Artigo de método

Um novo modelo Ex Vivo para a avaliação de desempenho de Material de injeção submucosa endoscópica

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DOI:

10.3791/58029

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19 de outubro de 2018

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1Department of Molecular Gastroenterology and Hepatology, Graduate School of Medical Science, Kyoto Prefectural University of Medicine, 2Department of Infectious Diseases, Graduate School of Medical Science, Kyoto Prefectural University of Medicine

Neste artigo

Resumo

Desenvolvemos um novo ex vivo modelo que se aplica uma tensão constante para o espécime gástrico porcino. Este desenvolvimento, foi possível avaliar o desempenho (a altura e a duração da elevação submucosa) de vários SIMs com precisão.  A metodologia de instalação detalhadas desse novo modelo é explicada.

Resumo

Aumentando o desempenho de materiais injeção submucosa (SIMs) é importante para a terapia endoscópica de início Câncer gastrointestinal. É essencial estabelecer um modelo ex vivo que pode avaliar o desempenho SIM com precisão, para o desenvolvimento de alta performance SIMs. Em nosso estudo anterior, desenvolvemos um novo ex vivo modelo que pode ser usado para avaliar o desempenho de vários SIMs detalhadamente aplicando tensão constante às extremidades do espécime. Nós também confirmou que o modelo ex vivo novo proposto permite a medição de altura (SEH) elevação submucosa precisos sob condições uniformes e comparações detalhadas das performances de vários tipos de SIMs. Aqui, descrevemos o novo ex vivo modelo e explicar a metodologia de instalação detalhada deste modelo. Desde que todas as partes do novo modelo foram fáceis de obter, a instalação do novo modelo pôde ser concluída rapidamente. SEH de vários SIMs pode ser medido com mais precisão, usando o novo modelo. O fator crítico que determina o desempenho SIM pode ser identificado usando o novo modelo. Velocidade de desenvolvimento SIM aumentará drasticamente após o fator foi identificado.

Introdução

Tanto a dissecação endoscópica de submucosa (ESD) e a ressecção endoscópica da mucosa (EMR) são atualmente comuns tratamentos para o cancro gastrointestinal em fase inicial de1,2. Injetando um material de injeção submucosa (SIM) a submucosa é um dos passos mais importantes para o EMR e ESD procedimentos2,3. Alta elevação submucosa e manutenção de elevação submucosa são critérios essenciais para conduzir com segurança EMR/ESD.

Embora o soro fisiológico normal (NS) tem sido usado como um cartão SIM desde a invenção da terapia endoscópica4,5, hialuronato de sódio (HA) foi introduzido como um tratamento em anos recentes6,7. HA tornou-se amplamente usado em tratamentos endoscópicos como um SIM superior devido ao seu alto desempenho8,9,10,11. Atualmente, realizou-se uma comparação de desempenho entre os SIMs existentes, e SIMs de alta performance foram desenvolvidas para identificar outro superior SIM5,12,13,14, 15,16,17,18.

O modelo ex vivo usando um espécime de estômago de suínos tem sido usado para avaliar o desempenho SIM, porque a estimativa de desempenho SIM no tracto gastrointestinal humano é muito difícil19,20,21 , 22. no entanto, este modelo convencional ex vivo é extremamente simples e tem a possibilidade de melhoria. Reproduzir um ambiente mais perto para a mucosa gastrointestinal humano permitirá avaliação exata do desempenho SIM.

Em nosso estudo anterior, desenvolvemos um novo ex vivo modelo que pode ser usado para avaliar o desempenho de vários SIMs detalhadamente aplicando tensão constante às extremidades do espécime. Nós também confirmou que o modelo ex vivo novo proposto, permite que a medida exata do sob condições uniformes e uma comparação detalhada das performances de vários tipos de SIMs23.

Neste estudo, apresentamos uma aparência completa do novo modelo ex vivo , e a metodologia de instalação detalhadas do novo modelo ex vivo é explicada em detalhes usando figuras e vídeos. O novo modelo ex vivo consiste de partes que estão facilmente disponíveis e pode ser instalado rapidamente. Descrições da metodologia detalhada de instalação irão contribuir para a divulgação do novo modelo.

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Protocolo

O seguinte protocolo segue as orientações de cuidados com animais de o Kyoto Prefectural University of Medicine.

1. preparação das amostras usando um estômago de suínos

Nota: O primeiro passo é preparar as amostras para ser usado no modelo ex vivo (Figura 1). A espessura da parede gástrica porcina varia em diferentes áreas do estômago. Use o terço superior do estômago porcino, que é relativamente similar ao estômago humano. Exclua amostras inadequadas onde elevação submucosa não é encontrada devido a fibrose.

  1. Corte gástricos espécimes em quadrados com dimensões aproximadas de 6 × 6 cm.
  2. Armazenar os espécimes gástricos imediatamente a uma temperatura de-30 ° C.
  3. Descongele amostras congeladas gástricas direita antes do procedimento de medição, para assegurar condições de medição uniforme.

