर निशान स्केल (VSS) का औसत कुल स्कोर पोस्ट पर एक डबल-ब्लाइंड प्रयोगात्मक डिजाइन का उपयोग कर एक सूअर मॉडल में दिन जला । निशान आकलन रंजकता, संवहनी, लचक, और निशान की ऊंचाई भी शामिल है । एक कम स्कोर हालत पर निशान है कि बारीकी से सामांय त्वचा (पी = ०.०००५) अनुमानित इंगित करता है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 4. Hematoxylin व eosin पर दाग लगने के बाद जला दिवस ४२. (A, B) काले औंधा त्रिकोण की मरंमत जला ऊतक इंगित करता है । पूर्ण मोटाई घाव की आकृति विज्ञान चिकनी और निरंतर था, और इल्लों परत hypertrophic scarring की सुविधाओं के सदृश । घाव की सतह को कवर करने वाले नव-एपिडर्मिस की उपस्थिति को नोट करें । (ख) लाल तीर के नीचे व्यवहार्य dermis के ऊपर जला घाव eschar में चमड़े का संयोजी ऊतक घुसपैठ भड़काऊ कोशिकाओं को इंगित करता है । मूल आवर्धन, 10 × । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 5. एक बार विभिंन समय अंक पर घावों के जीवाणु गिनती दिखा आरेख । 0, 7, 21, और ४२ दिनों में पोस्ट-बर्न घाव पशु मॉडल की जीवाणुरोधी गतिविधि । जीवाणुरोधी गतिविधि कॉलोनी बनाने इकाइयों (CFU) तीन स्वतंत्र प्रयोगों में परख द्वारा मूल्यांकन किया गया था । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
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Discussion
वर्तमान अध्ययन गंभीर जला चोट के एक सूअर मॉडल की स्थापना की और एक टोपी युक्त ड्रेसिंग का उपयोग कर मॉडल की जांच की । हमारे परिणाम सुझाव है कि इस सूअर मॉडल जीवाणुरोधी संपत्ति सहित प्रयोगात्मक ड्रेसिंग, के नैदानिक प्रदर्शन की निगरानी के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । घाव भरने की दर, घाव बंद करने, और जीवाणुरोधी गतिविधि भी VSS, एच और ई धुंधला, और जीवाणुरोधी परीक्षण का उपयोग कर विश्लेषण किया गया । जला चोट के pathophysiology की समीक्षा करने के लिए पशु जला मॉडलों का उपयोग एक मूल्यवान उपकरण के रूप में विकसित किया गया है । वहां कुछ प्रायोगिक विषयों के रूप में चूहों का उपयोग कर के जैविक लाभ हैं, चूहे की उच्च संख्या में विशेष रिएजेंट और ट्रांसजेनिक चूहों को प्राप्त करने के व्यावहारिक पहलुओं सहित, आणविक संकेतन रास्ते वसूली में सक्रिय की खोज के लिए प्रक्रिया. हालांकि, एक जानवर जला मॉडल में चूहों का उपयोग कर के प्रमुख नुकसान अपनी पूरी तरह से अनुमानित मानव घाव भरने की प्रक्रिया विफलता है । पुनः epithelialization मुख्य चिकित्सा दृष्टिकोण8मनुष्यों में मनाया जाता है, जबकि चूहों में घाव भरने दृढ़ता से एक तेजी से9में घाव संकुचन पर निर्भर करता है । इसके अलावा, hypertrophic या keloid निशान गठन करने के लिए चूहों की गैर भेद्यता मनुष्यों की है कि से उनके घाव वसूली की प्रक्रिया की समानता की पुष्टि की । दूसरी ओर, सूअर हाल ही में शोधकर्ता ध्यान के विषय बन गए है क्योंकि उनकी त्वचा वास्तुकला मानव त्वचा के समान है । इसके अतिरिक्त, सूअर और मनुष्यों में घाव भरने की प्रक्रिया शारीरिक रूप से समान चरणों के माध्यम से होता है जैसे कि सूजन, प्रसार, पुनः epithelialization, और remodeling । आम तौर पर, सूअर में जलता है 21 दिनों के द्वारा चंगा, फिर से 7 और 14 दिनों के बाद घाव दण्ड10,11, जो मनुष्यों में मनाया समय के लिए फिट के बीच होने