Artigo de método

Síntese e caracterização de 1,2-Ditiolano modificado peptídeos auto-montagem

DOI:

10.3791/58135

⸱

20 de agosto de 2018

 ,  , 
1Department of Chemistry and Biochemistry, Fairfield University

Neste artigo

Resumo

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Um protocolo para a síntese de um 1,2-Ditiolano modificado de peptídeo e a caracterização das estruturas supramoleculares resultantes do peptide auto-montagem.

Resumo

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Este relatório centra-se na síntese de um N-terminal 1,2-Ditiolano modificado auto-montagem de peptídeo e a caracterização dos resultante Self montadas estruturas supramoleculares. A rota sintética tira proveito da síntese do peptide de fase sólida com o engate em resina Ditiolano precursor da molécula de, 3-(acetylthio) -2-ácido (acetylthiomethyl) e o tioacetato assistida por microondas deprotection do peptide N-terminal antes de clivagem final da resina para produzir o 1,2-Ditiolano modificado do peptide. Após a purificação de cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC) do peptide 1,2-Ditiolano, derivado do núcleo de nucleação do peptide Aβ associado com a doença de Alzheimer, o peptídeo é mostrado a auto-montagem em fibras de amiloides Cruz-β. Protocolos para caracterizar as fibras amiloides por espectroscopia de infravermelho-transformada de Fourier (FT-IR), espectroscopia de Dicroísmo circular (CD) e microscopia eletrônica de transmissão (TEM) são apresentados. Os métodos de modificação do N-terminal com um grupo de 1,2-Ditiolano bem caracterizadas péptidos auto-montagem agora podem ser explorados como sistemas modelo para desenvolver estratégias de modificação pós-montagem e explorar o dinâmica química covalente superfícies de nanofibras de peptídeo supramolecular.

Introdução

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Robusta peptídica formando a química envolvida na síntese do peptide de fase sólida e a capacidade de controlar a composição e o comprimento da sequência fazer os peptídeos que auto-montagem em estruturas supramoleculares um campo fortemente pesquisado. Os fatores que controlam e estabilizar a estrutura Self montada do peptide, incluindo cadeia lateral estérica e interações eletrostáticas, ligações de hidrogênio e efeitos hidrofóbicos1, servem como um conjunto de regras de design. Como a investigação sobre essas regras de design fundamental continua a progredir, o próximo passo lógico na peptídeo auto-montagem envolve expandir a diversidade de funções e estruturas do peptide-baseado. Ao montar auto peptídeos são um biomaterial versátil que foram usados para muitas aplicações biomédicas ajustando o peptídeo sequência ou conjunto condições2,3,4, o desenvolvimento de estratégias para modificações pós-montagem do peptide nanofibras5,6,7,8,9 continua a ser uma área relativamente inexplorada.

Bissulfeto dinâmico intercâmbio e tiol química na superfície de estruturas supramoleculares é uma área que tem potencial para produzir biomateriais novos e funcionais. A incorporação de partes de 1,2-Ditiolano (comumente um derivado do ácido lipoico (la) ou asparagúsico (aa)) têm sido relatados em lipossomas sistemas10,11,12,de copolímeros bloco13e como organizando as âncoras às superfícies14,15. Neste documento, nós relatamos a síntese e caracterização de um peptídeo de auto-montagem derivado do núcleo de nucleação do peptide Aβ associado com a doença de Alzheimer que é modificada no N-terminal com um grupo funcional de 1,2-Ditiolano16, 17. As fibras supramoleculares resultantes agora servem como uma plataforma experimental para estudar a reatividade de bissulfeto-troca e tiol na superfície supramolecular de fibras amiloides18.

