Transferência de embriões minimamente invasivos e vitrificação embrionária na fase de embrião ideal em modelo de coelho

Resumo

As técnicas reprodutivas assistidas (ARTs) estão em avaliação contínua para melhorar os resultados e reduzir os riscos associados. Este manuscrito descreve um procedimento de transferência de embriões minimamente invasivo com um protocolo de criopreservação eficiente que permite o uso de coelhos como um modelo animal ideal de reprodução humana.

Resumo

Técnicas reprodutivas assistidas (ARTs), como cultura embrionária in vitro ou criopreservação embrionária, afetam os padrões de desenvolvimento natural com conseqüências perinatais e pós-natais. Para garantir a inocuidade das aplicações de arte, são necessários estudos em modelos animais. Além disso, como último passo, estudos de desenvolvimento embrionário necessitam de avaliação de sua capacidade de desenvolver progênies saudáveis a termo. Aqui, a transferência de embriões para o útero é indispensável para realizar qualquer experimento relacionado a artes.

O coelho tem sido usado como um organismo modelo para estudar a reprodução de mamíferos há mais de um século. Além de sua proximidade filogenética com a espécie humana e seu pequeno tamanho e baixo custo de manutenção, tem características reprodutivas importantes, como a ovulação induzida, uma cronologia do desenvolvimento embrionário precoce semelhante aos humanos e uma curta gestação que nos permitem estudar facilmente as conseqüências da aplicação ART. Além disso, as artes (tais como a injeção intracytoplasmic do esperma, a cultura do embrião, ou a criopreservação) são aplicadas com eficiência apropriada nesta espécie.

Usando a técnica de transferência de embriões laparoscópica e o protocolo de criopreservação apresentado neste artigo, descrevemos 1) como transferir embriões através de uma técnica fácil, minimamente invasiva e 2) um protocolo eficaz para armazenamento a longo prazo de coelhos embriões para proporcionar capacidades logísticas flexíveis no tempo e a capacidade de transportar a amostra. Os desfechos obtidos após a transferência de embriões de coelhos em diferentes estágios de desenvolvimento indicam que a mórula é o estágio ideal para recuperação e transferência de embriões de coelhos. Assim, é necessária uma transferência de embriões oviductais, justificando o procedimento cirúrgico. Além disso, as mórulas do coelho são vitrificadas com sucesso e transferidas laparoscopically, provando a eficácia das técnicas descritas.

Introdução

Com os objetivos de contornar a infertilidade humana ou melhorar a disseminação de gado de alto valor genético e preservar os recursos genéticos animais, um conjunto de técnicas denominadas coletivamente tecnologias de reprodução assistida, como a superovulação, em fertilização in vitro , cultura embrionária ou criopreservação, foram desenvolvidas^1,2. Atualmente, tratamentos hormonais são administrados para estimular os ovários e produzir um grande número de folículos ovarianos antrais¹. Os oócitos coletados desses folículos podem ser amadurecidos, fertilizados e desenvolvidos ....

Protocolo

Todos os procedimentos experimentais utilizados neste estudo foram realizados de acordo com a diretiva 2010/63/UE CEE para experimentos com animais e revisados e aprovados pelo Comitê de ética para experimentação com animais da Universitat Politècnica de València, Espanha (código de investigação: 2015/VSC/PEA/00170). XGD, FMJ, MPVC e JSV detém um certificado de autorização emitido pela administração governamental Valenciana para experimentar em animais. A XGD está autorizada a supervisionar in situ o bem-estar e o cuidado dos animais durante o experimento.

1. transferência de embriões

1. Preparação de fêmeas receptoras

Resultados

A transferência laparoscópica minimamente invasiva de embriões frescos ou vitrificados coloca o coelho entre os melhores animais modelo para estudos reprodutivos. A tabela 1 mostra os resultados do et fresco em diferentes estágios de desenvolvimento (Figura 4) dos embriões transferidos. A taxa de sobrevida ao nascimento (percentual de embriões resultando em um filhote) provou a eficácia da técnica laparoscópica descrita neste trabalho. Os val.......