वाली epithelialization के साथ । सूअर भी अधिक से अधिक रुग्णता दिखाने के अपने शरीर के आकार के कारण है कि अधिक घाव संक्रमण के लिए प्रतिरोधी बनाता है चूहों की तुलना । चूहों आमतौर पर पहले अलग उपचार के तहत घाव की स्थिति का मूल्यांकन करने के लिए इस्तेमाल मॉडल हैं । इसके अतिरिक्त, अंय स्तनधारियों के विपरीत, सूअर शारीरिक और epithelialization, सेलुलर प्रसार की प्रक्रिया के बारे में मनुष्यों के साथ शारीरिक विशेषताओं के एक नंबर का हिस्सा है, और angiogenesis । यह सूअर संभावित एक बेहतर मॉडल बनाता है, और वे अक्सर बाद के अध्ययनों कि चूहों 12,13,14,15में होनहार परिणाम का प्रदर्शन में इस्तेमाल कर रहे हैं । इसके अलावा, चमड़े का कोलेजन और लोचदार सामग्री का वितरण, त्वचा के नीचे रक्त की आपूर्ति, घाव भरने में घटनाओं के अनुक्रम, और फिर से epithelialization सूअरों घाव भरने और पुनर्निर्माण शल्य चिकित्सा उपचार के एक मानक मॉडल बना दिया है15 ,16,17,18. प्रत्येक जानवर के भीतर, वहां छह जला घाव ऊपरी, मध्य, और सूअर के निचले हिस्से पर स्थित है और रीढ़ के लिए सममित वितरित किया गया । जला घाव समान स्थानों पर लेकिन अलग सूअर पर बनाया जा सकता है । इसलिए, प्रत्येक प्रयोगात्मक ड्रेसिंग का परीक्षण किया जा सकता है और विभिंन स्थानों में मूल्यांकन करने के लिए सूअर dorsum पर विभिंन स्थलों में घाव भरने की प्रक्रिया से संबंधित पूर्वाग्रह को कम । इसके अलावा, गंभीर जला चोट के इस सूअर मॉडल यह सुनिश्चित करना है कि प्रत्येक सूअर एक घाव उपंयास उपचार प्राप्त करने और वाहन नियंत्रण के रूप में दूसरे के साथ अपने स्वयं के नियंत्रण के रूप में कार्य करता है से भी लाभ, में एक महत्वपूर्ण कमी के लिए अग्रणी पशुओं की संख्या ।
जला चोटों के प्रबंधन घाव भरने में प्रमुख जटिलताओं में से एक है । मानव चिकित्सा प्रक्रिया चार जैविक प्रक्रियाओं से बना है: रक्तस्तम्भन, सूजन, प्रसार, और परिपक्वता । एक बार उपचार प्रक्रिया परेशान या मंदबुद्धि है, यह एक fibroblastic प्रसार है कि एक hypertrophic निशान है, जो दिख रहा है में परिणाम को बढ़ावा देता है और आसपास के त्वचा के ऊपर उठाया जा जाता है16। reproducibility और सटीक ठहराव सुनिश्चित करने के लिए, पर्याप्त आसंजन चिपकने वाला प्लास्टर का उपयोग तुरंत समय में देरी को कम करने के लिए चोट के बाद की आवश्यकता है । त्वचा की जलन चिपकने वाला प्लास्टर से एक आम प्रतिक्रिया है कि नैदानिक ड्रेसिंग के आसपास एक खरोंच में परिणाम है । इस प्रकार, सावधानी खुजली को रोकने के लिए वर्तमान में उपलब्ध चिपकने वाला प्लास्टर के उपयोग में सिफारिश की है । अपूतित तकनीक के बाद और अच्छी तरह से सभी उपकरणों का विशुद्धीकरण (जैसे, कैलिपर) के लिए सूअरों के बीच पार से संक्रमण से बचने के लिए आवश्यक हैं ।
घाव भरने जला एक जटिल प्रक्रिया है । कारकों की एक निश्चित संख्या में दर्द, खुजली, और बैक्टीरियल संदूषण जैसे घाव भरने की प्रक्रिया पर एक नकारात्मक प्रभाव की पहचान की गई है । दर्द पशुओं के आहार पर एक नकारात्मक प्रभाव पड़ता है । पर्याप्त पोषक तत्व के बिना, विलंबित घाव भरने अपरिहार्य है । इसलिए, प्रत्येक सूअर buprenorphine के साथ इंजेक्शन था (०.