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Protocolo

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1. síntese e purificação de 1,2-Ditiolano modificado do Peptide

  1. Síntese do precursor de Ditiolano, 3-(acetylthio) -2-(acetylthiomethyl) ácido propanoico19.
    1. Adicionar 1 g de 3-bromo - 2-(bromomethyl) ácido propiônico (1 equiv) dissolvido em uma quantidade mínima de 1 M NaOH (aproximadamente 4 mL) para um balão de fundo redondo de 25 mL reação agitando a 55 ° C. Selar o balão de reação com um septos e coloque sob atmosfera de nitrogênio.
    2. Preparar uma solução contendo 1,49 g de tioacetato de potássio (3.2 equiv) em 4 mL de água desionizada e 3 mL de ácido sulfúrico de 2 M (H2SO4) para criar tioacético ácido em situ.
    3. Puxe a solução ácida tioacético em uma seringa de plástico descartável 10 mL e coloque uma agulha na seringa. Adicione a mistura de gota a gota no balão de reação por perfuração através de septos com a agulha. Continuar a reação durante a noite a 55 ° C.
    4. Monitore a reação por cromatografia em camada fina (TLC) em placas de sílica gel 60 F254 usando uma mistura de metanol e diclorometano (1:9). Visualize o progresso de reação pela mancha verde de bromocresol. O produto tem um Rf = 0,57.
    5. Depois que a reação é completa e refrigeração à temperatura ambiente, acidificar a mistura de pH de 1 com 2 M de H2então4. Um óleo amarelo separa fora da solução.
    6. Extrair o produto com clorofórmio frio (40 mL x 3). Combine as camadas orgânicas e secar sobre sulfato de magnésio. Remova o clorofórmio sob pressão reduzida.
    7. Confirme a identidade do produto isolado, 1, por espectroscopia de ressonância magnética nuclear (NMR), como mostrado nas Figuras 1B e C. Esperar os seguintes resultados: 1H NMR, CDCl3, 300 MHz: d = 10.1 (b, 1 H) 3.2 (m, 4h), 2.9 (m, 1 H), 2.4 (s, H 6); 13 C NMR, CDCl3, 75 MHz: d = 195.1 (CH3COS-), 177.6 (-COOH), 45,1 (-CH2S), 30.5 (C. H), 29,2 (-SCOCH3).
      Nota: O produto é um óleo amarelo e tem um rendimento total de 83%. Utilize o produto sem mais purificação.
  2. SPPS e acoplamento na resina de Ditiolano Precursor
    Nota: A síntese do peptide de fase sólida descrita abaixo foi realizada em um sintetizador de peptídeo automatizado, seguindo o protocolo recomendado do fabricante. Configurações e reagentes podem ser adaptados para outros instrumentos comerciais ou ao usar aminoácidos especializados.
    1. Pesar 0,156 g de resina de 4-methylbenzhydrylamine (MBHA) de amida de Rink (0,1 mmol) e coloque em um recipiente de reação. Inche a resina em dimetilformamida (DMF) durante pelo menos 15 minutos antes do início da síntese.
    2. Pesagem para fora 4 equivalentes de cada fluorenylmethyloxycarbonyl (Fmoc) protegido aminoácido (0,4 mmol) na sequência e 0,152 g de N, N, N', N'- tetrametil-O-(1H- benotriazol-1-yl) Hexafluorofosfato de urânio (0,4 mmol, HBTU) para cada aminoácido na sequência. Cada cartucho contém o aminoácido Fmoc-protegido e HBTU.
    3. Depois de executar todos os pre-síntese verifica para o sintetizador (reencher os reagentes, liberadas linhas de reagente e pressurizado todos os frascos de reagente), coloque os cartuchos de aminoácido no carrossel no C' n ' direção do terminal. Coloque um cartucho vazio após a posição final de aminoácidos para a etapa final de desproteção de Fmoc N-terminal.