Discussão

Desde o primeiro caso de nascimento documentado ao vivo de embriões transferidos⁹, esta técnica e as espécies de coelhos tornaram-se cruciais em estudos reprodutivos. Além disso, estudos de pesquisa de embriões envolvendo manipulação, produção, criopreservação, etc. exigem como último passo a avaliação da capacidade embrionária para gerar progênies saudáveis a termo. Portanto, a técnica de transferência de embriões é indispensável^{13,28<.......}

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Albumina de soro bovino (BSA)	VWR	332
Cloridrato de buprenorfina	Alvet Escartí	626	A encomendar por um veterinário autorizado.
Acetato de Buserelina	Sigma Aldrich	B3303
Sabonete de digluconato de clorexidina	Alvet Escartí	0265DCCJ500B
Solução de digluconato de clorexidina	Alvet Escartí	0265DCCA500B
CO2	Air Liquide	99921	CO2 N48.
Incubadora de CO2	Fisher scientific	15385194
Dimetilsulfóxido Sigma	Aldrich	W387509
Dulbecco' s solução salina tamponada com fosfato (DPBS)	Sigma Aldrich	D5773	Sem cloreto de cálcio.
Barbeador elétrico	Oster Golden A5	078005-140-002
Câmera endoscópica	Optomic Spain S.A	OP-714
Endoscópio trocarte com válvula de folheto de silicone	Karl Storz Endoscopia Ibé rica S.A.	30114GK	Modelo de trocarte leve.
Enrofloxacina	Alvet Escartí	9993046	A encomendar por um veterinário licenciado.
Agulha epicraneal 23G	Alvet Escartí	514056353	Agulhas menores também podem ser usadas.
Cateter epidural	Vygon corporate	187.10
Agulha epidural	Vygon corporate	187.10
Etilenoglicol	Sigma Aldrich	102466-M
Pomada para os olhos	Alvet Escartí	5273
Cloridrato de cetamina	Alvet Escartí	184	A encomendar por um veterinário licenciado.
Equipamento de laparoscopia	Karl Storz Endoscopia Ibé rica S.A.	26003 AA	Hopkins® Laparoscópio, laparoscópio de 0 mm de visão reta, 30 cm de comprimento, canal de trabalho de 5 mm.
Fonte de luz	Optomic Spain S.A	Fibrolux 250
Nitrogênio Líquido	Air Liquide	P1505XXX
Insuflador Mecânico de CO2	Karl Storz Endoscopia Ibé rica S.A.	Endoflator®
Meloxicam	Alvet Escartí	9993501	A encomendar por um veterinário licenciado.
Placas de Petri, 35-mm	Sigma Aldrich	CLS430165-500EA
Curativo de plástico (Nobecutan)	IBOR medica	7140028
Canudo de plástico 0,25 mL	IMV - tecnologias	6431
Solução de iodeto de povidona	Alvet Escartí	02656DPYS500S
Tesoura	ROBOZ	RS-5880	Qualquer tesoura reta de aço de grau cirúrgico regular funcionará.
Tubo de silicone para insuflador	Karl Storz Endoscopia Ibé rica S.A.
Estereomicroscópio	Leica	MZ16F	Existem opções mais baratas, como Leica MZ8 ou Nikon SMZ-10 ou SMZ-2B, para citar algumas.
Luvas Estéreis	Alvet Escartí	087GL010075
Bata estéril	Alvet Escartí
Máscara estéril	Alvet Escartí	058B15924B
Straw Plug	IMV - technologies	6431
sacarose	Sigma Aldrich	S7903
de 11750425		científica	Fisher de 1 mL
de 11773313		científica Fisher	de 5 mL
	IMV - technologies	17722
Banho-maria	RAYPA	BAE-4
Xilazina	Alvet Escartí	525225	A ser encomendado por um veterinário licenciado.
Coelhos	Universitat Politè cnica de Valè	ncia Linha A	Outras linhas maternas, como Linha V ou Linha HP, podem ser usadas.

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