१ मिलीग्राम/kg, IM) दैनिक 7 लगातार दिनों के लिए दर्द को कम करने के लिए । जला घाव बनाने के एक सप्ताह बाद भोजन के सेवन की निगरानी की गई । एक बार भोजन की मात्रा में कमी 7 दिन पर मनाया गया था, buprenorphine (०.१ मिलीग्राम/प्रशासन 14 दिन तक जारी रखा गया था । बैक्टीरियल संक्रमण, जो घाव भरने के लिए एक संभावित जोखिम है, सूजन को ट्रिगर और आगे चिकित्सा प्रक्रिया गीला हो सकता है । इसलिए, नैदानिक ड्रेसिंग निविड़ अंधकार फिल्मों को रोकने और संभावित संदूषण को कम करने के साथ कवर किया गया । खुजली घाव भरने की प्रक्रिया का एक असहज हिस्सा है । सूअर खुजली, जो घाव भरने की प्रक्रिया के लिए प्रतिकूल हो सकता है कम करने के लिए जमीन पर अपने ही वापस खरोंच सकता है । एक अच्छा ड्रेसिंग तेजी के गुणों के पास एक स्वीकार्य निशान के साथ घाव हीलिंग जला, संक्रमण और सूजन को रोकने, दर्द को समाप्त करने, और आसान और जल्दी जुटाना19,20की अनुमति । ड्रेसिंग जब आगे सामयिक अनुप्रयोगों और घाव क्षेत्र21,22के माप के लिए आवश्यक हटाया जा सकता है । हालांकि एक सूअर को चार परत नैदानिक ड्रेसिंग लागू एक और अधिक जटिल और समय लेने वाली प्रक्रिया नैदानिक से, सूअर मॉडल की अनुमति देता है करीब एक मानव जैविक प्रतिक्रिया से सन्निकटन माउस मॉडल । सूअर के मॉडल का उपयोग कर के कई संभावित लाभ यह अंय प्रजातियों की तुलना में नैदानिक परीक्षण के लिए एक बेहतर मंच बनाते हैं ।
घाव बंद करने की दक्षता और घाव क्षेत्र में कमी के मामले में नैदानिक प्रभावकारिता एक कैप्स युक्त ड्रेसिंग है कि एक 73.43 ± 6.33% घाव बंद करने के बाद जला दिवस ४२ से पता चला का उपयोग कर नजर रखी थी । इसके अलावा, VSS स्कोर, एक सत्यापित व्यक्तिपरक स्केल स्कोर, भी इस अध्ययन में सूअर में घाव का आकलन करने के लिए इस्तेमाल किया गया था17. यह विशेष रूप से नैदानिक परीक्षण18में प्रयोगात्मक ड्रेसिंग के साथ उपचार के दौरान hypertrophic निशान गठन पर नजर रखने के लिए महत्वपूर्ण है । बर्न घावों के उपचार में टोपियां के आवेदन के बाद जला दिन ४२ पर VSS स्कोर में एक महत्वपूर्ण परिवर्तन के परिणामस्वरूप 21 दिन पर स्कोर के साथ तुलना में । एक कम स्कोर के लिए एक शर्त है कि बारीकी से लगभग सामांय त्वचा रंग रंजकता, संवहनी, लचक, और ऊंचाई को बहाल करने का प्रयास घायल क्षेत्र इंगित करता है । इसके अलावा, एच एंड ई धुंधला के परिणाम कैप्स का इलाज किया क्षेत्र में एक बरकरार परत corneum परत का संकेत दिया । इस परिणाम से पता चलता है कि एक गंभीर चोट जलने की सूअर का मॉडल घाव क्षेत्र, घाव बंद करने, VSS स्कोर, और चिकित्सा प्रगति का मूल्यांकन करने के लिए मज़बूती से इस्तेमाल किया जा सकता है ।
इस प्रोटोकॉल गंभीर जला चोट के एक सूअर मॉडल पर एक प्रयोगात्मक ड्रेसिंग के उपयोग के प्रदर्शन के लिए कई विस्तृत कदम का प्रतिनिधित्व करता है और नैदानिक ड्रेसिंग के किसी भी प्रकार के मूल्यांकन के लिए लागू किया जा सकता है । एक संशोधित टांका लगाने वाला आयरन ५० मिलीलीटर ग्लिसरीन से भरा घाव निर्माण प्रक्रिया के दौरान १३७ से 139 डिग्री सेल्सियस के भीतर तापमान बनाए रखने में सक्षम है । हालांकि, इस विधि जैसे बिल्कुल वास्तविक जला तापमान और जला बनाया क्षेत्र टांका लोहे की गुंजाइश के कारण की संकीर्णता की नकल करने में असमर्थता के रूप में सीमाएं हैं । हालांकि, विधि का मुख्य लाभ उन सीमाओं को दूर । इस संशोधित लोहे के पारंपरिक तरीकों की तुलना में सटीकता और