    4. Sintetiza o peptídeo usando as configurações padrão e recomendadas.
      1. DePROTECT o grupo de Fmoc da resina com 5 mL de piperidina de 20% em DMF (5 min x 2).
      2. Lave a resina com DMF (6 x 5 mL) antes da etapa de acoplamento.
      3. Para um passo único acoplamento, adicione 4 mL de 0,4 M N-methylmorpholine em DMF para o aminoácido Fmoc-protegido e HBTU. Ativar a solução de aminoácido Fmoc-protegido por 30 s antes de transferir a solução para o recipiente de reação.
        Nota: O sintetizador de peptídeo automatizado mistura da resina e a solução pela subida N2 gás cada 30 s por 20 min enquanto a reação de acoplamento leva a lugares. Para a síntese do peptide manual, coloque o recipiente de reação em um agitador orbital a baixa velocidade para a duração da etapa de acoplamento.
      4. Escorra a solução e lavar a resina com DMF (3 x 5 mL).
      5. Repita as etapas 1.2.4.1 através de 1.2.4.4 para cada aminoácido Fmoc-protegido no C' n '-direção de terminal para sintetizar o peptídeo de interesse.
    5. Após a etapa final de desproteção N-terminal, transferi a resina uma seringa descartável fritada. Lave a resina com DMF (3 x 5 mL) e diclorometano (DCM, 3 x 5 mL).
      Nota: A resina pode ser armazenada após DCM lavagem num exsicador de vácuo. Se a resina foi armazenada antes do engate, certifique-se para inchar a resina em DMF antes da reação de acoplamento.
    6. Alguns o precursor de Ditiolano (1) para N-terminal do peptide na resina, adicionando 4 equivalentes de 1, 5ml de DMF, 4 equivalentes de HBTU e 10 equivalentes de N, N-diisopropylethylamine (DIPEA). Pre-ative a mistura de acoplamento por 10 min antes de adicionar à resina contendo seringa fritada.
    7. Agite a reação de acoplamento para 2 h. Após 2 h, lave a resina com DMF (3 x 5 mL) e repetir a reação de acoplamento com agitação durante a noite.
    8. Após o segundo acoplamento, lave a resina com DMF (3 x 5 mL) e DCM (3 x 5 mL).
      Nota: A resina pode ser armazenada neste momento sob vácuo, até o decote.
  3. Tioacetato desproteção e clivagem de peptídeo de resina
    1. Para deprotect o grupo de tioacetato do precursor do Ditiolano N-terminal, transferir a resina seca para um tubo de reação de microondas de 10 mL e adicione 2 mL de DMF. Permitir que a resina a inchar, adicionar uma barra de agitação magnética pequena para o navio e re-suspender com baixa velocidade de agitação magnética por 15 min.
    2. Adicionar 2 mL de hidróxido de amônio concentrado, a embarcação da reação com os septos do silicone do tampão e coloque o recipiente de reação em um reator de microondas usando as configurações de microondas de 75 ° C por 45 min com agitação.
    3. Após a reação de microondas completa, transferi a resina uma seringa limpa descartável fritada. Lave com DMF (2 x 5 mL) e metanol (MeOH, 2 x 5 mL).
    4. Adicione uma solução de hidróxido de amônio concentrado em metanol (1:4), para um volume total de 5 mL. Deixe a tremer durante a noite para aumentar a oxidação intramolecular de ligação dissulfeto no anel Ditiolano.
    5. Lave a resina com MeOH (2 x 5 mL) e DCM (3 x 5 mL).
      Nota: A resina seca pode ser armazenada num exsicador de vácuo neste ponto.
    6. Adicione o cocktail de clivagem para a resina contendo seringa agitando suavemente para 1,5 h. O cocktail de clivagem usado é 95% o ácido trifluoroacético (TFA), 2,5% triisopropylsilane (dicas) e 2,5% de água em um volume total de 5 mL.