2. metodologia de instalação detalhada de um novo modelo Ex Vivo

Nota: Para esticar o espécime descongelado em uma placa de duas maneiras diferentes. No modelo convencional ex vivo , consertar o espécime com pinos (figura 1A)19,20,21,22. Por outro lado, no novo modelo ex vivo , corrigir ou esticar as duas extremidades da amostra com clipes para produzir uma tensão constante (figura 1B, C). Todas as peças do novo modelo são fáceis de obter, e a configuração do novo modelo pode ser concluída rapidamente (Figura 2). O procedimento do novo modelo é a seguinte (Figura 3):

  1. Conecte o grampo de aço inoxidável e o fio chave e o gancho em forma de S (Figura 3A).
  2. Conecte o fio e o S em forma de gancho e o peso (Figura 3A).
  3. Conecte a outra extremidade do fio o gancho. Um dispositivo de tração é concluído o processo acima (Figura 3B).
  4. Corrigi as polias (Figura 2b) em ambas as extremidades da base (Figura 3).
  5. Coloque a placa de borracha (6 x 6 cm) no centro da base (Figura 3).
  6. Coloque o espécime gástrico na placa de borracha e pitada que a amostra termina com o clipe do dispositivo de tração.
  7. Pendure o peso através da polia (ambos os lados). Desse modo, a tensão constante pode ser aplicada ao modelo (Figura 4).
  8. Iniciar a medição de SEH, porque após a instalação do novo modelo é completamente acabada (ver etapa 3 abaixo).

3. avaliação de desempenho de SIM

Nota: Neste estudo, usamos soro fisiológico normal (NS) e 0,4% de hialuronato de sódio (HA) como SIMs para ser testado e medir SEH do the SIMs 2. São realizadas três medições independentes. Os dados obtidos são expressos como a média e o desvio-padrão (S.D.). Análise estatística foi realizada utilizando o software de análise estatística (GraphPad Prism 7). Analisamos as variáveis contínuas (SEH) com o teste t de Student e as magnitudes com P < 0,05 foram considerados significativos. A medição de SEH é a seguinte (Figura 5).

  1. Realize o ajuste de ponto zero da bitola altura, baseada na altura da mucosa antes de um procedimento de elevação submucosa. Em detalhe, realizar o ajuste do ponto zero pressionando o botão predefinição depois de consertar o scriber na altura da superfície da mucosa.
  2. 2,0 mL de cada solução horizontalmente injete a submucosa de margens de amostra usando uma seringa de 2,5 mL e agulha de calibre 23, executar um procedimento de elevação submucosa (Figura 5A-C).
  3. Medida SEH prontamente usando um graminho de digital em 0, 2,5, 5, 7,5, 10, 12.5, 15, 17.5, 20, 30, 45 e 60 min após a injeção (Figura 5). No detalhe, grave a altura exibida no medidor de altura, ao fixar o scriber até o topo da elevação submucosa.
  4. Realizar três medições independentes e expressar os resultados obtidos como a média e o desvio-padrão.
  5. Analisar os dados obtidos usando o software estatístico adequado e avaliar o desempenho dos SIMs (o desempenho pode ser comparado entre cada SIM).

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Resultados

SEH foi medido ao longo do tempo o novo ex vivo modelo ou convencionais ex vivo . Os valores de SEH (NS) medido utilizando o modelo convencional [NS foi injetado a submucosa do espécime fixado com pinos (0.0 N)] foram 5,7 milímetros (0 min), 3,6 milímetros (5 min), 3.0 mm (10 min) e 2.2 mm (30 min). Desta forma, os valores de SEH diminuíram com o aumento do tempo de injeção de pós. Uma análise semelhante foi realizada usando 0,4% HA em vez de NS. Os valores de SEH (0,4% ...

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Discussão

O estômago de suínos usado para o novo modelo deve ser armazenado em um freezer imediatamente após a ressecção e ser usado dentro de alguns meses após a congelação, desde que o frescor do estômago suína é essencial para a medição de SEH. (Medido SEH usando as amostras congeladas e descongeladas gástricas e confirmou que não houve diferença no resultado de medição SEH.)

A qualidade dos espécimes gástricos é muito influenciada por diferenças individuais dos estômagos de suínos. Portanto, é recom...

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Divulgações

Os autores não têm nada para divulgar.

Agradecimentos

Este trabalho é apoiado por pesquisas inovadoras de tecnologia médica Kyoto & sistema de suporte de desenvolvimento e pelo programa de investigação de translação; Promoção estratégica para aplicação prática da tecnologia médica inovadora (TR-SPRINT) do Japão agência para pesquisa médica e desenvolvimento (AMED).

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
peso (153,1 g)
polia de tipo fixoH.H.H. FABRICAÇÃOVS25
fio de aço inoxidável com um diâmetro de 0,45 mmNissa ChainCut wire Y-5
clipe de aço inoxidável de largura 147 mmKOKUYOnenhum
fio chave de aço inoxidável com um comprimento de 12 cmNissa ChainP-702
gancho em forma de S de aço inoxidávelTRUSCO NAKAYAMATCS1.2
com trava em aço inoxidável Gancho em forma de SMizumoto Machine MfgB2054
base retangular de madeira (45 x 60 cm)nenhumnenhum placa
de borracha (5 x 5 cm)nenhumnenhum medidor
de altura digitalSeringa
2,5 mLTerumoSS-02SZ
agulha de calibre 23TerumoNN-2332R
MucoUpBoston Scientificnenhum0,4% de hialuronato de sódio (HA)
solução salina (20 mL)Otsuka Pharmaceuticalnenhumsolução salina normal (NS)
GraphPad Prism 7 softwareGraphPad Incnenhum
Mitutoyo HDS-20C

Referências

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