आसानी के साथ लगातार घाव बनाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । इसके अलावा, इस मॉडल विभिंन नैदानिक ड्रेसिंग के उपचार के तहत एक थर्मल जला चोट के शारीरिक और pathophysiological प्रतिक्रिया के एक संवेदनशील उपाय प्रदान करता है । प्रस्तावित मॉडल का लाभ, आर्थिक फायदों के अलावा, यह है कि यह अपेक्षाकृत कम शल्य चिकित्सा के अनुभव के साथ उन लोगों द्वारा नियंत्रित किया जा आसान है । स्वाइन मॉडल में घाव करने के लिए नैदानिक ड्रेसिंग के आवेदन मानव घाव भरने की जैविक प्रक्रियाओं की नकल । इसलिए, गंभीर जला चोट की स्थापना की सूअर मॉडल और इस अध्ययन में नैदानिक ड्रेसिंग के साथ परीक्षण के लिए जला चोट के लिए उपंयास उपचार के विकास की सुविधा । इस अध्ययन के घाव भरने जला के pathophysiology को उजागर करने के लिए महत्वपूर्ण उपकरण प्रदान करता है । अंत में, इस सूअर मॉडल एक आसान-जानने के लिए, लागत प्रभावी, और मजबूत विधि गंभीर जला चोट में नैदानिक ड्रेसिंग के प्रभाव का आकलन प्रदान करता है ।
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Disclosures
लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।
Acknowledgments
इस अध्ययन में त्रि-सेवा सामान्य अस्पताल से अनुदान का समर्थन किया गया था; राष्ट्रीय सुरक्षा चिकित्सा केंद्र, ताइवान (TSGH-C107-042); विज्ञान और प्रौद्योगिकी मंत्रालय, ताइवान (सबसे 106-2314-B-016 -014); और राष्ट्रीय रक्षा चिकित्सा केंद्र (मॉब-106-055; मॉब-106-010; मॉब-107-064) ।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Sedation: | |||
| Ketamine | Merial | 2528 ESP | 10 mL vial |
| Azaperone | China chemical & pharmaceutical | 47W406 | 100 mL vial |
| Atropine | Oriental chemical works | IN120802 | 1 mL vial |
| Anesthetic: | |||
| Tiletamine+Zolazepam | Virbac | BC91 | 5 mL vial |
| Isoflurane | Baxter | N002A225 | 100 mL vial |
| Surgery: | |||
| Hair clippers | Moser | - | - |
| Povidone iodine scrub solution | Ever star | HA161202 | 4 L barrel |
| Modified iron | - | - | - |
| 0.9% saline solution | CHI SHENG | KC130 | 500 mL vial |
| Gauze | China Surgical Dressings Center | MO15900080 | 10 x10 cm |
| CAPS | CoreLeader Biotech Co., Ltd, Taipei, Taiwan | - | - |
| Paper tape | 3M | NDC-8333-1530-01 | 2.5 cm x 9.1m |
| Waterproof film | 3M | NDC-8333-1600-40 | 10 cm x 10 m |
| Adhesive plaster | Young chemical | BH1426015 | 10 cm x 10 m |
| Dissection: | |||
| Pair of standard sharp/blunt straight scissors (14 cm) | Shinetec instruments | ST-S114 | - |
| Halstead-Mosquito (12.5 cm) | Shinetec instruments | ST-H012 | - |
| Handle(# 4) | Shinetec instruments | ST-H004 | - |
| Surgical Blade(#21) | Shinetec instruments | ST-B021 | - |
| Post-Fixation & Storage: | |||
| 50 ml Plastic centrifuge tube | Falcon | 352070 | - |
| 10% neutral buffered formalin | Leica | 3800604EG | - |
| Bacterial Growth Experiments | |||
| Blood agar plate (BAP) (TSA with 5% sheep blood) | CMP | - | 90 mm Mono |
References
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