      Cuidado: Trabalho sob coifa química. TFA é volátil e corrosivo.
      Nota: Para a maioria de sequências peptídicas e aminoácido sidechain proteger grupos, a solução acima de cocktail clivagem é suficiente; no entanto, coquetéis de clivagem alternativos podem ser necessários para certa cadeia lateral de ácido aminado proteger grupos (em particulares peptídeos contendo Cys, Met, Trp e Arg) ou outra resina química20.
    7. Precipitar o peptídeo bruto em 25 mL de frio em um tubo cónico de 50 mL de éter dietílico por adição gota a gota da seringa fritada. O peptídeo precipita-se como um sólido branco. Pelota do peptide por centrifugação a 1300 x g durante 10 min. decantar cuidadosamente o éter etílico em um recipiente separado para recolha de resíduos.
    8. Adicionar mais 25 mL de éter dietílico para o tubo cônico e ressuspender o precipitado pela utilização do vortex. Repetir a centrifugação a 1300 x g por 10 min e decantar o éter dietílico novamente. Seque a pelota sob vácuo.
  4. Purificação de 1,2-Ditiolano modificado do Peptide
    Nota: Purifica o peptídeo bruto por HPLC-fase reversa. Coletar e combinar os picos do peptide e confirmar a massa por espectrometria de massa MALDI-TOF.
    1. Dissolva a pelota crua peptídeo em quantidade mínima de acetonitrilo com 0,1% TFA. Devido a hidrofobicidade do peptide e propensão de agregação, aquece lentamente a amostra a 40 ° C, para auxiliar na solubilidade.
      Nota: Evite maiores temperaturas e sonication do peptide para evitar potenciais bissulfeto troca reações21,22,23.
    2. Para preparar 1 mL de peptídeo bruto para a purificação de HPLC, adicione 400 μL de estoque concentrado peptídeo em acetonitrila para 600 μL de H2O com 0,1% TFA e filtro através de um filtro de seringa 22 μm dentro de um frasco de HPLC. Um isopropanol 5% adicionais pode ser adicionado para evitar a precipitação e a agregação de peptídeo.
    3. Purificar o peptídeo com C-18 semipreparativa coluna com uma vazão de 3 mL/min, ao longo de um gradiente linear de 15-55% acetonitrila em 20 min. conjunto dos detectores de UV para 222 nm (espinha dorsal Amida) e 330 nm (ligação dissulfeto). Coletar e combinar os picos de interesse (Figura 2A).
    4. Confirme a massa de produto de peptídeo pelo espectrômetro de massa MALDI-TOF no modo reflectron (Figura 2B). Para análise, misturar 0,5 μL do pico coletado na placa MALDI com 0,5 μL de matriz de ácido (DHB) 2,5-benzoico (10 mg/mL em 50% acetonitrila, 0,1% DHB TFA).
      Nota: Comum adutos em MALDI-TOF espectrometria de massa incluem o sódio e o sal de potássio aduto ([M + nd]+ e [M + K]+) picos. Dessalinização da amostra antes da análise recomenda-se a picos de sal aduto suprimem o sinal do principal pico [M + H]+ . Além disso, um pico de oxidado de [M + O]+ também é detectado no peptídeo de 1,2-Ditiolano modificado. Um relatório sobre laser induzida por oxidação da ionização de MALDI usando DHB matrix sugere que fatores incluindo a concentração da amostra, solvente e intensidade do laser podem ser modificados para limitar o MALDI induzida por oxidação artefato24.
    5. Após a confirmação da correta massa MALDI-TOF lyophilize o peptídeo após congelamento flash. Manter o pó liofilizado peptídeo sob vácuo até montagem.

2. caracterização de Supramolecular auto-montagem estruturas

  1. Formação de fibras amiloides
    1. Para preparar a auto-montagem solução, pese 1 mg do pó do peptide usando uma balança analítica. Dissolver em uma mistura (pH 7,5) de 20% acetonitrila e 10 mM (4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid (HEPES) em um tubo de microcentrifugadora de 1,5 mL, para uma concentração final da mistura de montagem de peptídeo de 1 mg/mL. Vórtice a solução de montagem e deixar de reunir-se na temperatura ambiente.
  2. Caracterização espectroscópica de fibras amiloides
    1. Siga o processo de montagem do peptídeo via transformada de Fourier espectroscopia de infravermelho (FTIR) todos os dias. Um pico amplo, centrado em torno de 1670 cm-1 é a assinatura de IR decorrentes de peptídeos desmontados em amostra17. As amostras de montagem de peptídeo costumam levam uma ou duas semanas para o amplo pico desmontado desaparecer e alcançar a maturação.
      1. Seco, uma alíquota de 8-10 μL da solução de montagem como um filme fino sobre o cristal de diamante ATR. Monitore o desaparecimento de um pico de água grande e amplo de 1640 a 1630 cm-1 , como as formas de película seca.
      2. Aquisição de espectros de IR de 1500-1800 cm-1 , com média de 50 digitalizações com resolução de 2 cm-1 . Adquirir e subtrair as varreduras em segundo plano antes de cada verificação de amostra. A assinatura de IR para a montagem de β-folha é um pico afiado entre 1625 e 1635 cm-1 (Figura 3A)25,26.
    2. Caracteriza o assembly de peptídeo em estruturas supramoleculares ricos de β-folha por Dicroísmo circular (CD). Grave os espectros usando spectropolarimeter um CD com um sistema de controle de temperatura Peltier.
      1. Adicionar 30 μL da solução de montagem em um microcuvette de comprimento de caminho de 0,1 mm.
        Nota: O titular de uma célula é necessária para fixar e posicionar a célula de comprimento de caminho mais curto no instrumento.
      2. Para cada espectro, definir o instrumento de CD para os seguintes parâmetros: digitalização de comprimentos de onda de 300 nm a 180 nm, taxa de exploração de 100/min, largura de banda de 1 nm, 25 ° C, média de três exames.
      3. Coletar um espectro do buffer (20% acetonitrila/10 mM HEPES, pH 7,5) e subtrair de cada amostra de verificação como um controle. A assinatura de CD para β-folhas é que uma mínimo de elipticidade centrado em torno de 220 nm (Figura 3B)27.
  3. Microscopia de fibras amiloides
    1. Permitir que duas a três semanas para as amostras de peptídeo amadurecer-se em estruturas supramoleculares ricas de β-folha.
      Nota: Os módulos (assemblies) pode ser fotografada usando microscopia eletrônica de transmissão (TEM) em fases anteriores do processo de montagem também.
      1. Adicionar 10 μL da solução de montagem de peptídeo para a superfície da grade de carbono TEM.
        Nota: tenha cuidado para não tocar a ponta da pipeta para a superfície da grade. Alta precisão, de fecho automático pinças são usadas para segurar a grade TEM durante a preparação.
      2. Espere 1-2 min para permitir que os assemblies de adsorção na superfície da grade. Retire o excesso amostra, tocando o papel de filtro para a borda da grade.
      3. Prepare uma mancha de acetato de uranilo 2% adicionando 100 μL de água desionizada para solução de acetato de uranilo 4% comercialmente disponível. Adicionar 10 μL da mancha de acetato de uranilo de 2% para a superfície da grade e incubar durante 2-3 min. Após a incubação, remova mancha em excesso, tocando o papel de filtro para a borda da grade.
      4. Coloca as grades TEM num exsicador de vácuo durante a noite. Armazenar sob vácuo até imagens.
      5. Imagem as amostras preparadas com temperatura (Figura 3). Parâmetros típicos para microscopia são como segue: imagens em ampliações variando de 9.300 X 23, 000 X, filamento de tungstênio com uma tensão de aceleração de 120 kV.
        Nota: ImageJ pode ser usado para medir a largura média da fibra das estruturas supramoleculares de de imagens adquiridas TEM28.
        Atenção: Por favor consulte todas as folhas de dados relevantes de segurança (SDS) antes do uso. Vários produtos químicos usados na síntese, purificação, caracterização dos peptides auto-montagem descrita 1,2-Ditiolano modificado são corrosivos ou tóxicos e só deve ser usado sob uma coifa de química. Use sempre equipamento de protecção adequado (incluindo óculos de segurança, jaleco, calça comprida, sapatos fechados) quando se trabalha no laboratório.

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Resultados

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Afora a síntese de uma etapa inicial da molécula precursora de Ditiolano, o resto da síntese do peptide 1,2-Ditiolano modificado ocorre na sustentação contínua (figura 1A). A conversão da 3-bromo - 2-(bromomethyl) ácido propiônico para 3-(acetylthio) -2-ácido (acetylthiomethyl), o precursor de Ditiolano, é confirmado por 1H e 13C NMR (figura 1B e C) antes está acoplada à livre N-terminal ami...

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Discussão

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Este artigo discute os detalhes de tanto a síntese e a purificação de um peptídeo de auto-montagem de 1,2-Ditiolano modificado N-terminal e a caracterização das estruturas supramoleculares resultantes. A síntese do peptide 1,2-Ditiolano relatado aqui tem as vantagens, incluindo a síntese de uma etapa para produzir o precursor de Ditiolano, 3-(acetylthio) -2-ácido (acetylthiomethyl) e a resina no microondas reação de desproteção do precursor tioacetato grupo para render o moiety oxidado 1,2-Ditiolano, utilizando hidróxido...

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Divulgações

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Os autores não têm nada para divulgar.

Agradecimentos

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Os autores gostaria de agradecer o Dr. B. Ellen Scanley para sua formação técnica e ajudar usando a temperatura no centro da Universidade (CSCU) e faculdades do estado de Connecticut para nanotecnologia e Dr. Ishita Mukerji na Universidade wesleyana para acesso ao seu CD Espectrofotómetro. O trabalho relatado foi apoiado em parte pelo Instituto de Ciências da Universidade de Fairfield, a NASA Connecticut Space Grant Consortium e pela National Science Foundation sob Grant número-1624774.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Resina MBHA de amida de rinque, alta cargaGyros Protein TechnologiesRAM-5-HLEvite o contato com a pele e os olhos; não inale
N,N-DimetilformamidaFisher ScientificD119-4Líquido e vapor inflamáveis; irritante para os olhos e a pele; Use equipamentos de proteção individual; manter afastado de chamas abertas
Fmoc-L-Val-OHGyros Protein TechnologiesFLA-25-VUsar equipamento de proteção individual; não inalar
Fmoc-L-Leu-OHGyros Protein TechnologiesFLA-25-LUsar equipamento de proteção individual; não inalar
Fmoc-L-Lys(Boc)-OHGyros Protein TechnologiesFLA-25-KBCUsar equipamento de proteção individual; não inalar
Fmoc-L-Phe-OHGyros Protein TechnologiesFLA-25-FUse equipamento de proteção individual; não inale
Fmoc-L-Ala-OHGyros Protein TechnologiesFLA-25-AUse equipamento de proteção individual; não inale
Fmoc-L-Gln(Trt)-OHGyros Protein TechnologiesFLA-25-QTUse equipamento de proteção individual; não inale
N,N,N′,N′-Tetrametil-O-(1H-benzotriazol-1-il)urônio hexafluorofosfatoGyros Protein Technologies26432Causa irritação na pele, olhos e vias respiratórias; não inalar; use sob o capô ou em área bem ventilada
0,4 M N-metilmorfolina em DMFGyros Protein TechnologiesPS3-MM-Laltamente inflamável; usar equipamento de proteção individual; mantenha longe do calor e mantenha o recipiente bem fechado; não inale ou engula; lave bem a pele após manusear
20% de piperidina em DMFGyros Protein TechnologiesPS3-PPR-LCausa queimaduras graves nos olhos e na pele; Líquido e vapor inflamáveis; Não inale
diclorometanoFisher ScientificD37-4Pode causar câncer; Não inalar; Use equipamento de proteção individual; use apenas sob o capô; se contatado levante-se com água por pelo menos 15 minutos e obtenha atendimento médico
acetonitrilaFisher ScientificA998-4Inflamável; irritante para os olhos; Use equipamentos de proteção individual; Use apenas sob uma hotte; mantenha longe de chamas abertas ou superfícies quentes; se contatado enxágue com água por pelo menos 15 minutos e obtenha atendimento médico
trifluoroacético FisherScientificA116-50Causa queimaduras graves; não inalar; prejudicial à vida aquática; usar equipamento de proteção individual; usar somente sob exaustor; se contato enxaguar com água por pelo menos 15 minutos e obter atenção médica imediata
acetato de uranila a 4%Microscopia Eletrônica Sciences22400-4Não inalar; nocivo para a vida aquática
Ácido 4-(2-hidroxietil)piperazina-1-etanossulfónicoAcros OrganicsAC172571000Não inalar; utilizar no exterior ou em áreas bem ventiladas
Gás nitrogénioTechAirTeor sob pressão, pode explodir se aquecido
Ácido 3-bromo-2-(bromometil)propiónicoAlfa AesarAAA1963014Não inalar; causa irritação na pele e nos olhos; corrosivo
hidróxido de sódioFisher ScientificS318-100Use equipamento de proteção individual; use apenas sob a coifa; se entrar em contato, enxágue a área por pelo menos 15 minutos e obtenha atendimento médico
tioacetatode potássio Acros OrganicsAC221300250Causa irritação na pele e nos olhos; não inale; use equipamento de proteção individual
ácido sulfúricoFisher ScientificSA213Causa queimaduras; manter afastado da água; manter longe de materiais combustíveis; não inalar; usar equipamentos de proteção individual; se entrar em contato enxágue a área por pelo menos 15 minutos e obtenha atendimento médico
clorofórmio-dAcros OrganicsAC320690075Possível risco de câncer; irritante para a pele e os olhos; não inalar; Use equipamentos de proteção individual; use apenas sob a hotte; Se entrar em contato com a área de enxágue por pelo menos 15 minutos e obtenha atendimento médico
clorofórmioFisher ScientificC298-4Possível risco de câncer; irritante para a pele e os olhos; não inalar; Use equipamentos de proteção individual; use apenas sob a hotte; Se entrar em contato com a área de enxágue por pelo menos 15 minutos e obtenha atendimento médico
N,N-diisopropiletilaminaAcros OrganicsAC367841000Altamente inflamável; prejudicial à vida aquática; use equipamento de proteção individual; não engula
hidróxido de amônioFisher ScientificA669S-500Corrosivo; não inale
metanolFisher ScientificA452-4Líquido e vapor inflamáveis; usar equipamentos de proteção individual; não inalar; Se entrar em contato com a área de enxágue por pelo menos 15 minutos e obter atendimento médico
triisopropilsilanoSigma Aldrich233781Inflamável; use equipamento de segurança de proteção individual; mantenha o recipiente bem fechado
éter dietílicoFisher ScientificE138-1Extremamente inflamável; Irritante para a pele e os olhos; Use equipamento de proteção individual
Ácido 2,5-dihidroxibenzóicoSigma Aldrich39319-10x10MG-Fnão inalar; irritante para a pele e os olhos
ácido alfa-ciano-4-hidroxicinâmicoAlfa AesarAAJ67635EXK
c18 ponta zip-tipMilliporeZTC18S096
cloridrato de tris (2-carboxietil) fospinaThermo ScientificPI20490
gel de sílica 60 F254 folhas TLC revestidas de alumínioEMD Millipore1.05549.0001
Tubos de RMN de precisão de parede finaBel-Art6630005855mm OD
Seringas Norm-Ject totalmente plásticas AirTiteAL10
agulha descartávelBD PrecisionGlideBD 305185agulhas usadas são descartadas em recipiente de resíduos perfurocortantes
seringas fritas descartáveisTorviqSF1000LLseringas fritas de 10mL foram usadas no relatório, mas seringas maiores estão disponíveis se necessário para síntese em maior escala.
grade de carbonoTed Pella, Inc.CF200-Certifique-sede preparar amostras e coloração no lado da grade de carbono, não no lado de cobre brilhante das
pinças de fechamento automáticoMicroscopia Eletrônica Ciências78318-3Xpontas muito afiadas, comprimento: 120 mm
0,1 mm célula de comprimento de caminho curtoStarna Cells, Inc.20 / C-Q-0.1Tampas
vaso de 10mL frágeisCEM909210
Vasos de pressão de 10mLCEM908035
Aeris Coluna de HPLC Semi-PrepPhenomenex00F-4632-N0150 x 10mm
suporte de célulaStarna Cells, Inc.CH-2049Necessário ao usar células de comprimento de caminho curto
Sintetizador de peptídeos PS3Gyros Protein Technologies
DiscoverSP Reator de MicroondasCentrífuga CEM
HERMLEZ 206 Ausou um rotor fixo de 6x50 mL
HPLCShimadzuDetector UV
Espectrômetro de ressonância magnética nuclearAvance, Bruker
espectrômetro de massa MALDI-TOFAxima Confidence,
Tecnologia MillrockBT85A
Espectrômetro infravermelho por transformada de FourierTensor, Microscópio Eletrônico de Transmissão Bruker
Tecnai Spirit, FEIUsado com câmera digital CCD de fibra óptica Gatan Orius. Acessado no Centro CSCU de Nanotecnologia
Espectropolarímetro de Dicroísmo CircularJ-810, JASCOUsado com um controlador de temperatura Peltier de seis células. Acessado na Wesleyan University.
ácido da grade de de 300 MHz liofilizador Shimadzu Alpha

Referências

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